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1、维生素 B2 的含量测定(荧光光度法),OBJECTIVE,1 学习和掌握荧光光度分析法测定VB2的基本原理和方法。2 学习荧光分光光度计的使用方法。,PRINCIPLE,荧光:物质的分子经紫外光照射后,发射出的较原来吸收 光的频率低、波长长的光。不同的荧光物质有各自 的特征激发光波长和荧光波长,利用物质的荧光现 象进行定性、定量分析的方法称为荧光分析法。,F,C,C样品,F=KC,F样品,VB2的C(HAc)=0.1mol/L溶液在紫外光照射下,发出黄绿色荧光,可直接进行荧光测定。pH=2.9,激发 370nm,467nm 发射 527nm,VB2,核黄素,PROCEDURE,1 维生素B2
2、系列标准溶液的配制,2 待测溶液的配制,取样品溶液 5.00ml,0.1mol/L HAc,定容,25.0ml,摇匀,待测溶液,3 标准曲线绘制,1)仪器预热(激发光波长360nm,荧光波长510nm)。2)以系列标准液6号液为标准,调节荧光强度F为90左右。3)固定荧光测定条件不变。分别测定下列标准液16号液(由稀倒浓)的荧光强度F,并记录。4)以溶液组成量度C为横坐标,相对荧光强度F,为纵坐标,绘制标准曲线。,F,C(g/ml),4 样品测定,1)在相同的荧光测定条件下,测定样品液的荧光强度F。2)从标准曲线上查出对应的组成量度,再乘以5,得试样 中维生素B2的组成量度。,DATA,实验结果:CVB2=,QUESTION&DISCUSSION,为何要以5号液来调节荧光强度为90左右?,