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1、动物细胞工程,考点一.动物细胞培养,一轮材料P238-239,动物细胞培养原理：_。其过程所用培养基一般是_培养基。动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因为_.动物细胞培养过程中两次用到_，第一次的作用是_；第二次是_，目的是避免动物细胞的接触抑制。将动物细胞分散成单个细胞培养的原因：保证细胞所需要的营养供应。保证细胞内有害代谢产物的及时排出。,细胞增殖,液体,分化程度低，增殖能力强，更易于培养。,胰蛋白酶,将剪碎的组织分散成单个细胞,将贴壁细胞从瓶壁上分离下来,特 别 提 醒,微量元素,1.分析命题热图，明确答题要点 如图，为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E
2、两点表示经筛选、分装后继续培养。据图分析：,(1)原代培养和传代培养的分界点是哪个？,(3)E点后细胞大多数具有异倍体核型，这样的细胞有什么特点？,E点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。,(2)AB段和DE段繁殖速度缓慢的原因是什么？,B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。,发生了接触抑制。,C,难,易,选取10代以内的细胞，因为：_。,一般能保持正常的二倍体核型,重组细胞,重组胚胎,1.(2016全国课标卷，40)下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程。回答下列问题：,(1)图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为_。过程表示去除细胞核，
3、该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用_的方法。,XX或XY,显微操作去核法,(2)经过多次传代后，供体细胞中_的稳定性会降低。因此，选材时必须关注传代次数。(3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是_。(4)与克隆羊“多莉(利)”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了 _,遗传物质（核型）,卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响,已经分化的动物体细胞核具有全能性,1.动物细胞融合(1)原理：_。(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、_、电激等。(3)意义：突破了 的局限，使 成为可能，也为制造_开辟了新途径。,细胞膜的流
4、动性,灭活的病毒,有性杂交方法,远缘杂交,单克隆抗体,考点三、动物细胞融合与单克隆抗体的制备,抗 体,(1)优点：特异性强、，可大量制备。,2.单克隆抗体(1)制备过程,杂交瘤细胞,能产生特异性抗体,灵敏度高,妙学妙记1、制备过程的“122”一融合，二筛选，二培养,2、单克隆抗体的优点 可、特、灵,3）、两次筛选目的是什么？,第1次-杂交瘤细胞（多种）。第2次-能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。,问题强化：,1）、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理,2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。,4）、为什么细胞
5、融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？,灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,1.(2014课标卷，40)研究者用抗原(A)分别免疫3只小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)与体外培养的骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入PEG诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到1600
6、0以上，则小鼠最少需要经过_次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是_小鼠，理由是_。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_，体系中出现多种类型细胞的原因是_。(3)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_。,4,Y,Y小鼠的抗体效价最高,B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞,细胞融合是随机的，且融合率达不到100%,正常细胞不能无限增殖,2.（海南高考）单纯疱疹病毒型(HSV)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV的单克隆抗体可快速检测HSV。回答下列
7、问题：,(1)在制备抗HSV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗_的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了_反应，再从小鼠的_中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的_细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是_。,(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的_中使其增殖，再从_中提取、纯化获得。(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV蛋白，其原因是该抗体具有_和_等特性。,HSV蛋白,体液免疫,脾脏,骨髓瘤,无限增殖且产生特异性抗体,腹腔,腹水,灵敏度高,特异性强,易错清零,易错
8、点1动物细胞培养时，可使用胰蛋白酶或胃蛋白酶。,胃蛋白酶适宜pH约为1.8。胰蛋白酶为7.27.8，而动物细胞培养的适宜pH为7.27.4。,易错点2动物细胞培养液中加入5%CO2的目的是维持气体平衡或用于呼吸。,目的是“维持培养液的pH”。,易错点3选择M末期的卵母细胞作核移植的受体细胞。,M中期的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。,易错点4混淆原代培养与传代培养,(1)原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶前的细胞培养。(2)传代培养：原代培养的细胞由于空间不足或细胞密度过大导致接触抑制，需重新用胰蛋白酶处理，进行分瓶扩大培养，即传代培养。,动物细胞融合,单克隆抗体的制备,动物细胞培养,动物体细胞核移植技术,胚胎工程,动物细胞工程,小结,谢谢大家,
