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1、微生物学实验,微生物的分离纯化及培养,吉林大学生物基础实验教学中心,分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法,微生物的分离、纯化及培养技术,目的要求实验原理微生物培养技术结果观察,1.实验目的：1.1了解微生物分离和纯化的原理。1.2掌握常用的分离纯化微生物的方法。,2.实验原理:从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长
2、条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。,微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其
3、丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。,稀释涂布平板法：步骤：1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏培养基冷却至55-60时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中，以此类推，制成不同稀释度。3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10
4、-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28培养箱中培养3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37培养1-2days。5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。,倒平板,菌悬液的配制,菌液的稀释,接种,培养,微生物的纯化培养,平板划线法：1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。2、划线方法 稀释混合平板法：1、先加菌2、倒平板时注意培养基温度3、混合均匀,微生物培养技术：1、斜面接种2、液体培养基接种3、穿刺接种,（一）斜面接种：由已长好微生物的斜面中挑取少量菌种接种至另一空白斜面培养基上。（1）接种前用记号笔在距试管口23cm位置上，注明
5、菌名、接种日期等。（2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”字形。（3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数次。（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。（5）将试管口在火焰上微烧一周。（6）将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烫死菌体，然后用环在菌苔上轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢慢的从试管中抽出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上划线（波浪或直线），使菌体沾附在培养基上。（7）将接种环抽出，灼烧管口。（8）塞上棉塞。（9）将接种环经火焰灼烧灭菌。,（二）液体接种：由斜面菌种接种在液体培养基中（1）接种前用记号
6、笔在距试管口23cm位置上，注明菌名、接种日期等。（2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”字形。（3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数次。（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。（5）将试管口在火焰上微烧一周。（6）参照图（7-1）（7）将接种环抽出，灼烧管口。（8）塞上棉塞。（9）将接种环经火焰灼烧灭菌。,（三）穿刺接种：这是常用来接种厌氧菌，检查细菌运动性，或保藏菌种的一种接种方法，接种工具用接种针。（1）接种前用记号笔在距试管口23cm位置上，注明菌名、接种日期等。（2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”字形。（3）用火焰将接种环烧
7、红，然后将接种环来回通过火焰数次。（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。（5）将试管口在火焰上微烧一周。（6）参照图（7-1）（7）将接种环抽出，灼烧管口。（8）塞上棉塞。（9）将接种环经火焰灼烧灭菌。,将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4冰箱中保存。,结果与观察：1.检查接种后培养物的生长情况和染菌情况。2.将实验结果填入下表 3.绘出平板上出现的菌落的生长和分布情况。4.观察与记录以下内容：序号 来源 大小 形状 边缘 颜色 表面 代谢物 种类,思考题,1、如何确定平板上某个单菌落是否是纯培养？请写出主要的实验步骤。2、分离单孢子前为什么先使孢子萌发？3、如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地方取样品为宜？并说明理由。4、如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方案。5、为什么高氏一号培养基和马丁氏培养基中要分别加入,
