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二、基因表达载体的构建（核心步骤）,先用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶将二者连接，形成重组DNA分子。,三、将目的基因导入受体细胞（转化）,常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。,1、受体细胞是植物细胞,农杆菌转化法：主要侵染双子叶植物（伤口分泌酚类化合物吸引农杆菌）基因枪法花粉管通道法,1）土壤农杆菌法,2）基因枪法,3）花粉管通道法,2、受体细胞是动物细胞,显微注射法注入动物受精卵,1982年，世界上第一例体型比普通小鼠大1.8倍的转基因超级小鼠诞生,3、受体细胞是微生物,将目的基因导入原核生物的好处是什么？繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少要想使重组DNA顺利进入细菌细胞内，最大的难题是什么？一般用CaCl2处理，改变细胞膜的通透性，使得重组DNA能够进入细胞。,四、目的基因的检测与鉴定,检测转基因生物的DNA是否插入目的基因检测目的基因是否转录出了mRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测性状,分子水平,个体水平,1、检测目的基因,DNA分子杂交技术提取转基因生物的DNA制作分子探针（目的基因的一段单链序列）进行分子杂交,2、检测mRNA,分子杂交技术,3、检测蛋白质,抗原抗体杂交,4、检测性状,
