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1、移液器（加样枪）使用、校准及日常维护,河北医科大学新药安全评价研究中心,王勇,1，移液器的基础知识2，移液器的使用方法3，移液器的使用注意事项4，移液器快速校准的方法5，移液器的日常维护保养,内容简介,移液器的基础知识,吸头,套筒,容量显示窗,吸头脱卸按钮,体积调节旋钮,移液器的基本结构,排气式移液器是指移液器活塞与吸入液体上表面之间有空气柱，在操作中，被移取的液体与活塞体之间因为空气柱的存在，将无法直接接触；容积式移液器是指移液器活塞与吸入液体上表面之间没有空气柱，在操作中，被移取的液体与活塞体之间因为没有空气柱的存在，将可以直接接触。,移液器的基本分类,标称容量：在给定的有效量程范围内最大
2、的容量,例如标称容量为100l的可调式移液器，其有效量程是10l-100l，但实际上，其最小值可调节到7l左右，最大值可调节到110l左右，但这个范围7l-110l并不是厂家所宣称的量程，也不是该移液器的有效量程。,移液器的容量识别,移液器的使用,正向吸液：吸液时，将移液器按钮按到第一档吸液，释放按钮。放液时，先按到第一档，打出大部分液体，再按下第二档，将余液排出。,移液器的移液方式,反向吸液：适用于粘稠液体和易挥发液体。吸液时将按钮直接按到第二档再释放，这样会多吸入一些液体，打出液体时只要按到第一档即可。此时，吸头内部还有多余液体，可以补偿吸头内部的表面吸附。,移液器的移液方式,1 选择量程
3、合适的移液器 移液器只能在特定量程范围内准确移取液体，如超出最低或最大量程，会损坏移液器并导致计量不准；2 设定容量值2.1 粗调：通过调节旋钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值；2.2 细调：当容量值接近设定值以后，应将移液器刻度显示窗平行放至自己的眼前，通过调节旋钮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响；2.3 设定容量值时的注意事项：在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，旋转旋钮即可。但如果要从小体积调为大体积时，则应先旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。,移液器的操作方法,3 吸液嘴（吸头）的装配：把白套
4、筒顶端插入吸液嘴，在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转至吸液嘴卡紧。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装。吸液嘴卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈；4 预洗吸液嘴：在安装了新的吸液嘴或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，确保移液工作的精度和准度；,移液器的操作方法,5 吸液：先将四指并拢握住移液器上部，用拇指按住塞杆顶端的按钮，向下按到第一停点，再将吸头垂直浸入液面23mm，缓慢平稳松开按钮，吸上液体，并停留12秒钟（粘性大的溶液可加长停留时间）；,移液器的操作方法,6 移液：缓慢抬起移液器取出吸液嘴，确保吸液嘴外
5、壁无残留液体。可用定性滤纸抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。小心勿触及吸液嘴口；7 目测吸入的液体体积是否合理；8 放液：将吸液嘴贴到容器内壁并保持20-40倾斜，平稳地把按钮压到第一停点，停1-2s（粘性大的液体要加长停留时间）后，继续按压到第二停点，排出残余液体。松开按钮，然后将吸液嘴沿着内壁向上移开；9 按吸头弹射器除去吸头，吸取不同样本液体时必须更换吸头；,移液器的操作方法,1 正确填充吸头 当某一吸头的建议（标称）范围为最大吸头容量（标称容量）的 10%至 100%时，可在 35%至 100%这一较小以及优化的范围内实现最高精确度。在此范围内移液会减少对操作人员技法的要求，并可将结果准确度
6、提高。当达到标称容量的 50%时可提供最佳结果。2 吸液时保持垂直入液角 使入液角尽可能地接近垂直位置，否则垂直液柱较小，这样将会吸入过多样品。分液时，吸头应当与容器壁保持较小角度，从而确保良好的排液效果。3 分液技法 对于大多数应用而言，建议在分液时将吸头的末端贴靠容器壁。这可减少或者消除分液后残留在吸头上的样品。沿侧壁向上滑动吸头末端将移液器撤下，从而去除吸头孔处的任何残留液滴。,移液器的使用注意事项,4 吸头入液深度 正确的吸头入液深度对于微量移液器尤为重要。如果吸头入液过深，则随着压力的加大，吸液量将会增多。保留在吸头表面的液体会影响结果。如果吸头入液太浅，则会造成空气进入，从而产生气
7、泡以及导致容量不准确。正确的入液深度可使准确度提高达 5%。,移液器容量 入液深度 2 与 10ul 1mm 20 与 100ul 2-3mm 200 与 1000ul 3-6mm 5000ul 与 10ML 6-10mm,移液器的使用注意事项,5 吸头入液时间 在将样品吸入吸头时，在样品中的入液时间是良好移液技法中的关键因素。在平稳松开定位销按钮之后，必须进行短暂暂停，然后再从样品中取出，以确保将全量样品吸入吸头中。如果量较大以及对于粘性物质而言，必须在等候较长时间后再取出，因为移液器中的气室需要一秒钟的时间才能实现均衡。,6 吸液速率 移液器的吸液速率不尽相同，因此会对结果的精度与准确度产
8、生影响。用户应使用以一种平稳并且受控的方式释放移液器定位销按钮。释放过快的定位销可能出现的最常见后果是：气雾会进入移液器套柄中，从而损坏移液器的内部部件。,移液器的使用注意事项,使用设备及物品：电子天平（测量范围200g；分度值0.1mg）；烧杯（50ml）1个；烧杯（100ml）1个；定性滤纸若干小块；超纯水80ml,1 打开电子天平，空载调零；,2 放入小烧杯待天平显示稳定后，按下归零键归零。给移液器上安装相应的吸液嘴，对移液器的枪头进行预洗；,6 重复5次执行3-5条。记录完毕，将移液器的容量调至下一被检点继续。被检点遵循从小到大的原则进行调整；,5 待天平显示稳定后，马上读取并记录此时
9、电子天平显示出的数值。记录完毕将电子天平复零；,4 使用移液器移取被检容量的超纯水至天平的小烧杯内；,3 将移液器的容量调至被检点。被检点一般选择最小，中间和最大容量值。也可以是某一指定的容量点；,移液器快速校准的方法,移液器实际容量计算：将所测得的质量值带入以下公式，求得移液器在当前温度下的实际容量值；,式中：V 在当前温度下的移液器的实际容量，L；m 被检移液器所排出的超纯水质量，mg；K(t)测定值m和测定时超纯水温度的比例系数；,式中：V 标称容量，L；5次测量的算数平均值，L,移液器的容量重复性计算：将换算得到的实际容量值带入以下公式，求得移液器在当前温度下的容量重复性；,式中：n-
10、1 标准偏差；n 测量次数；S 重复性；,移液器的容量相对误差计算：将换算得到的实际容量值带入以下公式，求得移液器在当前温度下的容量相对误差；,移液器快速校准的数据处理,表一 移液器容量允许误差和测量重复性,移液器的评价标准,1 将移液器调整至最小量程，按照校准方法得到当前的实际容量值，根据与标示容量值的差值，通过移液器上的调准旋钮进行调整；2 当调整后测得的实际容量值与标示容量值符合表1要求时，将移液器容量调整至中间量程继续测量。中间量程符合要求时，再调整至最大量程继续测量。3 如果中间量程或者最大量程有一个不符合表1要求时，则需重新调整至最小量程继续修正。直到3个量程的值都符合表1要求为止
11、。4 修正完毕的移液器，需重新进行校准。5 最小量程低于10L的，不进行修正。如果最大量程和中间量程符合校准要求的，继续使用，否则返厂维修。,移液器的修正方法,1 如长时间不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧；2 定期清洁移液器外壁，可以用95%酒精或60%的异丙醇，再用蒸馏水擦拭，自然晾干；3 使用时要检查是否有漏液现象。方法是吸取液体后悬空垂直放置几秒中，看看液面是否下降。如果漏液，则检查吸液嘴是否匹配和弹簧活塞是否正常；4 当移液器吸嘴内有液体时，严禁将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞；5 使用正确的方法安装吸头，切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装；,移液器的日常维护保养,带空气分界的活塞式移液器可能的误差原因,相关文献,ISO 8655-2 JJG 646-2006 移液器检定规程梅特勒-托利多 良好的移液技法 Eppendorf 移液器使用宝典,谢谢,
