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1、芳酸及其酯类药物的分析,典型药物,鉴别试验,含量测定,体内药分,返回主目录,练习与思考,杂质检查,第六章,基本要求,基 本 要 求,一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。三、了解本类药物的体内分析方法。,返 回,一、水扬酸类（一）典型药物结构,第一节 典型药物分类与理化性质,水杨酸（salycylic acid）,阿司匹林（aspirin),对氨基水杨酸钠（sodium aminosalicylate),双水杨酯（salsalate),贝诺酯（benorilate),1.酸性 SA(PKa2.95)、ASA(PKa
2、3.49)、双水杨酯均有酸性。2.溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。3.UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。4.芳伯氨基和酚羟基特性：5.水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水 杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。,（二）主要理化性质,（一）典型药物结构,苯甲酸及其钠盐(benzoic acid）,二、苯甲酸类,羟苯乙酯(ethylparoben),丙磺舒(probenecid),甲芬那酸(mefenamic acid),（二）主要理化性质,1.溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。2.UV和IR光谱特性：分子结
3、构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。3.具有酚羟基特性：4.分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SO2 5.酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基，可用 NaOH直接滴定测定其含量。,三、其他芳酸类(一)典型药物结构,氯贝丁酯（clofibrate）,布洛芬（ibuprofen）,(二)主要理化性质 1.溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液 体；布洛芬为固体，有一定熔点。2.UV和IR特征吸收光谱：基于分子结构中具有苯环和 特征基团。,返 回,一、与三氯化铁反应 含有酚羟基药物可与FeCl3反应；能与FeCl3反应不 一定含酚羟基.,第二节 鉴别试验,1.直接反应 SA
4、在中性或弱酸性条件下，与FeCl3生成紫堇色配位化合物,丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH 5.06.0中与FeCl3生成米黄色 布洛芬与高氯酸羟胺，N，N-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，即显紫色JP（14）方法。基于分子中-COOH的结构。,2.水解或分解后与三氯化铁反应,ASA水解成SA后与FeCl3 反应，成紫堇色,二、重氮化-偶合反应 凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。,1.直接反应 对氨基水杨酸钠 2.水解后反应 贝诺酯具有潜在芳伯氨基 3.甲芬那酸与对-硝基苯重氮盐在NaOH介质中偶合产 生橙红色。,+K2Cr2O7 深蓝色 棕绿色 甲芬那酸+H2SO4 黄色
5、 绿色荧光JP(14),三、氧化反应,1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为156 161。2.双水杨酯水解生成SA：SA的mp为158。3.氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色的异 羟肟酸铁。,四、水解反应,1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。2.丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3,经硝酸氧化成 Na2SO4。3.丙磺舒加热分解，生成SO2气体，有臭味,五、分解产物反应,1.测定max；min。例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；max；265nm,273nm;min。245nm,271nm。2
6、.在max 处测定一定浓度供试液的吸收度A。例如：羟苯乙酯，5g/ml max=295nm;A=0.48 3.在max 处测定供试液的百分吸收系数。例如：贝诺酯在max=240nm;E1%1cm=730760,六、紫外吸收光谱法,4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度 比值法）例如：对氨基水杨酸钠10g/ml;A265/A299=1.561.56 再例如：甲芬那酸14g/ml;A278280/A348352=1.151.30,七、红外吸收光谱法,水杨酸的红外吸收图谱,37002900cm-1,N-H、O-H,1660cm-1,C=O,1610,15701480,1440,C=C,775
7、cm-1,Ar-H,返 回,37002900cm-1,N-H、O-H,1640cm-1,N-H,1580cm-11500cm-1,C=C,1300cm-1,C-N,1188cm-1,C-O,对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱,第三节 特殊杂质检查,一、ASA中特殊杂质的检查 1.溶液的澄清度 主要检查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液应澄清。2.游离水杨酸检查 利用SA 可与FeCl3呈色，用比色法检查。3.易炭化物检查 主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。,主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。
8、间氨基 酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要严格控制。双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取3.0g 样品用乙醚提取0.02mol/LHCl测定方法 滴定V0.3ml。HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）,二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查,三、羟苯乙酯中有关物质的检查,BP收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用TLC法中的供试品自身对照法：,固定相：GF254C18化学键合硅胶,展开剂：甲醇-水-冰醋酸,反相TLC法,甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下 缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐及有关物质。分光光度法：利用Cu 2+与Na-DDC呈色后测定A 1.铜盐检查
9、法 原子吸收分光光度法：BP（2000）2.有关物质的检查 主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲 酸各国药典均采用TLC法中的自身高低浓度对照法。,四、甲芬那酸中特殊杂质的检查,五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查,主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质,GC-FID法,HPLC法：以对-羟乙基酚作内标，用正相HPLC,2.挥发性杂质的检查方法 GC法,1.对氯酚检查,返 回,一、酸碱滴定法（一）直接滴定法 基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如 ASA的含量测定，其原理如下：,第四节 含量测定,1.原理：,2.条件：,在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。,3.应用：,多国药典
10、用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。,（二）水解后剩余滴定法 1.ASA含量测定,原理：,条件：,水溶液,具体试验：,I 份NaOH,I 份NaOH,V,VO,Vo-V相当于ASA消耗 硫酸的ml数,ASA%=(Vo V)FT/W 100%,2.羟苯乙酯的含量测定,（三）两步滴定法,1.ASA片的含量测定,第一步为中和,ASA+NaOH,ASA-Na+H2O,水解产物SA+NaOH,SA-Na+H2O,酸性稳定剂+NaOH,中性盐,第二步为水 解与测定,2.氯贝丁酯含量测定 第一步：中和酸性杂质 第二步：水解与测定,二、亚硝酸钠滴定法,对氨基水杨酸钠有芳
11、伯氨基,在HCl中与NaNO2发生重氮化反应,Ar-NH2+NaNO2+2HCl,Ar-N2Cl+NaCl+2H2O,因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。,三、双相滴定法,是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠的含量测定：,生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。,（一）直接紫外分光光度法 丙磺舒片的测定：Ch.P(2000)在HCl中，采用百分吸收系数法。BP(1998)再盐酸-乙醇,采用百分吸收系数法.USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。,四、紫外
12、分光光度法,（二）离子交换-紫外分光光度法,氯贝丁酯及其制剂 Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质对氯酚时，可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，在甲醇溶液中，226nm波长处，采用对照品比较法。具体计算：W1000 1/100 1/100=Cu(g/ml)Au/As=Cu/C Cu=C(Au/As)W(mg)=10 Cu=10 C(Au/As),（三）柱分配色谱-紫外分光光度法,USP(24)采用此法同时测定ASA胶囊中 ASA和SA。1.SA的限量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试 品溶液的制备。,供试品液：CHCl3液,洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-乙醚
13、,硅藻土，FeCl3-尿素,玻璃棉,硅藻土，Na2CO3,供试品液：CHCl3-HCl液,洗脱液1：HAC-CHCl3(1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml,1-杂质先洗脱2-SA后洗脱,max=306nm AuAs,1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱,max=280nmASA(mg)=C(Au/As),2.ASA的含量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。,Ch.P(2000)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。USP（24）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。,五、HPLC法,（一）ASA栓剂的含量测定,色谱条
14、件：色谱柱ODSC18；流动相为甲醇：0.1%二乙胺：HAC(40:60:4);检测波长280nm；内标物为咖啡因。系统适用性试验：n 2000;ASA与SA与内标物的R 1.5具体计算：Cx=Rx/RRCR W(g)1/50 2/50=Cx W测=1250 Cx,标示量%=W测/W W平/标示量100%=Cx 1250 W平/W 标示量100%,色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱；流动相为NaH2PO3 0.1%HAC液-0.1%HAC乙腈液(50:50);检测波长254nm。系统适用性试验：n 3900;T 2.3;重复性 RSD1.5%具体计算：,（二）丙磺舒原料的含量测定,W 1/100=Cu
15、(mg/ml);Cu=Au/As C 供试品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As),返 回,一、血清中ASA和SA浓度的HPLC法 色谱条件：色谱柱为ODS-C18(150mm 4.6mm,5m)流动相为甲醇-水-正丁醇(30:20:1)检测波长为237nm；内标物为苯甲酸。血清样品预处理 血清100 l+HClO450 l+不同浓度ASA和SA+内标液 涡旋混合2min 离心5min 取上清液20 l进样。,第五节 体内药物分析,回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归 ASA的回归方程：Y=5.810-3+5.2910-2X r=0.9996 SA的回归方程：Y=6.010-3+8.3
16、310-2X r=0.9981 ASA和SA的线性范围分别为：120 g/ml;230 g/ml回收率：空白血清+五种不同浓度测定，ASA为96.0%106.0%;SA为92.0%119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）,色谱条件：色谱柱为LiChrospher100RP(125mm4mm,5m)流动相为25%乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。尿样品预处理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后 用0.5ml蒸馏水活化。2.0ml尿样+内标300l(10g/ml)上柱 1.0ml水洗 脱生物杂质 再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的
17、丙磺舒和内 标。洗脱液0.45m浸滤膜滤过，取5l直接进样分析。,二、尿中丙磺舒的固相萃取净化-HPLC法(运动员违禁药物),线性关系和回收率：取空白尿样2.0ml+不同浓度丙磺舒+内标液 按上述方法分析(浓度范围为0.1g/ml 100g/ml);A丙/A内对C丙回归。回收率：丙磺舒为100%3%(n=14)；内标为101%3%(n=12)；人尿样测定：丙磺舒(单剂量500mg)尿排泄药-时曲线(见P136),三、HPLC法测定人血浆中布洛芬含量 色谱条件：色谱柱为Shim-packCLC-ODS(150mm6mm,10m)预柱为YWG-C18；流动相为甲醇-20mol/L磷酸二氢 钾冲溶液
18、(70:30,pH=4.0);流速为1.0ml/min;检测波长为221nm；内标物为肉桂酸。样品预处理：取肝素抗凝血浆0。24ml+内标液+甲醇0.5ml,振荡 混匀，离心(1000r/min)15min,取上清液10 l直 接进样分析。布洛芬和肉桂酸tR为5.15和2.85min。,回归方程：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：Y=4.05 10-2C 2.0 10-3,r=0.9999。回收率测定：空白血浆+布洛芬对照品高、中、低三种浓度，按样品处理项下测定，测得平均回收率为99.2 1.6%。精密度：日内精密度为RSD1.8%；日间精密度为2.8%。,1.0，1.5，2.0
19、，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0h自肘静脉 取血1.5ml，肝素抗凝，按“样品处理方法”项下操作，求算血 药浓度，结果见P137表61。试验结果：1.血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱 回收率高，分析速度快(6min完成)，分离效果好。2.口服一次后Tmax=30min90min；体内维持4h6h。与文 献报道的结果一致。3.本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。,人血浆样品测定：受试者8人；给药剂量600mg，给药后0.5，0.75,返 回,练习与思考,A型题,1阿斯匹林中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.砷盐 C.水杨酸 D.苯甲酸 E.苯酚2
20、对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.间氨基酚 C.水杨酸 D.苯甲酸 E.苯酚,B型题,FeCl3反应 B.水解后FeCl3反应 C.AgNO3反应 D.重氮化-偶合反应 E.麦芽酚反应 1.阿斯匹林 2.水杨酸 3.SMZ 4.苯甲酸钠,B,A,D,A,A.直接酸碱滴定法 B.两步酸碱滴定法 C.亚硝酸钠溶液滴定法 D.HPLC法 E.双相滴定法 5.苯甲酸钠 6.阿斯匹林 7.阿斯匹林栓剂 8.对氨基水杨酸钠,E,B,D,C,X型题,1.直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有A。水杨酸 B.盐酸普鲁卡因C.对氨基水杨酸钠 D.对氨基酚 E.阿斯匹林2.能发生重氮化-偶合反应的药物有A。水杨酸 B.阿斯匹林 C.对氨基水杨酸钠 D.对氨基酚 E.盐酸普鲁卡因,返 回,
