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1、兽医微生物学实习,肠杆菌科,实习报告书写格式,进入教务处网站“热点工作”“常用表格下载”左下角“实习教学资料”“14 南京农业大学实习报告统一格式”,一、目的要求,1 了解大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）形态与染色特性以及主要培养特性；2 熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）常规微生物学诊断法；3 掌握大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）生化试验的方法和原理；4 熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）在选择性和鉴别培养基上的生长表现；,二、实验材料,1.菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合液 产气肠杆菌和变形杆菌混合液2.培养基：半固体培养基 SS平板 麦康凯平板 三糖铁高层斜面 蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水
2、3.生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、卫矛醇、枸橼酸盐、H2S、尿素4.生化试剂：吲哚试剂，M.R、V.P 试剂,三、内容与安排,一、配培养基：S.S、麦康凯、半固体、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水二、细菌分离培养：将大肠杆菌、沙门氏菌混合肉汤，产气、变形混合肉汤分别接种麦康凯、SS平板，染色镜检三、挑取麦康凯和SS平板上单一菌落做染色、镜检，挑单一菌落接种三糖铁斜面(涂布、穿刺)四、观察三糖铁中细菌生长情况。并挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种蛋胨水、葡胨水、半固体、微量生化管，37培养48h。五、观察结果,第一天、配培养基,第一组(1-5号）S.S培养基：50g SS培养基
3、+800ml蒸馏水，煮沸溶化浇平板（15ml/块平板），无需高压第二组（6-10号）麦康凯培养基：44g麦康凯培养基+800ml蒸馏水+1.6g琼脂粉，煮沸，高压15磅，15分钟，浇平板第三组（11-15号）三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸馏水，煮沸溶化，装长试管50根（10ml/管），高压15磅，15分钟，做高层斜面第四组（16-20号）葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水，加热溶解，调pH至7.6，分装40根短试管高压（3指半高，约5-8ml）第五组（21-25号）蛋白胨水：1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水
4、，调pH至7.6，分装40根短试管，捆扎，高压，12115分钟（2指高，约2-4ml）第六组（其余学号）半固体：（73班）：分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml，加热溶解，调pH7.6，过滤（74班）：称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml）,第二天、分离培养,在麦康凯平板和SS平板上接种待检材料（大、沙混合菌液;产气、变形混合菌液）置37恒温培养箱内培养24小时观察每种平板上细菌的生长情况比较单个菌落的形态：染色镜检,SS琼脂 强选择性培养基,培养基中的煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、柠檬酸钠抑制非肠
5、道 菌生长不能发酵乳糖的细菌，菌落橘黄色分解乳糖的细菌产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心混浊的深红色菌落柠檬酸铁使产生硫化氢的菌落中心呈黑色硫代硫酸具有缓和胆盐对细菌的有害作用及煌绿、中性红的毒性作用。,麦康凯培养基,用于肠道菌的分离与鉴定能分解乳糖的细菌-菌落红色不能分解乳糖的细菌菌落灰白色,第三天 观察结果 接种三糖铁,观察麦康凯、S.S平板上细菌生长情况可看到几种菌落，是否圆形光滑凸起透明的菌落挑取单个的细小透明菌落或者红色菌落的一半作革兰氏染色，镜检，另一半菌落接种三糖铁培养基（接种时，先涂布斜面，后穿刺底层）、接种蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、半固体37恒温培养24-48h。,三糖铁琼脂,
6、用于测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵作用及能否产生硫化氢能发酵乳糖、蔗糖 培养基呈黄色发酵葡萄糖不发酵乳糖、蔗糖 底层呈黄色、斜面部分为红色(少量酸接触空气而氧化 细菌生长利用含氮物质,生成碱性化合物)能产生硫化氢 培养基呈黑色能产气的细菌 底层琼脂内有气泡,第四天 观察结果 做生化试验,观察细菌在三糖铁斜面/底部的生长情况：是否产酸产气，培养基是否变红。挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素、枸橼酸盐培养基，37培养24h，观察结果，记录。,第五天 生化结果判定,1靛基质试验（吲哚试验）取出试管（蛋白胨水）乙醚1ml，振荡，静置，待分层后沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛3-5滴，在分界处出现红色玫瑰吲哚为阳性。2葡萄糖蛋白胨水一分为二（1）甲基红（MR）试验：取出试管加入甲基红3-5滴，摇匀，培养基变红色为阳性，不变色为阴性（2）VP试验：取出试管VP甲液0.6ml，摇匀再加VP乙液0.2ml，15min后看结果，变红为阳性，不变为阴性，橙色为结果不可信，需重做。细菌生化反应结果表,第六、七天 写作业、整理打印实习报告,1、细菌生化反应结果记录表2、大肠杆菌与沙门氏菌在三糖铁琼脂斜面与底部生长表现有何不同？简述原理。,
