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1、精子常规分析与形态学染色,河南省人口和计划生育科学技术研究院,孕前优生健康检查临床检验操作技术培训,精液常规检验,采集：采集前必须禁欲27天，采集后立即送检，存放时间不要超过1小时，运送时温度与体温相近。外观和气味：正常呈灰白或乳白色，厚稠胶冻状，液化后呈乳白色半透明状。精子数量少，精液透明且稀薄；精液中有较多红细胞，可呈红褐色；黄色精液见于精液中有较多脓细胞，或服用药物。量：正常=2mL，下限是1.5mL，小于1mL，视为异常，见于精囊腺和前列腺病变。,液化：室温正常510分钟液化，2040分钟可完全液化，1小时仍不液化应视为异常，一般与缺乏蛋白水解酶有关。粘稠度：精液粘稠度异常可影响精子的
2、活力和穿透力。用吸管吸入精液，滴落精液观察，粘稠度增加时，精液悬滴可形成2cm的拉丝。PH值：正常精液PH呈弱碱性，=7.2（滴PH试纸30秒）。精液的PH过低，可影响其对阴道酸性环境的调节作用，影响精子活力。亦可能与精囊发育不良有关。,精子浓度的参考值下限为：15X106/mL精子总数的参考值下限为：39X106/mL精子密度过低或无精见于：1、睾丸生精功能异常2、输精管、射精管、精囊存在缺陷3、精索静脉曲张4、生殖道炎症5、流行性腮腺炎并发睾丸炎6、绝育手术后7、放射性照射，有害化学物质污染及药物作用等。,精子存活率：活精子数量在精子总数量中所占的比例。伊红-苯胺黑染色：50uL精液与等体
3、积的染液混匀，等待30秒；采用拉薄技术制成涂片，空气中干燥，高倍镜观察，活精子头部成白色或淡粉红色，死精子头部呈红色或暗粉红色。正常参考值：（参考下限是58%）=70%（射精后1h）=4050%（射精后3h）=2030%（射精后6h）,精子活力：正常精子的活动力，精子向前运动的能力。计数200个精子的分级情况。WHO把精子的活动力分为4级。(5版分3级)d：不动 PR：前向运动c：非前向运动 NP：非前向运动b：慢速或呆滞的前向运动 IM：不活动a：快速向前运动,正常为：a级25%或a+b50%（5版）的参考值下限是前向运动精子（PR）：32%精子总活力（PR+NP）：40%临床意义：活力下降
4、、弱精子症：见于液化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子结构异常，内分泌功能异常，精索静脉曲张等。,精子细胞形态学检查,1、正常精子形态：正常在精液中占15%(5版)参考下限为：4%2、畸形精子：头部形状、大小异常；体部异常；尾部异常。临床意义：精子形态异常与生殖系统的感染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及遗传因素有关。,3、生精细胞、精原、初级精母、次级精母、精子细胞。正常时少量，当曲精管的生精能力受到损害时，精液中可出现较多的病理性幼稚细胞。4、其他成分红细胞（极少）：血精症、睾丸瘤、前列腺瘤白细胞（=1X106/mL）：生殖道炎症癌细胞：输精管恶性肿瘤,人精子形态模式图,头部：轮廓规则，顶体
5、清楚，顶体帽至少覆盖头部表面的1/3。中段：细长，不超过头宽1/3，轮廓直而规则。尾部：细长，弯曲不卷曲。,正常形态精子的概念,把“具备潜在受精能力精子”（亚群）的外观作为形态正常的标准。人为设定临界标准，规定“临界形态精子都是异常”。,操作前准备,一侧有磨砂载玻片盖玻片（24mmX50mm）10uL移液器及吸头纱布或纸巾记号笔巴氏染液或Diff染液,精液涂片的制备,每份新鲜的精液标本应制备两张或更多的涂片，以防染色发生问题或载玻片破碎。每次取样前要充分混匀精液。对于未稀释的精液，采用拉薄技术；对于已洗涤的精液，采用移液管法。涂片前准备：1.用纱布或纸巾擦干净载玻片的两面2.用记号笔在载玻片的
6、磨砂处标记上编号、日期。,涂片的方法,充分混匀待涂片精液标本，根据精子浓度，用移液器去510uL的精液滴在载玻片的一端，立即用第二张载玻片的非磨砂端以45角（角度越小，涂片越薄）沿第一张载玻片的表面移动并接触精液滴，然后沿载玻片的长轴缓慢拖回拉片（约一秒；速度越快，涂片越厚），制成一张涂片。,对于高粘稠或低密度或充满碎屑精液：稀释精浆或离心去精浆。方法：取0.20.5mL精液，加10mL生理盐水，800g离心10分钟，除去大部分上清液，轻轻拍打试管，使精子团重新混悬于剩余的上清液中。必要时可加生理盐水重复洗涤一次。洗涤后的精子浓度在20-50X106/ml为好。洗涤的目的是减少背景杂质，并减少
7、背景着色。,如图：取510uL悬浮液于清洁载玻片上，用滴管使精液在载玻片上展开。然后在400倍光镜下扫视一下确保精液涂片均匀，400倍下每个视野20-50个精子，并且没有精子成团或重叠。,注意：1.精液标本完全液化，充分混匀；2.快速取样，使精子没有时间从混悬液中沉降下来；3.重复取样前，再次混匀精液标本；4.精液滴在载玻片上，立即涂片，不要放置数秒后再涂片。,染色步骤,1.精子悬液涂片制备完成后，水平放置，空气中自然干燥；2.加A液覆盖组织片室温反应15秒，将玻片直立吸水纸上除去多余染液；3.加B液覆盖组织片室温反应10秒，将玻片直立吸水纸上除去多余染液；4.加C液覆盖组织片室温反应15秒，
8、将玻片直立吸水纸上除去多余染液；5.流水中浸洗1015次以除去多余染液；6.将玻片垂直竖立以去除水分，待完全干燥；7.油镜下观察精子形态。,结果观察,1.精子顶体区染淡紫色，顶体后区染深紫色，精子体尾区染成淡红色。2.世界卫生组织（WHO）精子缺陷类型分类如下：,1,正常精子形态,2,小头梨形头顶体区70%顶体后区空泡2过多残留胞浆中段粗、弯曲插入双尾弯曲,3,圆形头锥形头不定形头大头针状顶体区70%顶体区2中段粗不规则插入,4,扁平底不规则头顶体区40%中段粗不规则插入弯曲,5,顶体区70%顶体后区空泡中段弯曲粗、不规则插入尾环状卷曲、弯曲双尾,精子形态分析,6-1,6-2,7-1,7-2,8-1,8-2,9-1,9-2,10-1,10-2,11-1,11-2,12-1,12-2,谢 谢 大 家！,
