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1、实验九 果蝇的三点测交,湖州师范学院 生命科学学院生物系,一、实验目的,1、掌握三点测交的原理及方法；2、学习三点测交的数据统计处理及分析方法；3、了解绘制遗传学图的原理和方法,二、实验材料,黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)品系：野生型果蝇（+）：红眼、长翅、直刚毛三隐性果蝇（wmsn3）：白眼、小翅、焦刚毛,三隐性个体：白眼（w）、小翅（m）、焦刚毛（sn3），这三个基因都位于X染色体上。,三、实验仪器设备、药品,体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。,位于同一条染色体上的基因是连锁的，而同源染色体上
2、的基因之间会发生一定频率的交换，使子代中出现一定数量的重组型。重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。而根据基因在染色体上直线排列的原理，基因交换频率的高低与基因间的距离有一定的对应关系。基因图距就是通过基因间重组值的测定而得到的。如果基因座位相距很近，重组率与交换率的值相等，直接将重组值作为基因图距；如果基因间相距较远，两个基因间往往发生两次以上的交换，必须进行校正，来求出基因图距。,四、实验原理,三点测交：用野生型纯合体与三隐性个体杂交，获得三因子杂种（F1），再使F1与三隐性基因纯合体测交，通过对测交后（Ft）代表现型及其数目的分析，分别计算三个连锁基因之间的交换值，从而确定这
3、三个基因在同一染色体上的顺序和距离。通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置，即相当于进行三次两点测验，而且能在试验中检测到所发生的双交换。,四、实验原理,四、实验原理,如果两个基因间的单交换并不影响邻近两个基因的单交换，那么预期的双交换频率应当等于两个单交换频率的乘积，但实际上观察到的双交换值往往低于预期值，因为每一次发生单交换，它邻近也发生一次交换的机会就减少，这叫干涉。一般用并发率表示干涉的大小。,并发率,四、实验原理,雄蝇产生两种配子,雌蝇X染色体上三对基因之间发生交换重组，产生8种雌配子,因为F1代雄蝇为三隐性个体，所以F1代雌雄蝇自交时，即测交，F2（Ft）代可以得到8种表型
4、。,F2（Ft）中亲组合最多，而发生双交换的表现型个体数应最少。,四、实验原理,五、实验步骤,1、选处女蝇：每组正、反交各1瓶，在8-12h内收集处女蝇5-6只，可提前2-3天收集。2、杂交：将处女蝇、雄蝇各5-6只，麻醉、转移到新的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好标签，注明杂交组合、日期、姓名，于25培养；3、释放亲本：7d后，处死杂交亲本（一定要干净）。4、观察F1：再过4-5天，F1成蝇出现，连续观察23天，或在处死亲本7天后，集中观察记录F1表型。要求每组至少统计250只果蝇。,4、F1互交：选取5-10对F1果蝇，转入一新培养瓶（不需处女蝇，正交和反交F1不能混
5、），贴好标签，于25培养。5、释放亲本：7d后，杀死F1代亲本果蝇。6、观察F2：再过4-5d，F2成蝇出现，开始观察眼色，翅形及刚毛形态，同时记录F2各种性状果蝇的数目，连续统计7-8d。注意：（1）要求每组至少统计250只果蝇。（2）如果做正交只需统计雄性个体。（3）统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死。,五、实验步骤,六、实验报告,1、将观察到的F2代（包括正交和反交）各表型个体数填入书本P17表5-1中，确定基因间重组发生的情况；2、计算基因间的重组值及双交换值；3、根据计算结果画出遗传学图。注意用双交换值对位于两端的基因间距离进行校正；4、计算并发系数和干涉值。,七、思考题正交组合F2统计为什么只需统计雄性个体？其雌性个体F2代个体的表型如何？,
