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1、判断,1.将目的基因整合到受体细胞染色体DNA上的过程属于基因重组,2.若能在植物细胞中检测到抗性基因，则说明该基因工程成功了,3.体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体,4.动物可通过细胞融合技术培养出新品种,5.一种基因探针能检测水体中的各种病毒,6.人工种子相比天然种子可随意改变植物的遗传性状,10.一种限制酶只能识别一种特定核苷酸序列,11.生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能够筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂能选择性地抑制骨髓瘤细胞的DNA复制。,7.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经组织培养获得的愈伤组织基因相同。,8.将人的胰岛素基因导入大肠杆菌细胞内，使大肠杆菌生产人的
2、胰岛素技术属于蛋白质工程。,9.利用PCR技术扩增目的基因，在PCR合成仪中应加入的物质不应该有解旋酶。,12.小鼠骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体。,13.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性,14.在植物细胞组织培养中胚不能作为组织培养的材料,16.植物体细胞杂交过程就是原生质体融合的过程,17.将目的基因直接导入大肠杆菌，然后让其感染 并转入某植物细胞中,15.对胚胎进行性别鉴定时可取囊胚的滋养层细胞 做DNA分析。,18.外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子 之间才能进行复制,19.重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分 子脱氧核糖和磷酸交替连接,20
3、.无论动物细胞的原代培养，还是传代培养过程中都会发生细胞贴壁和接触抑制的现象。,21.目的基因是否被整合到受体细胞DNA上，检测 方法是用同位素标记的目的基因做探针，进行 DNA分子杂交实验。,22.排卵是指卵子从卵泡中排出,1.DNA重组技术的工具酶：,限制酶、DNA连接酶,2.DNA重组技术的工具：,限制酶、DNA连接酶、运载体(载体）,3.在基因工程中使用的载体：,质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒,4.天然质粒是否能直接用做载体？,不能,5.不同生物的DNA分子（或基因）能重组的原因是：,结构和基本单位相同,基因工程,6.基因工程的基本操作程序,（核心）,7.目的基因的获取途径,基因文库、
4、PCR技术扩增、人工合成,8.PCR技术扩增目的基因,DNA双链复制,(1)原理：,(2)前提：,要有一段已知目的基因的核苷酸序列,(3)互补链延伸时所用酶：,Taq酶（热稳定性DNA聚合酶）,9.基因表达载体的组成,(1)目的基因(2)启动子(3)终止子(4)标记基因(抗性基因或荧光蛋白基因）,10.将目的基因导入植物细胞,（1）采用最多的方法：,农杆菌转化法,（2）农杆菌Ti质粒上有可转移的,T-DNA,11.将目的基因导入动物细胞,（2）常用的受体细胞 受精卵,（1）采用最多、最有效方法,显微注射技术,12.将目的基因导入微生物细胞,常用处理方法Ca2+处理使细胞呈感受态,13.目的基因
5、的检测与鉴定,（1）检测:,分子水平,是否插入目的基因（关键）：,是否转录：,是否翻译：,（2）鉴定:,个体水平,做接种实验,分子杂交,分子杂交,抗原抗体杂交,探针：,用同位素标记的目的基因的片段,14.将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等重组在一起得到的转基因动物，称为,乳腺（乳房）生物反应器,15.治疗遗传病的最有效手段是：,基因治疗,16.蛋白质工程直接操作对象是：,基因,是否遵循中心法则？,遵循,是否需要基因工程中的工具酶？,需要,被喻为：,第二代基因工程,1.植物组织培养技术,胚状体或丛芽,离体植物组织、器官、细胞(外植体）,试管苗,(1)当生长素含量高于细胞分裂素时，主要诱导植物
6、组织,脱分化和根原基形成,(2)反之则诱导,再分化和芽原基形成,愈伤组织,细胞工程,2.植物体细胞杂交技术,(1)去壁的常用方法：,酶解法（纤维素酶和果胶酶）,(2)原生质体融合方法：,物理法：离心、振动、电激等,化学法：聚乙二醇（PEG）,(3)细胞融合的原理：,细胞膜的流动性,(4)意义:,克服了远缘杂交不亲和的障碍,3.动物细胞培养的条件,(1)无菌、无毒的环境,(2)营养,(3)温度和pH,(4)气体环境,培养液,抗生素,培养液,促生长因子,动物血清、血浆,36.5,5%CO2,细胞代谢,维持培养液PH,M中期卵母细胞,4.体细胞核移植的受体细胞通常为,5.杂交瘤细胞的特点：,即能迅速
7、大量繁殖、又能产生专一抗体,特异性强、灵敏度高、可大量制备,6.单克隆抗体的主要优点,7.利用单克隆抗体可制作“生物导弹”，其作用为：,导向作用(特异性）,8.制备单克隆抗体是，选择B淋巴细胞的原因是,每个B淋巴细胞只产生一种特异性抗体,9.诱导动物细胞间融合的方法与植物细胞不同的是：,用灭活的病毒,10.目前使用的或冷冻保存的正常细胞为：,10代以内，以保持正常二倍体核型,传代,突变,癌细胞,接触抑制,贴壁生长,13.精子细胞变形中的主要变化：,1)细胞核2)高尔基体3)中心体4)线粒体5)细胞内其他物质,精子头的主要部分,头部的顶体,精子的尾,线粒体鞘,原生质滴,14.卵子受精的重要标志：
8、,在卵细胞膜和透明带间隙观察到两个极体,15.获能的精子和卵子相遇时，依次会发生什么现象？（防止多精入卵的两个屏障是什么？）,透明带反应,卵细胞膜反应,16.哺乳动物的受精过程主要包括：,顶体反应,卵细胞膜反应）,（透明带反应,精子穿越放射冠和透明带，进入卵细胞膜，,原核的形成和融合。,17.卵子的发生,(1)发生部位：(2)时间：减数第一次分裂是在雌性动物 完成；减数第二次分裂是在 的过程完成的。,卵巢,始于胚胎时期性别分化后,排卵前后,精卵结合,18.胚胎发育,卵裂期：,在透明带内进行，细胞数量不断增加，但胚胎 并不增加，或略有减少。,有丝分裂,总体积,桑椹胚：,由具有 构成，细胞数在32
9、个左右。,全能性细胞,囊胚：,细胞开始出现了。,分化,内细胞团：,滋养层：,发育成胎儿各组织,发育成胎膜和胎盘,人工操作,体外条件,早期胚胎,促性腺激素,输卵管,直接,21.通常采用的对精子获能处理的方法有：,培养法和化学诱导法,（肝素或钙离子载体A23187溶液）,22.胚胎移植的实质是：,早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移,发育培养液,无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等。,24.冲卵是指:,从子宫内冲洗出胚胎,25.将 均等分割，否则影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。,内细胞团,26.胚胎分割的份数越多，操作的难度会越大，移植的成功率也。,越低,27.胚胎分割可以
10、看做动物 的方法之一,无性繁殖或克隆,来源：,28.胚胎干细胞,早期胚胎或原始性腺,形态特点：,体积小,细胞核大,核仁明显,功能特点：,发育的全能性,29.胚胎移植的生理学基础,同种动物的供体和受体发情排卵后生殖器官的 是相同的,生理变化,为供体的胚胎移入受体提供相同的。,生理环境,早期胚胎形成后，在一定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系，而是处于 状态。,为胚胎的收集提供了可能,游离,受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生。,免疫排斥反应,供体胚胎可与受体子宫建立正常的 和 联系，但其 不受影响。,生理,组织,遗传特性,为胚胎在受体内的存活提供了可能,为移植后的胚胎继续发育提供了营养等方面的保障,选择,供体母牛,受体母牛,供体公牛,配种,质量检查、培养,分娩（胚胎移植的犊牛）,30.胚胎移植的基本程序,同期发情处理,超数排卵,冲卵,胚胎移植,妊娠检查,
