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1、高通量测序原理和应用,沈 峰,深圳华大基因研究院,Illumina/Solexa genome analyzer,可逆阻断技术,基于SBS的Solexa测序技术,合成第一个碱基,Cycle 1:按顺序加入反应试剂,清除未反应的碱基和试剂,激发碱基荧光并收集荧光信号 去除阻断基团和荧光基团,Cycle 2-n:重复前面的步骤,每一个基因簇就是信号收集照片上一个亮点,Base Calling,The identity of each base of a cluster is read off from sequential images,CS负责将待测样品“种植”于检测芯片(Flow Cell)中
2、并进行扩增。GA负责对芯片内的基因片段进行边合成边测序反应(SBS)，收集碱基信息。,Cluster Station Genome Analyzer,SOLEXA测序种类,Single-Read Sequencing 单向测序Paired-End Sequencing 双向测序Indexed Sequencing 混合样品测序,Single-Read Sequencing,Single-Read Sequencing(SR,单向测序)指只检测基因片段一端的序列信息。,接头,接头,互补接头,基因序列,Paired-End Sequencing,Paired-End Sequencing(PE,双
3、向测序)是指检测基因片段的两端序列信息。,PE module,SR与PE的Flow Cell接头对比,Single Read,Paired End,Indexed Sequencing是指将多种样品混合后进行测序的技术。这是为了充分利用solexa高通量的特点，有助于降低成本。,A B C D E,A:AdaptersB:Genomic DNAC:Index Seq PrimerD:IndexE:Adapters,Indexed Sequencing,Indexed Sequencing,应用,DNA 水平 全基因组测序（de novo和Resequencing）目标区域测序(外显子测序)表观
4、（bisulfite、MeDIP、ChIP-seq）,RNA 水平小RNA测序RNA-seq（DGE、转录本）,全基因组测序,全基因组测序在医口中的应用,单个临床细菌、真菌等微生物的基因组研究多个同属菌株的基因组比较及群体进化宏基因组疾病样本的重测序,目标区域测序,目标区域测序,目标区域测序,目标区域测序在医口中的应用,单基因病外显子测序复杂疾病外显子测序某种疾病已知的相关基因深度测序以挖掘突变位点等,表观-Bisulfite,表观-Bisulfite,表观-MeDIP,表观-MeDIP,表观-ChIP-seq,表观-ChIP-seq,表观在医口中的应用,组蛋白修饰及转录因子研究全基因上的DN
5、A甲基化图谱高CpG区域的甲基化图谱,Small RNA 测序,Day1,Day2,Day3,Day4,Small RNA 测序,Small RNA在医口中的应用,两种差异样本之间的Small RNA比较MicroRNA和基因表达差异综合生物标记,RNA-seq,基因表达差异（DGE）转录本,DGE,DGE,Fragment buffer,N6 primer,mRNADNA,RNase H,ds cDNA,Superscript III,DNA polymerase I,转录本,转录本,RNA-seq在医口中的应用,用于癌驱动基因的筛选用于融合基因的筛选用于可变剪接的筛选用于RNA水平的SNP分析,Hiseq 2000,Hiseq 2000,High-seq 2000,Some of our partners on cancer and complex disease studies,Welcome to BGI.,New campus in Shenzhen:,Beijing branch:,Hangzhou branch:,Shenzhen branch:,Thanks！,
