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1、实验一 普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察,主 讲:徐尔尼生命科学学院生物技术系,一、目的与要求 了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的 使用方法 学习并掌握油镜的原理和使用方法 了解细菌的三种基本形态,二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理1、普通光学显微镜的基本结构 普通光学显微镜的构造可分为两部分：1）机械装置：镜座、镜筒、镜臂、物镜转换器、载物台、标本移动螺旋、粗调螺旋和细调螺旋等部件组成。2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、虹彩光圈、光源等组成,普通光学显微镜基本构造,在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜配置的几种物镜中，油镜的
2、放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片和镜头之间加滴镜油，这主要又有如下两方面的原因：,二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理2、油镜的工作原理1）增加照明亮度2)增加数值孔径(NA)，提高显微镜的分辨率,三、实验器材1、标本片：细菌三形片2、试剂：香柏油、二甲苯3、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等,四、操作步骤1、观察前的准备 放置好显微镜 调节光 夹上标本片2、显微观察1）低倍镜观察（10）：调节粗调螺旋，使物镜与标本靠近，眼睛侧向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。找到目的物后，将它移至视野正中处。2）高倍镜观察（40）：旋动转换器换高倍镜观察。3
3、）油镜观察（100）：下降载物台，在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸在油中，刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调即可。,四、操作步骤3、显微镜用毕后的处理拔掉电源插头 下降载物台 取干净擦镜纸拭去镜头上的香柏油 取干净擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹 取干净擦镜纸擦去残留的二甲苯 将显微镜的各部位还原，物镜转成“八”字形，擦干净镜体，罩上防尘罩。,五、实验数据及处理结果 绘出你在油镜下观察到的细菌的三种形态及其不同细菌细胞的排列方式。,六、思考与讨论1、显微镜的构造分哪几部分？各部分有什么作用？2、用油镜观察时应注意那些问题？在载玻片和镜头之间加滴
4、什么油？起什么作用？3、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？下次实验项目名称：细菌的简单染色和革兰氏染色,增加照明亮度 油镜的放大倍数可达100，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。,从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时需在油镜和玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的镜油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。,增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率或分辨力（resol
5、ution or resolving power）是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：,式中：=光波波长，NA=物镜的数值孔径值。,光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.40.7 m），而数值孔径则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为：NA=nsin。式中为光线最大入射角的半数。它取决于物镜的直径和焦距，一般来说在实际应用中最大只能达到120，而n为介质折射率。由于香柏油的折射率（1.52）比空气及水的折射率（分别为1.0和1.33）要高，因此以香柏油作为镜头与玻片之间介质的油镜所能达到的数值孔径（NA一般在1.21.4）要高于低倍镜、高倍镜等物镜（NA都低于1.0）。若以可见光的平均波长0.55m来计算，数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨距离不小于0.4m的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2 m左右。,实验报告格式,一、实验项目名称二、实验目的三、实验基本原理四、主要仪器设备及耗材五、实验步骤六、实验数据及处理结果七、思考讨论题,
