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1、常见重要毒物的检验,2,4,第一节 毒物检验的一般知识,概念1.毒素：是一类特殊的毒物，是由活的机体分泌的具有生物活性的物质。2.毒物检验：是运用生物化学和物理学原理和方法，对可疑的饲料和进入畜禽体内的毒物进行分离鉴定，以查清毒物及中毒原因，作为中毒病的诊断、急救及预防的科学依据。,一、毒物检验的目的1、诊断性的目的 通过对进入动物体内的毒物的分离鉴定，查清毒物及中毒原因。即是否中毒，是什么毒物引起的中毒,为中毒的诊断、急救和预防提供科学的依据。如果查不清毒物，单凭病史、症状、病理变化等是很难对中毒病进行确诊的。2、预防性的目的 在人医，有防疫站专门搞这项工作，我们兽医部门，没有防疫站专门搞此
2、项工作。通过经常对饲料、饮水、动物所在的环境（如空气、土壤、牧草等）及机体的某些生理指标进行监测，及早预防中毒病的发生。,二、毒物检验中的几个主要环节毒物的种类很多，中毒的原因也很复杂，在进行毒检之前，要考虑以下几个问题：1、有无中毒的可能，即是否为中毒？2、如果是中毒可能是何种毒物中毒？3、该取什么检材？4、用什么方法进行检验。,（一）中毒的一般诊断（回答1、2个问题）对于第1和第2个问题，主要是通过病史调查、临床症状和尸体剖检的观察等一般的诊断来回答,前面讲课中已讲过了，这里再补充几点：1、上述调查了解最好毒检工作者亲自到现场进行，掌握第一手资料。（集宁貂场的情况，不亲临现场调查很难得到，
3、有时当事者怕承担责任，不说真话）2、向送检人调查，仔细看送检单。送检单的内容主要包括：病史（发病时间、病畜的数量、病前的饲养管理情况，临床症状、防治措施及疗效、死亡情况及尸体剖检等）。检材的种类、数量、包装情况，取材日期，送检目的和要求等。送检单的内容要填入“毒物检验记录”中。,（二）检材的采取，保管和装送（回答第3个问题）通过一般诊断，大致上可确定是否为中毒和可能是哪种或哪几类毒物中毒，接着要进行的就是毒物检验，毒检的第一步就是检材的采取、保管和装送的基本要求：1、送检要及时最好要当天采集当天送，送检材料要低温保存（夏季在冷藏瓶），以减少毒物的损失和防止检材的腐败，也可在不影响毒物检验的情况
4、下，置入纯酒精中送检。送检时应同时送酒精样品（50-1250ml）以供对照检验、检材中不得加入福尔马林，因其本身也是毒物，并且对某些毒物（如生物碱、苯酚、氰化物）的检验有妨碍。2 检材的封装要适当检材要装在洁净的玻璃瓶或清洁无损的塑料袋内，各种材料都要贴上标签，注明检样名称，不能混放。瓶口要塞紧，袋口要扎牢，以防外漏。,3 采集材料要准确一般采集胃内容物、呕吐物、剩余饲料、可疑饲料、饮水等。重金属中毒、氟中毒、硒中毒等可采集脏器、尿、被毛、土壤等，在剖检死亡动物中，应根据动物的种类及中毒时间选取材料。急性中毒的动物应以取胃肠内容物及肝脏、血液为主，慢性中毒死亡者以取脏器及排泄物为主。在未知毒物
5、中毒时，取材应尽可能全面，且数量要充足，以免事后无法弥补。检验材料的采集数量见表4 送检材料时必须附送检单 在送检单上写清畜禽的饲喂情况、中毒发生的时间、畜种、中毒症状、治疗和预防的措施及效果、死亡日期、死后剖检变化、检材采取得时间和送检要求等，以便检疫人员在拟定检验计划时参考,检验材料的采集数量,1,2,3,（三）检验程序的拟定（回答第4个问题）1 经过对中毒的一般诊断，综合分析，可能出现几种情况：确定了是中毒，但方向不明确，要求检验人员进行系统的检验，这种检验是大海捞针，最费时间，最费检材。有了较明确的方向，但具体的毒物不明确，例如，认为是农药中毒，但农药的种类很多，是哪一种农药引起的还不
6、明确，这 就需要在农药的范围内缩小包围圈，查清具体的毒物。它比第一种情况省事。查清了可能引起中毒的具体毒物及其来源，就要确证一下就行了，这是最省事的。,2 一般的检验程序,预试验,定性检验,含量测定,动物试验,预试验又称指向性试验，它是在不消耗检材或消耗少量检材的情况下，利用简单的方法探索检验方向的试验。预试验主要包括以下方面：观察检材颜色，如磷化锌黑色的，氟乙酰紫红色的；注意气味，检查检材气味最好在尸体剖检或开封检材的时候立即进行，如有机磷具有蒜臭味；,预试验,升华试验（烧灼），如从胃内容物或可疑饲料中拣出的可疑物时，可取少量放入小试管中，在火上灼烧，根据所产生的蒸汽或升华物的颜色，结晶性状
7、，可找到一些毒物的线索。如砷等金属物质，灼烧后在管壁上可见到升华物，置于显微镜下可见到不同形状的结晶。如金属砷汞等；简单的化学方法，如植物有毒成分的分析。注意：预试验只起探索的作用，不能作为诊断的依据，尚未做确诊试验，不能作出结论。,预试验,又称：确证试验。根据了解的情况或预试验所得到的线索，必须进行一系列的定性反应加以确证。定性反应多数是化学反应方法，根据被检毒物的特殊化学反应，判定毒物是否存在，因此，使用的化学反应必须容易辨认，如溶液颜色的改变、沉淀的生成或溶解、气体的生成等。,定性检验,注意：a、每种毒物的检验要求做两种以上的检验方法，方法要具有特异性，灵敏可靠，几种方法结果一致方能确诊
8、，只有一种出现阳性结果，不能确诊。b、检验时同时作空白对照试验（阴性对照）和已知样品对照试验（阳性对照），阴性对照检查试剂及器皿有无问题，阳性对照检验反应是否正常进行，并作为判定结果的标准。阴性和阳性样品要同检材做同样的处理。,定性检验,又称：定量分析。在毒物检验中，一般很少进行含量测定，只要确定是什么毒物就可以了。但在某些情况下或对某种毒物进行含量测定具有重要意义。如食盐是动物体内必须的物质，只有在进行含量测定后，才能确定是否发生中毒。又如亚硝酸盐定性检验，食物呈弱阳性反应时，不一定会引起中毒，必要时需进行含量测定。,含量测定,动物试验在兽医毒物检验工作中也是常用的方法，它能初步探索到检材中
9、有无毒物存在和所含毒物量能否引起中毒。通过动物中毒时所反映出的各种症状及病理变化，有助于提出进一步检验的方向。,动物试验,把可疑检材接种给于动物，观察其临床症状和剖检变化，可推出毒物的种类。实验所用的动物有青蛙、小白鼠、家兔等。试验方法可直接饲喂或灌胃，亦可将毒物分离提取后给动物ih、im、ip。如观察检材是否有刺激性或腐蚀性毒物存在，可涂于动物的皮肤或粘膜上，以观察结果。由于许多毒物具有相同毒性作用，引起中毒症状也大致相同，因此，动物试验最好在化学试验基础上进行，互为印证，才能得出正确结论。,动物试验,（四）做好检验前的准备工作1、保证实验试剂和仪器的质量（1）毒检试验一般要求二级品（分析纯
10、）AR。【附：一级品（优级纯）GR，三级品（化学纯）CR，四级品（实验室试剂）LR，五级品（生物试剂）BR。】（2）准备足够的试剂和器皿。配试剂时，浓度要精确。（3）要求现用现配的试剂，一定要在使用前新配。（4）同一次试验中所用的移液管、滴定管、量筒、容量瓶、比色管等，规格、型号要尽量一致。2、正确选取与合理使用检材使用时用三三制：检验用1/3，重做用1/3，保存用1/3（防止打官司）。,（五）毒物的提取1、方法1）毒物的分离提取方法很多，主要包括：水汽蒸馏法：（酸性水汽蒸馏法，碱性水汽蒸馏）；透析法；溶剂萃取法；灰化法；消化法；层析法：（纸层析、薄层层析、柱层析、气相层析法、高效液相层析法)
11、。2）挥发性毒物提取常用的方法水蒸气蒸馏法；离心法；微量扩散法；驱气 法与抽气法；顶空气相色谱法。3）金属毒物的提取方法干灰化法、湿消化法、微波消解法,（五）毒物的提取2、毒物提取时注意事项：1）、要按照毒物的化学性质选择提取方法。既要把毒物充分提取出来，又要不使之挥散或受到破坏。如有机磷农药易溶于有机溶剂，因而可以用有机溶剂浸泡或振摇提取。但有机磷遇热易挥发，在提出后挥散有机溶剂时，温度不可过高。2）、在尽可能不损失毒物的前提下，所用的提取方法，应能将干扰物质充分排除，必要时可进一步净化或提纯，以提高反应的灵敏度。对某些化学结构相似的有毒物质，要设法使之分离。,3）、要严格控制好提取过程中的
12、各种条件。因为一种成熟的提取方法所规定的各种条件（如温度、PH、时间、试剂加入的方式与程序等。）都是根据所检毒物的化学特性及各种反应过程中的反应特点来确定的，违反这些条件，就有使提取工作失败，甚至发生事故的可能。4）、为了减少毒物在提取过程中的损耗，提取方法应尽可能简化，提取液转移、脱水、脱色时，应将原器皿及残渣上残留的毒物充分洗脱与收集。5）、提取过程中往往有毒气体或有机溶剂的蒸汽挥散，工作人员要注意防护。,三、层析法原理及其在毒物检验中的应用 层析技术是利用混合物中各组分的物理化学性质(分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等)的不同，使各组分以不同程度分布在固定相和流动
13、相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而达到分离的技术。层析技术操作简便，样品可多可少，既可用于实验室的研究工作，又可用于工业生产，还可与其他分析仪器配合，组成各种自动分析仪器。,1、层析技术的分类(1)按流动相的状态分类：用液体作为流动相的称为液相层析，或称液相色谱；以气体作为流动相的称为气相层析，或称气相色谱。(2)按固定相的使用形式分类：可分为柱层析、纸层析、薄层层析、薄膜层析等。(3)按分离过程所主要依据的物理化学原理分类：可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析、分子排阻层析、亲和层析等。,2、薄层层析概念：是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差别，各组分可不同程度的分
14、布在两个不相混溶的物相中，其中一个为固定的（固定相），另一个为流过固定相的（流动相），在同样的时间内各组分以不同的速度迁移，从而达到分离的目的。薄层层析的方法：点样，展开，显色，定性与定量分析,3、高效液相层析法高效液相层析法(high performance liquid chromatography,HPLC)，又称高压液相色谱法、高速液相色谱法、现代液相色谱法等，是在经典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术。特别适用于高沸点、不能气化或热稳定性差的有机物分离分析，在生物化学与分子生物学中的应用日益广泛。,4、高效液相层析法有哪些？1）.吸附层析2）.分配层析3）.离子交换层析4）
15、.凝胶渗透层析,5、HPLC的特点 具有高压、高速、高效、高灵敏度等特点，因此广泛应用于氨基酸、蛋白质、甾族化合物、糖类、有机酸、生物碱、药物、农药、抗菌素、维生素、高聚物以及各种无机盐类的分离与分析。,四、检验记录及检验结果的报告（一）检验记录 毒物检疫人员对每次收到的检材按规定要求多出详细的记录，与送检人员核对送检单上所诉采集材料的时间、名称、重量、包裹情况，并注明验检日期。对检验单上未详述的内容，特别是发病前后的情况，如临床症状、尸体剖检变化、现场调查的初步印象、治疗效果及要求检验的项目等要与送检人员座谈并把详细情况记录下来。,（二）检验结果的判定和报告毒物检验及结果通知单 编号,1、检
16、验结果与临床记录完全符合。检验的各项结果均为阳性（如可疑饲料、胃内容物、呕吐物等）与中毒病畜的临症、尸变完全一致，可做出某种毒物中毒的结论。2、检验结果与临床记录部分符合。检验结果阳性，现场也发现致病毒物，但与尸变不一致，首先考虑送检材料是否是该中毒动物的检验材料。3、检验结果与临床记录完全相反。检验结果阴性，但临症和尸变与该种毒物引起的中毒表现一致，要考虑送检的检材采集的部位是否合适。,检验结果的判定,第二节水溶性毒物的检验,（一）水浸法将检材研碎，用蒸馏水浸泡1h并稍加热，搅拌，然后进行过滤或离心分离，滤液或离心分离液供检验用。如颜色过深，可加活性炭脱色。（二）透析法原理 无机化合物或低分
17、子有机化合物的离子或小的分子，在溶液 中可以通过半透膜；而一些分子结构大的化合物，如脂肪、蛋白质等却不能通过半透膜，从而得以分离。,一、水溶性毒物的提取,操作1、半透膜的制作 取火棉胶数毫升，倾于洁净干燥的小烧杯（或其他理想的容器）中迅速转动烧杯，使火棉胶均匀地分布在烧杯内壁上，形成一层薄膜，将多余的火棉胶倒回原瓶中，待膜稍干，轻轻用刀尖将边缘剥离，向薄膜和烧杯之间轻轻吹气或注水，即可完全取下，将其放置在一个装有水的烧杯中，待用。2、透析 将检材研碎或剪细后，装入半透膜内，将半透膜口捆扎在一根玻璃管上，然后将其放于适当大小的烧杯内，从玻璃管向透析膜内加入蒸馏水，使液面淹没检材，再往烧杯内加蒸馏
18、水至与检材液面同一水平，透析1h，膜外的透析液供检验用。为了增加透析速度及提高透析效率，可将烧杯适当加热（不超过50）。如要透析完全，则需时间长些（最好在冰箱内进行，防止检材腐败），并更换膜外的蒸馏水数次，然后合并透析液，在水浴浓缩后供检验用。,亚硝酸盐中毒是由于采食富含亚硝酸盐或硝酸盐的饲料，引起高铁（Fe3+）血红蛋白血症，导致组织缺氧的一种急性、亚急性中毒。临床上以黏膜发绀、血液褐变、呼吸困难、胃肠道炎症为特征。主要发生猪，牛、羊、马也有发生。,二、亚硝酸盐的检验,（一）检材及处理亚硝酸盐为水溶性毒物，故可采取剩余饲料、呕吐物、胃内容物及血液等作检材，检材用水浸法或透析法处理，取滤液或透
19、析液作检液。胃内容物、呕吐物、剩余饲料中亚硝酸盐的提取：取上述检材10到20克加适量蒸馏水调成糊状，过滤，滤液若有颜色，可用活性炭脱色。血清：静脉采血后离心沉淀，分离血清备用。,样品采取时应注意的事项：应当无化学污染或残渣；样品不能用水冲洗，可能除去残毒；水可污染样品；样品保存条件：组织样品，应在冰冻条件下送往实验室；血清和血液样品，不应冰冻，但可低温保存；样品内不要加防腐剂或福尔马林，除非有特殊原因应加以说明；样品应注明畜主姓名、畜别或号数、死亡日期、取料日期、送检要求及送检单位等。,（二）定性检验1、高铁血红蛋白的鉴定（1）.取血液少许与小试管内,用力振摇,血液不变色,可认为是高铁血红蛋白
20、.通常血液会与空气中的氧结合呈鲜红色。（2）.取血液少许与小试管内,滴入数滴1%KCN溶液,若有高铁血红蛋白,血液立即由棕褐色变为鲜红色。,2、格利斯（Griess）反应（灵敏度1：5000000）原理 亚硝酸盐在酸性溶液中与氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，再与甲-萘胺作用生成洋红色的偶氮色素。试剂 格利斯试剂：取甲萘胺1g，对氨基苯磺酸10g，酒石酸89g，置于乳钵中，研细，混匀，保存于密封的棕色瓶中，备用。操作 取检液（或血清）12ml 放入小试管中，加入格利斯试剂0.10.2g，振荡试管，观察颜色变化，如有亚硝酸盐存在，立即呈现红色，颜色的深浅视含量而定，粗略比例见下表。,亚硝酸盐概略定量
21、表,本反应亦可在白瓷反应板上进行，其操作方法是取格利斯试剂干粉少许于白瓷反应板凹窝中，加检液35滴，用小玻璃棒搅匀，如有亚硝酸盐存在，即显紫红色，阴性不显色。,3、联苯胺冰醋酸反应（灵敏度1：400000）原理 亚硝酸盐在酸性溶液中，将联苯胺重氮化生成一种醌式化合物，而呈现棕红色或黄红色。试剂 联苯胺冰醋酸溶液：取联苯胺0.1g溶于10ml冰醋酸中，加蒸馏水稀释至100ml。过滤，滤液盛于棕色瓶中备用。操作 取检液12滴，置白瓷反应板上，加12滴联苯胺冰醋酸溶液，如有亚硝酸盐存在，即出现红棕色。亚硝酸盐含量大时，试剂需多加数滴，才能出现颜色。,仪器：YN-CLVI型智能化农药残留快速检测仪(农
22、药残毒、重金属、亚硝酸盐、甲醛四合一综合测速仪),第三节 挥发性毒物的检验,一、挥发性毒物的分离提取方法1、水蒸馏法挥发性毒物多具有较高的蒸汽压，当遇酸性溶液同时加热时，可在较原沸点为低温度下随水蒸气蒸馏出来，根据这一特性达到分离目的。2、离心法血液及尿液检样不适宜用水蒸气蒸馏法分离提取挥发性毒物，可采取离心分离提取，取血液及尿液10ml与50ml离心管中，加冰乙酸、碳酸钾充分混合，离心取上清液供检。,3、微量扩散法适用于各种挥发性毒物的分离提取，特别是被检样量很小时，不宜进行水蒸气蒸馏，用此方法分离极为方便。主要仪器为康威（conway）扩散池,二、氢氰酸和氰化物的检验氢氰酸中毒是家畜采食富
23、含氰甙类植物或被氰化物污染的饲料、饮水后、体内生成氢氰酸、导致以呼吸困难、震颤、惊厥等组织性缺氧为特征的一种急剧性中毒病。一般多见于牛和羊，马、猪、犬偶尔发生。,富含氰甙的植物：高粱属植物亚麻，主要是亚麻叶、亚麻籽及亚麻籽饼；木薯苦杏仁、银杏、枇杷仁各种豆类牧草误食或吸入氰化物农药,病因,（一）检材 供检验氢氰酸和氰化物最适宜的检材是中毒动物吃剩的饲料，病畜的呕吐物，其次是肺、脑、肝和血液。本实验采取水蒸气蒸馏法提取口粘膜、食道和胃及胃内容物。氢氰酸为无色易挥发的液体，有苦杏仁味，沸点26.5，在室温中即可挥发，特别是在酸性环境中很快分解，故应及时检验。严重腐败的检材，很难检出氢氰酸或氰化物。
24、,（二）定性检验1、快速普鲁士蓝法（灵敏度0.110g）原理 酸化的检样受热后，氰化物变成氢氰酸逸出，在碱性条件下与硫酸亚铁作用，生成亚铁氰络盐，用酸酸化后，与高铁离子反应，生成普鲁士蓝：试剂（1）10%酒石酸溶液。（2）10%硫酸亚铁溶液（用时现配）。（3）10%氢氧化纳溶液。（4）10%盐酸。,操作.取检样5-10g置于三角烧瓶中，加蒸馏水，使成粥状，加10%酒石酸酸化，立即在瓶口上盖一张滤纸，并迅速向滤纸的中央加10%硫酸亚铁1-2滴，稍干，再加10%氢氧化钠1-2滴，然后缓缓加热，当微沸有蒸气产生时，把滤纸取下（瓶口再盖一张滤纸，重复操作），向滤纸上滴加10%盐酸或将滤纸浸于10%盐酸
25、溶液中，如有氰化物，滤纸立即显蓝色，若含量低，可显蓝绿色。,说明本方法不需水蒸馏，可用检样直接检验，所以具有操作简便，快速等优点。若检样是血液时，可加20%三氯乙酸酸化并使蛋白质凝固。也可用蒸馏液进行此反应，其方法是取碱性接收液2ml于试管中，加10%硫酸亚铁溶液2-3滴，微热，加10%盐酸酸化，如有氰化物存在，即产生蓝色或蓝绿色，含量高时，可产生蓝色沉淀。,2、苦味酸试纸法（灵敏度15ug）原理 氰化物在弱酸性条件下受热产生氢氰酸，遇碳酸钠生成氰化钠，再遇苦味酸即生成异紫酸钠，呈玫瑰色。试剂（1）10%酒石酸溶液。（2）10%苦味酸溶液。（3）饱和碳酸钠溶液。,操作 取检样5-:10g置于三
26、角瓶中，加蒸馏水使呈粥状，加10%酒石酸酸化，立即在瓶口上悬一条事先准备好的碱性苦味酸试纸条，盖好胶塞，在小火上缓缓加热，如有氰化物存在则试纸条变为玫瑰红色。碱性苦味酸试纸制法:可取定性滤纸一条在10%苦味酸溶液中浸湿，并用滤纸吸去多余溶液，再滴加饱和碳酸钠溶液，阴干即可应用。说明（1）本反应不是氰化物的专一反应，酮、醛、硫化氢等还原物质也可呈阳性反应，因此，需做空白对照试验，或用其他试验确证。（2）此方法可与快速普鲁士蓝法同时进行，即将碱性苦味酸试纸条悬于瓶内，瓶口盖上滤纸做快速普鲁士蓝反应。,第四节 金属毒物及微量元素的检验,金属及化合物种类繁多，常见的有汞、砷、铅、锡、铊、钡、镉几种元素
27、及其化合物。金属及其化合物在体内的毒理作用主要通过它与含有硫、氮、氧基团的酶结合，使蛋白质三级结构发生改变，酶的活性被抑制甚至消失而影响细胞的新陈代谢。当它与细胞膜上的配体结合时可引起膜的主动或被动运输改变。金属及其化合物发生急性中毒的很少，大部分为污染或工作环境导致的慢性中毒。这里着重讲述汞、砷、铅三种金属的毒性，锡、铊、镉等可自习。,一、汞化合物的检验(砷化物的检验)汞含金属汞、无机汞和有机汞三种形式，其中有机汞的毒性较大。畜禽摄取了被汞及其化合物污染的饲料和饮水能引起中毒，在临床上以呈现胃肠炎、肾炎和神经系统功能障碍为特征。各种家畜都能发生中毒，但以牛、羊对汞最为敏感。汞中毒不仅能造成畜
28、禽大批死亡，而且受其污染的动物性食品被人食用后也能危害人的健康。,58,汞,汞(mercury，Hg)，又称水银，是唯一在常温下呈液态并易流动的金属。汞很易蒸发到空气中引起危害，因为:（1）在0时已蒸发，气温愈高，蒸发愈快愈多;每增10蒸发速度约增加1.21.5倍，空气流动时蒸发更多。（2）不溶于水，可通过表面的水封层蒸发到空气中。（3）粘度小而流动性大，很易碎成小汞珠，无孔不入地留存于工作台、地面等处（4）地面、工作台、墙壁十天花板等的表面都吸附汞蒸气，有时，汞作业车间移作它用，仍残留有汞危害的问题。,汞及其无机化合物和汞蒸气:如升汞、甘汞、汞撒利等，有机汞包括:甲基汞、乙基汞、赛力散、富民
29、隆等都可以引起中毒。中毒途径大致如下：（1）吸入汞蒸气 汞可以升华，许多使用金属汞的厂矿附近，因汞蒸气使人畜产生慢性中毒；（2）误食用含汞药物喷洒过的饲料（毒谷），或因消毒的厩舍和草地而中毒；,汞中毒,（3）水体受到汞的污染 水中微生物可把无机汞转变为有机汞（甲基汞），使毒性猛增，危害人畜；（4）水生植物和动物有富集汞的能力 在一定汞浓度的水中生活的鱼不一定中毒致死；但人和动物食用鱼、鱼粉或其他鱼制品后，可产生中毒，日本水俣病及狂猫跳海就是这一原因引起的；（5）过去生产的有机汞杀虫剂 至今在环境中残留，动物食后亦可引起慢性中毒。,汞中毒,临床表现无机汞急性中毒已很少见。但用升汞消毒，汞撒利、甘
30、汞作临床应用时，被犊牛、貂添食可引起局部强烈腐蚀作用，产生口炎、舌炎、胃肠炎，开始流涎，进而腹痛、拉稀、排绿色粪便、腐臭味。从呼吸道吸入的，鼻分泌物增多，鼻卡他，咳嗽及呼吸困难，常有蛋白尿，尿汞增加。汞慢性中毒，以神经症状为主。幼畜进行性消瘦，厌食，生长阻滞，动作不协调，无目的行走，失明，空嚼，呆滞，衰竭，昏睡状态下死亡。有些动物皮肤发痒，啃咬皮肤、擦痒等。继而皮肤增厚，脱毛和皮屑增多。,汞中毒,有机汞吸收率比无机汞高得多，因而毒性作用也特别大，半衰期长，常引起慢性中毒。以中枢神经系统损害为主，如无食欲、平衡失调、视力障碍甚至失明、听力障碍、痉挛、轻瘫、昏睡和死亡。口腔、肠道炎症，牙齿松动或脱
31、落，瘙痒脱毛，预后多不良。有机汞可顺利通过胎盘屏障而影响胎儿，而且可以通过乳汁而传递给幼畜，引起幼畜肢端震颤，甚至死亡。,汞中毒,诊断病史调查：主要由于误食了含有西力生、赛力散等汞制剂处理的种子，或含汞制剂的农药密闭不严，使猪受到汞蒸气的危害而引起。临床特征：急性汞中毒以胃肠炎、气管炎、支气管炎、却气管肺炎、皮肤炎为特征，慢性汞中毒的典型病变为口腔炎、齿龈炎和神经系统的中毒变化。含量监测：病死动物内脏、肝、肾、毛、粪中汞测定，有助于诊断，当肾汞达到10-15mg/kg即可认为是汞中毒。一般动物饲料中含汞量不得超过0.1mg/kg，饲养场地空气中有机汞含量应不超过0.01mg/m3，无机汞不超过
32、0.1mg/m3。,汞中毒,5.治疗本病主要作预防，很难治愈，且治疗费用较大。治疗宜解毒，可用如下处方。（1）10%二巯基丙醇注射液125-250mg，一次肌肉注射。首次用量按1kg体重2.5-5mg用药，以后每隔6h减半量使用。二巯基丙醇的副作用大，连用3d后，改为每天一次。（2）5%二巯基丙磺酸钠注射液350-500mg，一次皮下或肌肉注射，按1kg体重7-10mg用药。（3）注射用硫代硫酸钠1-3g加注射用水10-20ml，溶解后，一次静脉注射，每天2-3次。,汞中毒,（一）检材及处理 急性中毒以剩余饲料、呕吐物和尿液为最好，其次为血液、胃肠内容物、肝、肾、肠等。慢性中毒则以肾最好，其次
33、为肝、毛（羽）和脑。剩余饲料、呕吐物、胃内容物、尿可直接进行雷因希(Reinsch)试验，当阳性时，进一步做汞的确证试验。肝、肾、血液等检材最好破坏有机质后再进行检验。,汞、砷检验,（二）预试验雷因希试验原理 金属铜在盐酸酸性溶液中，能使毒物中的汞还原成汞元素并镀在铜的表面上，使铜片（铜丝）变成银白色。试剂：（1）2.25mol/L硝酸溶液。取15ml硝酸（A.R）加蒸馏水至100ml。（2）铜片510mm或用玻璃棒将20号铜丝绕成十圈螺旋状。（3）浓盐酸（A.R）或6%盐酸（浓盐酸比水为1:5）。（4）氯化亚锡盐酸溶液。取氯化亚锡2g用浓盐酸100ml溶解。,操作（1）取铜片或铜丝2-3片（
34、卷）于试管中，加入2.25mol/L硝酸处理，待铜片干净明亮后，先用水洗，再用乙醇，后用乙醚洗涤，用滤纸吸干（不能用手拿，以避免污染），备用。（2）取粉碎的固体检材（饲料、胃肠内容物、组织等）5-10g于100ml烧怀中，加6%盐酸50ml。若为液体检材，可取检液50ml，加浓盐酸10ml。再加氯化亚锡酸溶液1ml，在烧怀上标明液面的高度。先在水浴上加热10min，以除去硫化物的干扰。然后投入铜片（卷）2-3片（卷），直火加热30-60min，取出铜片用清水洗净，观察铜片颜色。铜片表面变成银白色，可能含有汞化合物，再做汞的确证试验。在加热过程中要不断补加6%的盐酸，使保持原有的体积和酸度。,说
35、明（1）本试验中盐酸浓度宜在2%-8%之间，浓度过高可引起汞挥发，过低反应不易进行。（2）操作过程中经常观察铜片变化，一旦变为银白色，应立即取出，否则因含量较高，加热过久则生成物脱落，造成判断错误。（3）已腐败的样品做此试验时，最好将样品调节至酸性后在水浴上先加热10min，以除去硫化氢，再加入铜片，防止铜片表面生成硫化物变黑。（4）含油脂的样品能使铜片表面形成油膜，汞难于附着在铜片上，此时应进行有机质破坏后再做试验。,（5）如含汞量低时，可用盐酸肼代替盐酸进行试验，其方法是取盐酸肼放入试管中，加入铜片（或铜丝）及检液适量，加热至微沸5min再观察结果。此法与雷因氏法比，反应迅速，消耗检样量少
36、，一般样品仅数滴即可检出，灵敏度。（6）雷因希试验也是砷、锑、铋、银等金属的预试验，阴性反应时（铜片不变色），可肯定不存在此5种金属，当出现颜色反应时，其区别在于铜片变色不同，砷为黑色，锑为灰紫色，铋为暗灰色，银为灰白色。即使如此，仍需进一步做确证试验。,70,二、铅的检验,铅主要用于制造铅蓄电池；铅合金可用于铸铅字、做焊锡；铅还用来制造放射性辐射、X射线的防护设备；以前用作汽油的防暴剂（含铅汽油）。铅及其化合物对机体有较大毒性，并可在体内蓄积，主要存在于骨骼等。,铅中毒是动物直接或间接食入含铅物，引起流涎、腹痛、兴奋不安和贫血为主要临床特征的疾病。铅为蓄积毒物，小剂量持续地进入体内能逐渐积累
37、而呈现毒性作用。各种毒物均可发生，反刍动物最敏感，主要发生于牛、羊、家禽。铅中毒主要是工业污染和意外大量接触。铅矿污染、农药污染、舔食含铅油漆染料、汽车尾气（汽油中加有含铅防爆剂，公路两旁青草含铅量500mg/kg,动物采食可中毒）,铅中毒,二、铅的检验（一）、检样的采集与处理急性中毒的病畜以血液、尿液、呕吐物、粪、剩余饲料为检材。中毒时间较长者取其肝、肾、脑、骨为宜。检材需做有机质破坏，如有机质含量不多，可直接灼烧，残渣用5%硝酸在水浴上溶解，供检。,（二）、定性检验（铬酸钾法）原理 铅盐与铬酸钾和重铬酸钾在中性或弱酸性溶液中生成铬酸铅黄色沉淀。试剂 10%铬酸钾或重铬酸钾溶液操作 取检液少
38、许，加10%铬酸钾或重铬酸钾溶液数滴，如有铅离子存在，则出现黄色沉淀，该沉淀能溶于氢氧化钠及硝酸中。,三、食盐的检验动物因食入过量的食盐，同时饮水受到限制时所引起的一种以胃肠炎、脑水肿及神经症状为主要特征的疾病。（一）中毒症状 分急性食盐中毒和慢性食盐中毒两种 猪临床症状为食欲减少，口渴，流涎，头碰撞物体，步态不稳，转圈运动。大多数病例呈间歇性癫痫样神经症状。禽病禽表现为燥渴而大量饮水和惊慌不安的尖叫。口鼻内有大量的粘液流出，嗉囊软肿，拉水样稀粪。运动失调，时而转圈，时而倒地，步态不稳，,（二）、眼结膜囊内液氯化钠的检验原理 氯化钠中的氯离子在酸性条件下与硝酸银中的银离子结合，生成不溶性的氯化
39、银白色沉淀。试剂酸性硝酸银溶液：硝酸银1.75g、硝酸25ml、蒸馏水75ml充分混合并溶解。操作 取蒸馏水2-3ml，放试管中，再用小吸管吸取眼结膜囊内液少许，放入试管中，然后加入酸性硝酸银溶液1-2滴，如有氯化物存在就成白色浑浊，量多时浑浊程度加大。,第五节 农药的检验,一、掌握薄层层析的原理和操作方法,二、学会有机磷农药的化学检验方法,一、吸附薄层层析吸附薄层层析（以下简称薄层层析）是50年代以后在吸附柱层析和纸层析的基础上发展起来的一种色层分析方法，与柱层析和纸层析相比较，薄层层析具有以下优点。1、设备简单、容易操作。2、分离速度快。做一次吸附薄层层析只需要几分钟至几十分钟；而纸层析需
40、用数小时至数十小时；柱层析需时更长，常常是数十小时乃至数日。3、分离效率高。可以使性质相似的化合物，得到分离。4、薄层层析展开后可以用各种方法显色。可以用强腐蚀性显色剂，甚至可以高温灼烧。5、应用面广。可以进行定性鉴定，也可以进行含量测定。因此薄层层析不仅被用于生物化学、植物分析、药物成分鉴定、毒物检验等方面，而且许多工厂也把薄层层析广泛地应用于反应终点控制、工艺条件选择、产品质量检验和未知试样剖析等方面。,原理 薄层层析是把固定相（吸附剂）均匀的在支持物（玻璃板）上铺一薄层，层析就在薄层板上进行。把检样点在薄层板的一端，检样即被吸附剂吸附，当点样端浸入流动相（展开剂）时，展开剂不断地向前移动
41、，当遇到检样时，检样就溶解在展开剂中并随之向前移动，于是检样中各组分由于极性不同，在两相中不断发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。检样中吸附能力强的组分，不易发生溶解，在薄层板上移动速度慢、距离短；反之，吸附能力弱的组分，容易溶解，在薄层板上移动速度快、距离长，从而使检样中各组分将按其吸附能力强弱不同得以分离。检样在薄层板上的移动距离常用比移值（Rf值）来表示，Rf值的意义为：Rf=原点到组分点中心的距离 原点到展开剂前沿的距离注：如果被分离的是有色物，组分点可直接看到；若分离的是无色物，可通过显色确定组分点。,（一）薄层板的制备试剂与仪器1、吸附剂 毒物检验工作中最常用的吸附剂是氧化铝
42、和硅胶，此外也可用聚酰胺、活性炭和硅藻土等。2、粘合剂 为使吸附剂与支持物贴附得牢固，不易脱落。若在吸附剂中加入一定量的粘性物质即粘合剂，便可制成较牢固的薄层板。常用的粘合剂有煅石膏、羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉等。为了得到较好的分离效果，应根据被分离物质的性质来选择粘合剂。,3、支持物 即玻璃板，可根据需要裁成不同规格。用于预试验可裁成27cm或210cm;定性试验常用520cm、1020cm或2020cm；若用于分离提纯某种组分，则根据需要可制成大板。裁好的玻璃边缘用砂轮磨光。玻璃表面应光洁平整。铺层前应用洗液浸洗，再用自来水、蒸馏水洗净烘干，防止有油污和水渍。,4、制膜器（涂布器）（1
43、）软板制膜器 在一根玻璃棒或表面光滑的细金属棒的两端分别套上厚度为0.21mm的塑料套圈，套圈间的距离可根据支持板的宽度进行调整。（2）硬板制膜器 在一块宽30cm、长3540cm的玻璃板（底板）的中间放一块薄层支持板，在支持板的两侧各贴一条胶布（橡皮膏），再取二条与支持板同样厚，比支持板稍长的玻璃条，贴上同样大小的胶布，然后将两胶布用胶水粘合在一起，即制成一简单的制膜器。,铺板方法1、薄层板的种类 根据制板时所用吸附剂的种类不同，薄层板可以分为氧化铝板、硅胶板、聚酰胺板等等；根据制板时是否加粘合剂，薄层板又可分成两大类，即干板将吸附剂直接铺在支持板上，这种板也叫软板；湿板将吸附剂用水（或其他
44、溶剂）调成糊状，或把吸附剂和粘合剂充分混匀后调成糊状铺板，此板干后较硬，可以随意拿动，所以又称硬板。由于加粘合剂的种类不同，硬板又分为多种，常用的有以下几种：,（1）硅胶（氧化铝）H板 是不加粘合剂的硬板，直接将吸附剂调成糊状后铺板，这种板制成后板面较软，易破坏。（2）硅胶GF254板 表示加有粘合剂（煅石膏）和在254nm波长的紫外线下能发荧光的荧光物质。（3）硅胶（氧化铝）CMC板 表示加有1%羧甲基纤维素钠（CMC）为粘合剂的薄层板。1%CMC的配法是取CMC1g置乳钵中，加少量蒸馏水研磨成均匀的糊状，再补充水至100ml研匀。或者取CMC1g于烧杯中，加蒸馏水100ml，在液面外和烧杯
45、上划一标记，然后直火加热至完全溶解，并补足消耗的水分。1%的CMC配好后，按比例加入吸附剂调匀后即可铺板。（4）硅胶（氧化铝）淀粉板 一般淀粉的含量为5%，把淀粉和吸附剂混匀，加2倍量的水调和并在85水浴中或直火加热数分钟，当淀粉变得有粘性后再辅层。,2、干铺板法 取150-200目的层析用氧化铝（或硅胶）撒于玻璃支持板上，调节好干板制膜器两端塑料套圈的距离，两手捏住制膜器的两端，均匀的缓缓向前移动，即可铺成平滑、均匀的薄层。这样铺好的薄层板即为干板（软板）。干法制板简单快速，随用随铺，展开速度快。但干板板面容易破坏，移动时要特别小心，而且不易保存。干板展开后必须立即显色，否则展开剂挥发后易将
46、板面吹散。由于干板吸附剂颗粒较粗（太细推不成薄层），展开后斑点不太集中，所以分离效果稍差。,3、湿铺板法（1）制膜器铺板 取一定量的吸附剂，按比例（表15）加入水（或其他溶剂），仔细调成均匀糊状（或在乳钵中调研均匀），不要有气泡，然后装入湿板制膜器中，立即在事先摆好的玻璃支持板上匀速向前移动，可连续铺成多块均匀的薄层板。（2）手动制板 将调好的一定量糊状吸附剂倒在支持板上，并用玻棒大致摊开，然后手持支持板轻轻振动，使糊状吸附剂均匀铺开。以上各种制好的薄层板，应放在水平台上使其慢慢阴干，然后置于干烤箱中，在一不定温度下（表15）烘干并活化，保存在干燥器中备用。,不同吸附剂薄层的制备条件,(二)点
47、样 点样是一项细致的工作，要求样点集中，直径不能大于3mm。样点的位置距薄层板底边23cm，两个样点间距离1.5cm，点样常用的方法是直接样法。直接点样法 如果作定性检验，可直接用毛细管点样。若进行含量测定，要用微量注射器或血色素吸管（预先将管口磨平）准确吸取检样，仔细地滴加在确定好的点样处。如果点样量较大或为了浓缩的目的需要反复点样时，每次点样的量不可过大，样点直径必须控制在3mm以内，重复点样时，必须待前次点样的样点干后再点，以免样点直径扩大。点样时要防止把板面点穿，影响分离效果。,点样时应注意以下方面：（1）最好用与展开剂同样的溶剂溶解检样，否则点样后必须待检样溶剂挥干后再展开。（2）点
48、样量应根据薄层厚度、检样和吸附剂的性质、显色剂的灵敏度以及含量测定的方法而定。若点样量太小，微量组分无法检出；点样量过大，超过了吸附剂的线性分离范围，会使斑点重叠、分离不清。（3）点样时毛细管（或血红素吸管）必须垂直于层析板，否则不易点样或将板面点破。（4）点样速度要快，以免影响薄层板的活度，使分离效果受到影响。,（三）展开 展开就是把点好样板的点样端浸于展开剂中（切勿使样点浸入展开剂中），使展开剂沿薄层板移动，同时带动检样中的组分移动，而达到分离目的。1、展开剂的选择 常用的展开剂是某种有机溶剂或混合有机溶剂。展开剂应具备以下条件。（1）应是纯的试剂（GR或AR），若含有杂质会影响展开能力。
49、（2）与检样和吸附剂不发生化学反应。（3）能溶解检样中的各种成分。（4）粘度小、易流动，否则展开太慢。（5）容易与检样中所需组分分开。,2、展开方式及展开法 展开需在密闭的容器“展开槽”中进行。展开槽可分为立式和卧式两种。常用的展开方式有上行法、下行法展开法。（1）上行展开法近水平上行展开法。近垂直上行展开法。（2）下行展开法3、薄层展开时的注意事项（1）展开容器必须是密闭的，最好是磨砂玻璃盖。（2）展开剂的量。将展开槽平放在台面上时，液层厚度以57mm为宜；斜放与台成1520度角时，以液面不浸及样点为度。（3）由于展开剂易挥发，混合展开剂的比例易发生改变，所以展开剂不宜反复使用和保存，特别是
50、含有低沸点组分的展开剂，只能展开一次。,（四）显色 有些物质展开后即能显示不同颜色的斑点如染料；而大多数物质展开后看不到斑点位置，必须经显色才能确定斑点的位置。所以显色是鉴定物质的重要环节。在毒物检验工作中常用的显色方法有喷雾显色、蒸气显色和紫外光下显色。1、喷雾显色 如果薄层层析用的是干板，从展开槽中取出后必须立即喷显色剂，以免溶剂挥干后吹散吸附剂；如果是湿板，可挥干展开溶剂后再喷显色剂。喷雾显色后多数可使斑点显现出来。但也有些化合物仍看不清斑点的位置，还需要加热或紫外光照射才能显示斑点。,2、蒸气显色 把易挥发的某种试剂置于密闭的容器内（如标本缸、干燥器等），使其蒸汽充满整个容器，然后将已
