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1、研究生实验技能培训分子生物学实验常用仪器介绍,实验中心,PH计,种类,台式（实验室用）PH计 便携式（实验室用）PH计工业用PH计 多功能（实验室用）PH计,工作原理,pH值通常用电位法测量可分为电极部分和电计两部分。电极的主要作用就是将被测溶液的酸碱性等信号转化为电位值。电计的作用就是将电极转换的电位值等信号进行放大处理并指示(显示)出pH值等数据。,pH计的校正,生产厂家一般提供两瓶标准溶液一瓶pH值等于6.86（混合磷酸盐的标准缓冲溶液），用于标定仪表零点。一瓶pH等于4（邻苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液），用于标定仪表的信号输出斜率。,pH计的使用注意事项,测试前，用蒸馏水冲洗电极，洗去保护
2、液。测量电极上的玻璃探头，小心碰撞，避免破碎。完成测试后，用蒸馏水冲洗电极，吸干，套上套管，关闭电源。,METTLER TOLEDO AG285 天平,天平种类,分析天平电子天平精密电子天平托盘天平砝码,工作原理,天平是称量物体质量的衡器。常用天平都采用单杠杆结构，运用“杠杆平衡时加在等力臂上的力相等”这一原理制成。电子天平是用电磁力平衡被称物体重力的天平。,基本概念,全称量 天平所能称量的最大质量值（满载值），常以“克”（g）为单位表示。感量 使天平指针从平衡位置转到刻度盘一分度所需的最大质量。因此，感量也叫做“分度值”，常以“毫克”（mg）为单位表示。（e,d)这一数值愈小，天平就愈灵敏。
3、Max:81g/210gd=0.01 mg/0.1mg,如何选择天平,用一台实际标尺分度值d为1mg，检定标尺分度值e为10mg，最大称量为200g的Mettler电子天平，用来称量7mg的物体，这样是不能得出准确结果的。在JJG98-90非自动天平试行检定规程中规定，最大允许误差与检定标尺分度值“e”为同一数量级，此台天平的最大允许误差为1e，显然不能称量7mg的物体。,倒置生物显微镜,按其观察对象和光路结构可分为 正立、倒置和体视显微镜按其光学性质可分为明场和暗场暗场又包含相差、霍夫曼、荧光和偏光,显微镜的分类,暗视野显微镜,在培养细胞活体观察中以倒置暗场为主一般暗视野显微镜虽看不清物体的
4、细微结构，但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2um)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。,细胞培养中显微镜的运用,细胞数量记录细胞形态观察细胞动力学记录,NIKON TE2000-U 倒置荧光显微镜,工作原理,荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。,基本构造,由普通光学显微镜加上一些附件：荧光光源 激发滤片 双色束分离器 阻断滤片等,荧光显微镜分类,透射式汞灯光源
5、激发滤色镜吸收滤色镜暗场聚光镜,落射式汞灯光源激发滤色镜分色镜吸收滤色镜,荧光显微镜内部构造,1 观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构2 标本中的荧光物质在紫外线激发下产生各种颜色的荧光，借以研究该荧光物质在细胞和组织内的分布。3 细胞内的某些成分可与荧光素结合而显荧光，如溴化乙锭与吖啶橙可与DNA综合，进行细胞内DNA含量测定。4 荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究，即以异硫氰酸或罗丹明等荧光素标记抗体（一抗或二抗），用该标记抗体直接或间接地与细胞内的相应抗原结合，以检测该抗原的存在与分布。免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断。,主要用途,荧光的种类,自发荧光（固有荧光）二
6、次荧光,组织中的自发性荧光物质,神经细胞和心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光肝贮脂细胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈绿色荧光某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类物质（儿茶酚胺、5羟色胺、组胺等）在甲醛作用下呈不同颜色的荧光组织内含有的奎宁、四环素等药物也呈现一定的荧光。,Fluorescence image,DNA in blue and Microtubules in green,细胞增殖试剂盒Cy5-连接的抗-BrdU 来检测细胞增殖,CypHer 5 荧光素酸度敏感的荧光素，用于活细胞受体激活/内陷测定,CyDye荧光-连接的二抗，用于固定细胞测定,绿荧光目标蛋白测定-监测细胞内蛋白
7、位移,RAC-1,WU,WIB,DUAL BAND,WIBA,WIG,WIB,DAPI+FITC,FITC+PI,双重染色标本的单色和双色观察,1打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟 才能达到最亮点。2使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引 起眼的损伤。3高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需 经5分钟后才能再启动，否则会不稳 定，影响汞灯寿命。,使用注意事项,Gene pulser X cell电穿孔系统,工作原理,电穿孔是功能强大的将核酸、蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RN
8、A、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。,系统的组成,由一个主单元、2 个附属模块（CE 与PC 模块）及ShockPod 电击槽组成CE 模块（电容扩增器模块）与主单元配合使用可电转化多数真核细胞（包括哺乳动物细胞和植物原生质 体）。PC 模块（脉冲增强控制器模块）建议用于细菌和真菌的电转化，或其它需要在小体积和高电阻样品上施加高电压脉冲的应用。系统有 3 种组合。,电击杯选择指南,0.4 cm 间距电击杯宽间距、低场强、应用于哺乳动物细胞和其它真核细胞0.2 cm 间距电击杯窄间距、高场强、应用于酵母、细菌和其它真核细胞0.1 cm 间距电击杯最窄间距、极高的场强，浅底用于小
9、体积样品(4080 l)应用于酵母和细菌转化,主要用途,用于哺乳动物细胞、胚胎细胞或植物原生质体的穿孔，可有效转移任何大小或复杂度的DNA、蛋白质，适用于原核细胞和真核细胞的转染，细菌和酵母的转化。,超低温冷藏柜,生物材料的冻存（1）,08 疫苗保存箱 可用于储存疫苗、药剂、血液等28 药品保存箱 药品保存箱是医疗行业冷藏药品的专业设备，也可用于储存生物制品4 血液保存箱 医疗行业冷藏血液（全血）的专业冷藏设备，也可以用于冷藏药物，生物制品25 40 低温保存箱 可用于保存血浆，生物材料，疫苗、试剂等,生物材料的冻存（2）,40低温保存箱 可用于特殊材料的低温实验、冻存血浆、生物材料、疫苗等6
10、0 70超低温保存箱 保存生物材料、血浆以及特殊材料的低温试验86 超低温保存箱 用于保存病毒、病菌、红细胞、白细胞、皮肤、骨骼、细菌、精液、生物制品，远洋制品，特殊材料的低温试验等156 深低温保存箱 用于保存病毒、病菌、红细胞、白细胞、DNA/RNA、皮肤、骨骼、细菌、精液、生物制品临床试验品等。,ELX800酶标仪,主要用途,用于读取酶联免疫试剂盒的反应结果，可进行单克隆抗体筛分、抗生素灵敏度检验(食品安全药物残留快速检测)以及其它需要进行比色的分析。,酶标仪测定原理,在特定波长下，检测被测物的吸光值。在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如
11、果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。,主要性能说明,速度：30秒/96孔板储存：储存55种测试项目，并能储存最近的8个测试结果，可储存25条标准曲线滤光片：滤光轮可放5块滤光片，仪器配405、450、490、630nm4块滤光片线性：405nm，0-2.000Abs1%450nm，0-2.000Abs1%外接口：电脑接口
12、（RS232）、打印机接口波长范围：400-750nm具有单、双波长设定吸光度范围：分辨率：0.001Abs,操作注意事项,A.使用移液器加液，移液枪头不能混用。B.洗板要干净，避免交叉污染。C.严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。D.请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作 完成注意做好清洁工作。E.不要在测量过程中关闭电源。F.对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应 根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。G.使用后盖好防尘罩。,荧光定量PCR仪应用,定量检测绝对定量：基因表达研究、转基因食品检测、病原体检测相对定量：基因在不同组织中的表达差异、药物疗效考核点突变检测与疾病相关的
13、等位基因点突变检测SNP检测,Real Time PCR 原理,在PCR反应体系中加入荧光物质，并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程，最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。,Real Time PCR 检测方法,荧光染料嵌合法(SYBR Green I)荧光探针法 TaqMan probe Cycling probe Molecular Beacon probe Hybridization probe Scorpions probe Amplifluor probe,Agent of TaKaRa,瑞真生物 RayGene Bio,荧光染料嵌合法原理,SYBR
14、Green I,SYBR Green I是具有绿色激发波长的染料，能结合于任意dsDNA双螺旋小沟区域的。,Agent of TaKaRa,瑞真生物 RayGene Bio,热变性,引物退火,延伸反应,荧光染料嵌合法原理,RayGene Bio,Agent of TaKaRa,TaqMan 探针法原理,Agent of TaKaRa,瑞真生物 RayGene Bio,TaqMan probe为一寡核苷酸(20-24bp)5端标记一个荧光报告基团(Reporter)3端标记一个荧光淬灭基团(Quencher),TaqMan 探针法原理,信号强度与结合探针的DNA分子数成正比,Real Time
15、PCR 检测系统,瑞真生物 RayGene Bio,Agent of TaKaRa,LightCycler 480,Rotor-gene6000,MiniOpticon,Mx3005PTM,LINE-GENE FQD-66A,ABI PRISM 7500,iQ5 Real-Time PCR Detection System,TaKaRa TP800,开、关机顺序,开机：先便宜，后贵的。关机：先贵的，后便宜。,选择生物安全柜的理由,工作对象具有生物危害原代培养物、菌毒种以及诊断性标本等-具有潜在感染性的实验材料属于人间传染的病原微生物名录中第一、二、三和四类微生物,选择生物安全柜的理由,容易产生
16、气溶胶的工作行为 对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时，将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时，在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶，采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中，对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡，对感染性液体进行离心，进行动物操作时。,选择生物安全柜的理由,生物安全柜能够阻止工作中所产生的气溶胶对外环境或者操作者本身产生危害，还可以减少样本之间由于气溶胶产生的交叉污染。,生物安全柜基本工作原理,定向气流：风幕HEPA滤器：一种一次性使用，框架内有多重褶迭的干性过滤材料的过滤器，对0.3微米气溶胶的过滤效能达到99.97%。保证排出气体和内循环气体的无菌状态。,I
17、I级A2型生物安全柜,反面,教材,生物安全柜的使用,个人防护要求：在使用生物安全柜时必须穿个人防护服，戴手套（手套应套在隔离衣的外面）最好带口罩和帽子，根据需要带防护眼罩或者面罩。,生物安全柜的使用,生物安全柜内物品摆放原则按照从洁净区到污染区的方向摆放所有物品尽可能放在工作台后部将废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品放在柜内某一侧前进气格栅不能被纸、仪器设备或者其他物品阻挡,生物安全柜的使用,生物安全柜的使用,工作结束后的要求：将安全柜继续运行至少3min来完成“净化”过程。将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂擦拭每天实验结束后，对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭。等待5分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，紫外灯照射30分钟。,生物安全柜的熏蒸,生物安全柜的熏蒸,THANK YOU!,
