《芳酸类药物的分析》PPT课件.ppt

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1、第六章,芳酸及其酯类药物的分析,羧酸,芳酸,苯甲酸类,常见的芳酸及其酯类药物,氨甲苯酸,羟苯乙酯,丙磺舒（pKa3.4）,布美他尼,常见的芳酸及其酯类药物,水杨酸类,贝诺酯,其他芳酸类药物,氯贝丁酯,第一节 结构与性质,一、结构分析,包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐,共同点：苯环、羧基,不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基等）,二、性质,（一）物理性质,（1）固体 具有一定的熔点,（2）溶解性 游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂。,（二）化学性质,1.芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在36之间，属中等强度的酸或弱酸；,X、NO2、OH等吸电子

2、取代基存在使酸性增强,CH3、NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱,邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强,2.芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。,3.UV,4.IR,5.取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。,6.色谱法制剂分析,第二节 鉴别试验,一、FeCl3反应,具酚羟基或水解后能产生酚羟

3、基的药物,直接：水杨酸、双水杨酸酯、对氨基水杨酸钠 其分子结构中均具有酚羟基，在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液作用，生成紫堇色的配位化合物，可供鉴别。,间接：阿司匹林、贝诺酯其分子结构中均无游离酚羟基，与三氯化铁试液不发生显色反应。但其水溶液加热，或较长时间放置，或加少量碱，由于部分水解产生具有酚羟基的水杨酸，也可与三氯化铁试液作用。,阿司匹林 ChP（2010）鉴别（1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。,苯甲酸的碱性水溶液或苯甲酸钠的中性溶液，与三氯化铁试液作用生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀。,二、重氮化偶合反应,芳香第一胺类鉴别反应具芳伯氨基或

4、潜在芳伯氨基的药物,直接：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺 间接：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋氨苯砜、贝诺酯,三、水解反应,阿司匹林分子结构中具有酯键，与碳酸钠试液共热，水解生成水杨酸钠和醋酸钠，放冷后用稀硫酸酸化，析出白色的水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气，可供鉴别。,氯贝丁酯分子结构中具有酯键，在碱性溶液中可与盐酸羟胺作用生成异羟肟酸盐，在弱酸性条件下与三氯化铁试液作用生成紫色的异羟肟酸铁，可供鉴别。,羟苯乙酯的乙醇液煮沸后加硝酸汞，生成沉淀，上清液呈红色。,1.分解产物的反应苯甲酸钠可分解生成苯甲酸，苯甲酸具有升华性，可供鉴别。如将苯甲酸钠置于干燥试管中，加硫酸后，加热

5、，不炭化，但析出苯甲酸，随即在试管内壁上端凝结成白色升华物。,四、特殊反应,2.氧化反应 含硫的药物,3.异羟肟酸铁反应,六、IR,五、UV,第三节 特殊杂质检查,一、阿司匹林中水杨酸的检查,1.杂质来源 原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水解产生（贮存过程中水解产生）,阿司匹林中游离水杨酸的检查,杂质来源,a.生产过程中反应不完全,b.贮存过程中阿司匹林水解,紫堇色（有酚羟基）,检查原理,阿司匹林+Fe3+,（无酚羟基）,水杨酸+Fe3+,2.检查方法 对照法 反应原理 水杨酸与高铁盐反应 限量 原料：0.1%；阿司匹林片：0.3%；阿司匹林肠溶片：1.5%；阿司匹林栓：1.0%（HPLC

6、法）,其他杂质：乙酰水杨酸酐（ASAN）、乙酰水杨酰水杨酸（ASSA）、水杨酰水杨酸（SSA）,二、对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查,1.杂质来源 原料残存、脱羧产生,2.检查方法 ChP（2010）含量测定法（双相滴定法）。,利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨基酚溶于乙醚的性质，使二者分离后，在乙醚中加水适量，用盐酸滴定，控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚杂质限量。,三、羟苯乙酯中有关物质的检查BP（2011）反相TLC,四、甲芬那酸中特殊杂质的检查 铜盐 有关物质,五、氯贝丁酯中对氯酚及挥发性杂质的检查 GC,第四节 含量测定,一、酸碱滴定法,1.直接滴定法 pKa36,阿司匹林 ChP（20

7、10）取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后,加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,滴定度（T）：指每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。,滴定度的计算：被测药物（B）与滴定液（A）之间按一定的摩尔比进行反应：,（1）测定方法及计算 反应摩尔比为11,（2）讨论 中性乙醇 溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言。,优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（局部碱性过大，不断搅拌、快速滴定）酸性杂质干扰（如水杨酸）适用范围：

8、不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定,例 称取阿司匹林供试品0.3955g，溶于中性乙醇，用酚酞为指示剂，以氢氧化钠滴定液（0.1015mol/L）滴定到终点时，消耗氢氧化钠滴定液（0.1015mol/L）21.56ml，每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。计算阿司匹林的百分含量。,2.水解后剩余滴定法 酯的一般含量测定方法,阿司匹林,USP（33）方法：取本品约1.5g，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧

9、化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的硫酸滴定液（0.25mol/l）相当于45.04mg的C9H8O4。,2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O,剩余滴定：,水解：,优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰,原料药含量测定结果的计算,A、直接滴定法,B、剩余滴定法,T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的 mg 数,V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml）,V0滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）,F浓度校正因子,w供试品的质量,3.两步滴定法 阿司匹林片、阿司匹林肠溶片 氯贝丁酯,如阿司匹林片的测定：,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.

10、3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,第一步 中和,第二步 水解后剩余滴定,水解：,2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O优点:本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰,剩余滴定：,片剂含量测定结果的计算,剩余滴定法

11、,例 取标示量为0.3g的阿司匹林片10片，称出总重为3.5840g，研细后称取0.3484g，按药典方法测定。供试品消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L）23.84ml，空白试验消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L）39.88ml。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。求此片剂的标示量%。,二、亚硝酸钠滴定法 具芳伯氨基或潜在芳伯氨基（芳酰氨基水解或硝基还原）的药物,例:对氨基水杨酸钠,三.双相滴定法 芳酸碱金属盐,如苯甲酸钠 ChP(2010),溶剂：水乙醚,取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25m1、乙醚50ml及甲基橙指示液2

12、滴，用盐酸滴定液（0.5mo1/L）滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中,加乙醚20m1，继续用盐酸滴定液0.5mo1/L)滴定，随滴定随振摇，至水层显持续的橙红色。每1ml的盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于72.06mg的C7H5NaO2。,乙醚的作用是：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。,优点：消除了反应产物的干扰,四、紫外分光光度法1.直接紫外分光光度法 丙磺舒片 Ch.P（2010）,取本品10片，精密称定，研细，精

13、密称取适量（约相当于丙磺舒60mg），置200ml量瓶中，加乙醇150ml与盐酸溶液（9100）4m1，置70水浴上加热30min，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9100）2ml，用乙醇稀释至刻度，摇匀。于1cm吸收池中，以溶剂为空白，在249nm的波长处测定吸收度，按C13H19NO4S的吸收系数（）为338计算。,片剂，紫外分光光度法的吸收系数法,例.VitB1片UV法含量测定：取本品20片(规格 10mg/片)，精密称得重量1.4070g，研细，精密称取0.1551g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液(91000)约7

14、0ml，振摇15分钟，加盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5.0ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，在246nm处测得吸收度0.474，按C12H17ClN4OSHCl的吸收系数为421计算本片的标示量%。,2.离子交换紫外分光光度法 氯贝丁酯 强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，对照法定量测定氯贝丁酯含量,3.柱分配色谱紫外分光光度法USP（33）阿司匹林胶囊 可同时定量测定阿司匹林和水杨酸（1）水杨酸的限量测定固定相：FeCl3 SA保留，冰醋酸洗脱，306nm测水杨酸的量（2）含量测定固定相：NaHCO3 ASA、S

15、A保留冰醋酸洗脱，280nm测总量,反相高效液相色谱法中的离子抑制色谱法，内标法定量,五、HPLC 1.阿司匹林栓剂、肠溶胶囊、泡腾片 Ch.P（2010）,栓剂：,2.对氨基水杨酸钠 USP（33）离子对反相HPLC 内标法定量,3.丙磺舒 USP（33）离子抑制色谱法 外标法定量Ch.P（2010）直接滴定法,（一）血清中阿司匹林（ASA）和水杨酸（SA）浓度的高效液相色谱测定法,1.预处理方法 血清+高氯酸去蛋白 2.测定方法 离子抑制色谱法，内标法定量,五、生物样品分析,（二）尿中丙磺舒的固相萃取净化高效液相色谱分析法,1.预处理方法 C8固相萃取柱，先用水洗去生物基质，甲醇洗脱药物和

16、内标物 2.测定方法 离子抑制色谱法，梯度洗脱，内标法定量,（三）HPLC法测定人血浆中布洛芬含量 1.预处理方法：血浆+甲醇去蛋白 2.测定方法：加预柱，离子抑制色谱法，内标法定量,小结：1、掌握芳酸及其酯类药物的结构、性质及与分析方法间的关系。2、掌握鉴别反应中与铁盐的反应及特殊鉴别反应，了解其他的鉴别反应。3、熟悉某些药物中特殊杂质的来源及检查方法。4、掌握中和法在芳酸及其酯类药物含量测定中的应用原理、注意事项。熟悉紫外分光光度法、了解高效液相色谱法测定该类药物的方法及原理。了解该类药物的体内分析方法。,98：80鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是A.碘化钾 B.碘化汞钾C.三氯化铁 D

17、.硫酸亚铁E.亚铁氰化钾,98：134测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方法是A.重量法B.酸碱滴定法C.高效液相色谱法 D.络合滴定法E.高锰酸钾法,99：81.两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml氢氧化钠溶液（0.1mol/L）相当于阿司匹林（分子量=180.16）的量是A.18.02mg B.180.2mgC.90.08mg D.45.04mgE.450.0mg,反应摩尔比为11,T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数c滴定液浓度，mol/LMb被测物的摩尔质量，g/mol,96：78苯甲酸钠的含量测定，中国药典（2010年版）采用双相滴定法，其所用的溶剂体系为A.水乙

18、醇 B.水冰醋酸C.水氯仿 D.水乙醚E.水丙酮,99：83.双相滴定法可适用的药物为A.阿司匹林B.对乙酰氨基酚C.水杨酸D.苯甲酸E.苯甲酸钠,99x：121125含量测定方法（中国药典2010年版）为A.直接中和滴定法 B.两步滴定法C.两者均可 D.两者均不可99x：121阿司匹林片（）99x：122阿司匹林原料药（）99x：123.对氨基水杨酸钠（）99x：124.阿司匹林栓剂（）99x：125.阿司匹林肠溶片（）,B,A,D,D,B,例7.阿司匹林加碳酸钠试液加热后，再加稀硫酸酸化，此时产生的白色沉淀应是A.苯酚 B.乙酰水杨酸C.水杨酸 D.醋酸钠 E.醋酸苯酯,例8.水杨酸与三

19、氯化铁试液生成紫堇色产物的反应，要求溶液的pH值是A.pH10.0 B.pH2.0C.pH78 D.pH46 E.pH2.00.1,例9.两步滴定法测定阿司匹林片或阿司匹林肠溶片时，第一步滴定反应的作用是A.测定阿司匹林含量B.消除共存酸性物质的干扰C.使阿司匹林反应完全D.便于观测终点 E.有利于第二步滴定,例10对氨基水杨酸钠中的特殊杂质是A.水杨酸B.间氨基酚C.氨基酚D.苯酚 E.苯胺,例11.能用与FeC13试液反应产生现象鉴别的药物有 A苯甲酸钠 B水杨酸 C对乙酰氨基酚 D氢化可的松 E丙酸睾酮,例12.采用双相滴定法测定苯甲酸钠含量时，加入乙醚的目的是 A.防止反应产物的干扰,

20、使滴定反应完全 B.乙醚层在水上面，防止样品被氧化 C.消除酸碱性杂质的干扰 D.防止样品水解 E.以上都不对,例13.阿司匹林中含量最高的杂质为A.乙酰水杨酸酐B.乙酰水杨酸水杨酸C.水杨酸D.水杨酰水杨酸 E.以上都不对,例14.区别水杨酸和苯甲酸钠，最常用的试液是A.碘化钾B.碘化汞钾C.三氯化铁 D.硫酸亚铁 E.亚铁氰化钾,例15.在中性条件下，可与三氯化铁试液反应，生成赭色沉淀的药物是A.水杨酸钠B.对氨基水杨酸钠C.乙酰水杨酸D.苯甲酸钠 E.扑热息痛,例16.在PH5-6条件下，可与三氯化铁试液反应，生成米黄色沉淀的药物是（）A.水杨酸钠B.对氨基水杨酸钠C.乙酰水杨酸D.丙磺

21、舒 E.氯贝丁酯,例17.用直接滴定法测定阿司匹林含量 A.反应摩尔比为1：1 B.在中性乙醇溶液中滴定 C.用盐酸滴定液滴定 D.以中性红为指示剂 E.滴定时应在不断振摇下稍快进行,例：取咖啡因，加乙醇制成每lml含咖啡因4mg的溶液，摇匀，制备成内标溶液。精密称取阿司匹林对照品01500g，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，制备成对照品溶液。取阿司匹林栓(规格：0.3g）5粒，精密称定总重为10.00g，置小烧杯中，在4050水浴上微温熔融，在不断搅拌下冷却至室温，精密称取 1.014g，置50

22、ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml和乙醇适量，在4050水浴中充分振摇使供试品溶解，用乙醇稀释至刻度，置水浴中冷却1小时，取出迅速滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，制备成供试品溶液。分别取对照品溶液和供试品溶液各101，注人高效液相色谱仪中，记录色谱图。测得对照品溶液中，阿司匹林峰面积1000，内标峰面积1515；供试品溶液中，阿司匹林峰面积1014，内标峰面积1500。求供试品占标示量的百分含量？,校正因子（f）=式中AS为内标物质的峰面积或峰高，AR为药物对照品峰面积或峰高：CS为内标物质的浓度；CR为药物对照品的浓度。,再取含有内标物质的供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：含量（CX）=f 式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供试品的浓度。,作业,1.用化学方法区别阿司匹林、对氨基水杨酸钠、苯甲酸那和水杨酸。,