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1、第四节 显微鉴定,显微鉴定(microscopical idenifi-ction)是利用显微镜来观察生药的组织构造、细胞形状以及内含物，描述显微特征，制定显微鉴别依据，用以鉴定生药品种和质量的重要手段之一。,一、显微鉴定的常用方法,显微鉴定组织鉴定：观察药材的切片或磨片，鉴别其组织特征，适合于完整的药材或粉末特征相似的同属药材的鉴别；粉末鉴定：观察药材的粉末制片或解离片鉴别其细胞分子及内含物的特征，适合于破碎、粉末状药材或中成药的鉴别。,鉴定者：需具有植（动）物解剖的基本知识，掌握制片的基本技术。鉴定时：根据观察的对象和目的，选择具有代表性的药材，制备不同的显微制片，依法进行鉴别。,植物性生
2、药,根、根茎、茎藤、皮、叶等类，制作横切片观察，必要时制纵切片；果实、种子类须作横切片及纵切片观察；木类须观察横切、径向纵切及切向纵切三个面。,鉴定叶、花、果实、种子、全草等类生药，可取叶片、萼片、花冠、果皮、种皮制表面片，以观察各部位的表面(皮)特征。可将生药作粉末片进行观察。,可制解离组织片，以观察某些细胞组织，如纤维、石细胞、导管等。对于中成药，可直接取目的物，选用不同试液制片，观察粉末的具有鉴别意义的组织、细胞及细胞后含物显微特征。,切片类型,横切片或纵切片切片方法徒手切片：1020m，最为简便、快速，较为常用。石蜡切片：便于教学用。滑走切片：有专用机器切制。冰冻切片：宜于科研，不利于
3、教学，无法染色。,解离组织片：可用氢氧化钾法，使细胞间质溶解，细胞分离后观察目的物。表面片：叶、花、果实、种皮等多用，可观察各部位的表皮特征。,粉末片：水合氯醛透化片；水合氯醛不透化片；醋酸甘油片或稀甘油片或水装片。磨片：观察矿物药，相当于固定 片。,目镜测微尺,观察细胞和后含物时，常需要测量其直径、长短(以m计)，作为鉴定依据之一，测量可用目镜测微尺进行。先将目镜测微尺用载台测微尺标化，计算出每一小格的m数，应用时将测得物的小格数，乘以每一小格的m数，即得所欲测定物的大小。,二、显微鉴定要点,(一)根类生药1、根类生药的组织构造双子叶植物：多为次生构造，表层为木栓组织；皮层一般已不存在；栓内
4、层发达呈皮层样，称次生皮层；韧皮部较发达；形成层环多明显；,木质部由导管、管胞、木纤维、木薄璧细胞及木射线组成；中央大多无髓。少数为初生构造，皮层宽，中柱小，木质部束及韧皮部束数目少，相间排列，初生木质部呈星芒状，一般无髓。,有异常构造（三生构造）：何首乌根的形成层环外方有数个复合维管束；牛膝根有数轮同心排列的维管束(维管束环的束间形成层不明显)；商陆根有数轮同心排列的形成层环及其所形成的三生构造；,单子叶植物 无木栓组织，其表皮细胞外壁有时增厚，也有表皮发育成数列根被细胞，壁木栓化或木化；皮层宽广，占根的大部分，内皮层凯氏点通常明显；中柱小，木质部束及韧皮部束数目多，相间排列成一圈。中央有髓
5、。,根类生药常有分泌组织，大多分布于韧皮部，有乳管、树脂道、油室或油管、油细胞等。根类生药中常有各种草酸钙结晶，如簇晶、方晶、砂晶或针晶等，兼有簇晶与针晶或砂晶与簇晶共生。纤维、石细胞及淀粉粒、菊糖的有无及其形状亦应注意。,2、根类粉末生药的观察木栓组织：多见，注意木栓细胞表面观的形状、颜色、壁的厚度，有的可见木栓石细胞(如党参)。导管：一般较粗，注意其类型、直径、导管分子的长度及末端壁的穿孔的形状及排列等。,石细胞：应注意形状、大小、细胞壁增厚形态和程度、纹孔形状及大小、孔沟密度等特征。纤维：观察时注意纤维的类型、形状、长短粗细等；注意纤维束的周围细胞是否含结晶形成晶鞘纤维。,分泌组织：注意
6、分泌细胞、分泌腔(室)、分泌管(道)及乳汁管等类型、形状、颜色、周围细胞的排列及形态等特征。结晶：大多为草酸钙结晶，偶有含硅质块的，应注意结晶的类型、大小、排列及含晶细胞的形态等。,淀粉粒：一般较小，应注意淀粉粒的多少、形状、类型、大小、脐点形状及位置、层纹等特征。,(二)根茎类生药,1、根茎类生药的组织构造 根据中柱、维管束的类型，区别其为蕨类植物、双子叶植物或单子叶植物的根茎。蕨类植物根茎：外层为厚壁性的表皮及下皮细胞，基本组织较发达。中柱的类型有：原生中柱、双韧管状中柱及网状中柱等。,双子叶植物根茎：有木栓组织；皮层中有时可见根迹维管束；中柱维管束无限外韧型；中心有髓。少数种类有三生构造
7、，髓部有复合维管束。单子叶植物根茎：外层为表皮；皮层中有叶迹维管束；内皮层明显；中柱中散有多数有限外韧维管束，也有周木维管束(如菖蒲)；多含草酸钙针晶束，存在于黏液细胞中。,2、根茎类粉末生药的观察：注意鳞茎、块茎、球茎常含多量较大的淀粉粒，其形状、大小、脐点、层纹以及复粒等特征是鉴别的重要依据；鳞茎的鳞叶表皮常可察见气孔；,单子叶植物根茎较易见到环纹导管；蕨类植物根茎一般只有管胞，无导管。,(三)茎藤类生药,1茎藤类生药的组织构造 根据维管束的类型及排列：双子叶植物茎单子叶植物茎,双子叶植物茎：草质茎：有表皮；皮层为初生皮层，有的可见内皮层；中柱鞘常分化为纤维或夹杂有石细胞；束中形成层明显；
8、次生韧皮部大多成束状或板状，少数呈筒状；髓射线较宽；髓较大。,木质茎：外层为木栓组织；皮层多为次生皮层；中柱鞘厚壁组织多连续成环或断续；形成层环明显；次生韧皮部及次生木质部呈筒状结构；射线较窄，细胞壁常木化；髓较小。,单子叶植物茎：最外层为表皮，基本组织中散生多数有限外韧维管束，中央无髓。裸子植物茎：木质部主为管胞，通常无导管。,2藤茎类粉末生药的观察除了无叶肉组织外，其它组织一般都可能存在。,(四)皮类生药,1皮类生药的组织构造 皮类生药：指裸子植物和双子叶植物的形成层以外的部分，以茎干皮的种类较多，根皮、枝皮的种类较少。木栓组织：注意层数、颜色、细胞壁的增厚程度；,皮层及韧皮部：有厚壁组织
9、存在，是为鉴定特征，要注意纤维和石细胞的形状、大小、壁的厚度、排列形式等。皮类生药常有树脂道、油细胞、乳管等分泌组织以及草酸钙结晶。,2皮类粉末生药的观察主要有木栓细胞、纤维、石细胞、分泌组织及草酸钙结晶等，都有鉴别意义。,(五)木类生药,1木类生药的组织构造 从三个切面观察组织构造：横切面：年轮、木射线宽度(细胞列数)、密度，导管等；径向纵切面：木射线的高度、长度及细胞类型等；,切向纵切面：观察木射线的形状(梭形或线状)、宽度、高度及类型(单列或多列)，同时观察导管、木纤维等。、木类粉末生药的观察以导管、韧型纤维、纤维管胞、木薄壁细胞的形态特征以及细胞后含物为主要鉴别点。,(六)叶类生药,1
10、叶类生药的组织构造 横切片观察：表皮：要注意上、下表皮细胞的形状、大小、外壁、气孔、角质层厚度，以及有无内含物，特别是毛茸的类型及其特征。,叶肉：注意栅栏组织细胞的形状、大小、层数及所占叶肉的比例和分布；叶脉：观察维管组织的形状、类型以及周围或韧皮部外侧有无纤维层。,2叶的表面制片 主要观察表皮细胞、气孔及各种毛茸的全形。注意上、下表皮细胞的形状，垂周壁及有无纹孔，角质层纹理，气孔的类型及副卫细胞数。,3叶类粉末生药的观察与叶的表面制片基本一致，但毛茸多碎断，粉末中还可见到叶片的横断面及晶体。,(七)花类生药,1花类生药的显微鉴定 根据不同的生药，将苞片、花萼、花冠、雄蕊或雌蕊等分别作表面制片
11、，或将完整的花作表面制片观察。苞片、花萼的构造，与叶相似。,2花类粉末生药的观察花粉粒：是鉴别花类生药的主要特征，注意其形状、大小、萌发孔形态、外壁构造及纹饰(理)等特征。花粉囊内壁细胞，毛茸；注意草酸钙结晶、分泌组织及色素细胞等。,(八)果实类生药,1果实类生药的组织构造 观察果皮的组织特征，由子房壁分化和增大形成的真果的果皮，可分为：外果皮：相当于叶的表皮，为1列表皮细胞，需注意的问题同叶类。,中果皮：相当于叶肉，为多列薄壁细胞，有细小维管束散布。内果皮：相当于叶的表皮，变异较大，有的为1层薄壁细胞，有的散在石细胞，有的为结晶细胞层，也有分化为纤维层。,2果实类粉末生药的观察外果皮细胞的形
12、状、垂周壁的增厚状况、角质层纹理以及非腺毛、腺毛的有无及中果皮、内果皮的细胞形态等特征。,(九)种子类生药,1种子类生药的组织构造重点观察种皮的构造，有的种皮只有1层细胞，多数的种皮由数种不同的细胞组织构成；,种子的外胚乳、内胚乳或子叶细胞的形状、细胞壁增厚状况；所含脂肪油、糊粉粒或淀粉粒等。,2种子类粉末生药的观察注意种皮的表面观及断面观形态特征；注意种皮支持细胞、油细胞、色素细胞的有无和形态；有无毛茸、草酸钙结晶、淀粉粒、分泌组织碎片等。,(十)全草类生药,大多为草本植物的地上部分，少数为带根的全株。全草类包括了草本植物药的各个部位，其显微鉴定可参照以上各类生药的鉴别特征。,(十一)菌类生
13、药,大多以子实体或菌核的形式入药。观察时应注意菌丝的形状、有无分枝、颜色、大小；团块、孢子的形态；结晶的有无及形态、大小与类型；应无淀粉粒和高等植物的显微特征出现。,(十二)动物类生药,因药用部位不同，可分为：动物体：应注意皮肤碎片细胞的形状与色素颗粒的颜色；刚毛的形态、大小及颜色；体壁碎片、骨碎片等特征。,分泌物、病理产物：注意团块的颜色及其包埋物的性质特征，表皮脱落组织，毛茸及其它细胞的形状、大小、颜色等特征，如麝香、牛黄等。,角甲类：注意碎块的形状、颜色、横断面和纵断面观的形态特征及色素颗粒颜色，如羚羊角等。,(十三)矿物类生药,主要应注意：晶体的大小、直径或长径；晶形的棱角、锐角或钝角
14、；色泽、透明度、表面纹理及方向、光洁度；偏光显微镜下的特征，如朱砂、石膏等。,(十四)中成药显微鉴别要点,中药丸散锭丹等成方制剂，大多直接用各种粉末生药及生药浸膏配制而成。显微鉴定是鉴定中成药丸散锭丹和制定品质标志的科学方法之一，对保证中成药的质量，有一定的科学意义和应用价值。,生药的粉末鉴定研究对于中成药的科学鉴定有重要作用。1了解组方生药、剂型和制法 熟悉处方中组成药物的显微特征是中成药鉴别的基础。中成药的显微鉴别要比中药材粉末鉴别复杂得多，制备方法及辅料等会产生一定的影响和干扰。,2.根据处方明确专属特征 中成药显微鉴定，一般根据处方，对各组成生药粉末特征作分析比较，选取各药具专属性的显
15、微特征，作为鉴别依据。,六味地黄丸是由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味药组成，每味药都有数个显微特征，大部分特征又有横向类别的交叉。选取六味药各具专属性的显微特征，这样六味药物均可鉴别。,三、扫描电镜等的应用,1偏振光显微镜（偏光显微镜）在偏光显微镜下，生药的鉴别要素在色彩上表现出一定的变化，可作为大多数植物、动物、矿物类生药的显微鉴别依据之一。,例如：淀粉：在偏光显微镜下呈现黑十字现象，不同类型的淀粉其黑十字形象不同；草酸钙结晶：类型多样，在偏光显微镜下呈不同的多彩颜色；,石细胞：在植物体内广泛分布，其细胞壁在偏光显微镜下呈亮黄色或亮橙黄色；纤维、导管、矿物类物质：在偏光显微镜下则呈强弱不同的色彩；动物的骨碎片、肌纤维、结晶状物、毛茸等也呈现出不同的偏光特性。,2扫描电子显微镜（扫描电镜）扫描电镜分辨率高，放大倍率5倍10万倍，能使物质的图像呈现显著的表面立体结构(三维空间)的特征，观察的样品制备操作又较简易，所以在生药鉴定，特别在同科属种间的表面结构的鉴别比较上，成为一种新的手段。,
