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1、实验五肠道杆菌和厌氧菌、真菌,一、肠道杆菌形态、培养特性及生化反应 1.形态:大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌 2.培养（中国兰平板）大肠杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、痢疾杆菌,3.生化反应：（示）双糖铁基培养基 尿素培养基,双糖铁基培养基,半固体培养基,固体斜面培养基,成分：硫酸亚铁铵硫代硫酸钠乳糖酚红,H2S试验,乳糖发酵试验,成分：琼脂(0.35%)(动力观察)蛋白胨水葡萄糖 酚红,葡萄糖发酵试验,A.接种大肠杆菌B.接种痢疾杆菌C.未接种的对照管,3.生化反应：（示）双糖铁基培养基 尿素培养基,尿素培养基,成份：20%尿素水溶液 0.6%酚红溶液原理：尿素酶分解尿素产氨气,二、
2、肠道杆菌分离鉴定步骤 1.粪便中国兰平板 兰色、较大、不透明菌落-大肠杆菌 无色、较小，半透明菌落-致 病 菌 2.生化试验：双糖铁基、尿素、吲哚 3.血清诊断,操作：生化反应 接 种：1、双糖铁基 葡萄糖发酵管2、蛋白胨水培养基 硫酸亚铁半固体培养基 菌 株：中国兰平板(1-8)：单号；双号 致 病 菌,操作：生化反应 接 种：双糖铁基菌 株：中国兰平板(1-8)：单号；双号 致 病 菌,接 种：1、双糖铁基 葡萄糖发酵管 2 蛋白胨水培养基 硫酸亚铁半固体培养基 菌 株：中国兰平板(1-8)：单号；双号 致 病 菌,示教,1.厌氧培养 2.双糖铁基 3.尿素培养基 4.R质粒接合传递,操作
3、,实验结果观察药敏试验,上次试验结果观察,双糖铁基培养基结果观察 乳糖 H2S 葡萄糖 动力乙副伤寒杆菌+痢疾杆菌+大肠杆菌+,R质粒接合传递试验,供体菌：福氏痢疾杆菌 耐链霉素、氯霉素、四环素和磺胺药物受体菌：大肠杆菌 耐利福平培养基：中国兰平板 100g/ml利福平；20g/ml氯霉素,厌氧芽胞梭菌与厌氧培养法 1、形态观察 破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌,破伤风梭菌,鞭毛,芽胞,产气荚膜梭菌,肉毒梭菌,2、厌氧培养法 用于专性厌氧菌的培养,方法：,1)将普通培养基置于无氧环境中培养 如:焦性没食子酸吸氧法,2)厌氧培养基:在培养基中加氧化还原剂 如:疱肉培养基,a.原理：焦性没食子酸
4、在碱性溶液中能迅速吸收氧气，生成深棕色焦性没食子橙，利用此法可除去试管或平皿等容器中的氧气。,（1）焦性没食子酸法,焦性没食子酸培养基,焦性没食子酸培养基示意图,血平板,纱布,石蜡,b.培养结果观察,产气荚膜梭菌血平板厌氧培养,（2）疱肉培养基,a.原理 动物组织耗氧法,还原型氨基酸 谷胱甘肽,凡士林,不饱和脂肪酸,破伤风梭菌,产气荚膜梭菌,正常对照,梅毒螺旋体（暗视野映光法）,1、形态:单细胞酵母菌 如白假丝酵母菌 新生隐球菌 多细胞丝状菌,真菌的形态与培养,白假丝酵母菌,新生隐球菌（墨汁染色）,2、培养特性:沙保弱培养基,成份：蛋白胨 1g 琼脂 2g 葡萄糖 4g 蒸馏水 100ml p
5、H 45左右,菌落特征:酵母型菌落 类酵母型菌落 丝状型菌落,单细胞,多细胞,白假丝酵母菌,新生隐球菌,酵母型菌落,类酵母型菌落,酵母型菌落,类酵母型菌落,狂犬病病毒包涵体（内基小体）,巨细胞病毒包涵体,药 敏 试 验,（抗生素敏感试验）,目的要求:,1、了解抗生素敏感试验的操作方法2、初步作为抗生素敏感试验结果的 判断3、了解常用抗生素的抗菌谱,纸片法,材料：1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌2、培养基：普通琼脂平板3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉 素1单位，其它抗生素为10微克,绿脓杆菌,葡萄球菌,大肠杆菌,判断：,分枝杆菌与抗酸染色,1、形态2、结构特点3、抗酸染色,结核杆菌（抗酸染色）,结核杆菌（抗酸染色）,抗酸染色（1）温染：石炭酸复红溶液 5 min（2）脱色：3%盐酸酒精溶液 0.5-1 min（3）复染：碱性美兰 溶液 0.5 min,
