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1、消毒剂使用及效力验证,2007.4,2,能消除以细胞繁殖形态出现的微生 物污染的化学物质。,消毒剂的习惯定义：,3,消毒剂的分类定义（USP29）,抗菌剂（Antiseptic)化学杀菌剂(Chemical Disinfectant)清洁剂(Cleaning Agent)消毒剂(Disinfectant)卫生洗涤剂(Sanitizing Agent)杀孢子剂(Sporicidal Agent)灭菌剂(Sterilant Agent),4,5,消毒剂配制,按供应商的使用说明进行配制和储存纯化水、注射用水洁净室及相关受控环境使用，应进行除菌过滤。温度提高，杀菌效力增大。效力验证时，在常温下配制。,
2、6,影响消毒剂效力的因素：,pH温度，浓度材质和附着物质溶剂（水）接触时间微生物的类型和数量,7,消毒剂作用机理,钝化胞内酶活性，影响细胞的正常代谢酚类阻断物质运输通道季铵盐类（电荷），附着于细胞膜特定部分（电荷）破坏微生物细胞（膜）的结构和功能醛类、含氯、过氧化物,8,微生物对消毒剂的耐受性,形成生物膜粘性多糖物质消毒剂的相互作用中和反应固有耐受性和概率残存致死剂量,9,微生物抗力,由小到大排列一般为：细菌繁殖体真菌繁殖体真菌孢子病毒分枝杆菌细菌芽孢,10,消毒剂的选择,需控制的微生物的类型和数量市售消毒剂的抗菌谱消毒剂的品牌浓度、使用方法和接触时间待消毒物体的材质和对消毒剂的兼容性可能影响
3、杀菌效力的表面有机物数量反复使用，对设备表面的腐蚀程度对操作者的安全性和清洁剂/其它消毒剂的相容性交替使用方案和对产品的影响,11,消毒剂验证的目的：通过特定的微生物与某消毒剂在规定的使用浓度下，接触规定的时间后，对微生物进行培养、计数，考察消毒剂的消毒/杀菌效果。,12,消毒剂验证的内容：,使用中稀释检测（use-dilution tests)对不同浓度下，对消毒剂的效力进行筛选针对不同标准菌株和环境微生物，确认接触时间表面挑战试验（surface challenge tests)使用标准菌株和典型环境分离微生物选择合适的浓度和接触时间，进行试验获得挑战微生物数量下降的对数值对使用新消毒剂前
4、后环境微生物的检出频率和数量进行统计学评估（无菌生产区域、GMP要求）,13,消毒剂验证步骤：第一步：在实验室对代表细菌在规定的使用浓 度和规定的作用时间进行确认。第二步：应用不同材质的载体，进行模拟试验第三步：完成验证报告，形成SOP。,14,验证用菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿色假单胞菌、沙门氏菌、大肠埃希菌、枯草杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、环境分离菌。菌种选择的原则:代表性,普遍性,标准菌种。(环境中常见的污染菌)。菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。,验证菌种：,15,挑战微生物(USP 29),16,准备性试验（一）,选择适合的中和剂Letheen肉汤、D/E中和肉汤（酚类，季铵
5、盐类）、TAT肉汤基础吐温20卵磷脂胰蛋白胨,17,D/E中和肉汤（每升）,配方胰蛋白胨 5 g酵母膏 2.5 g葡萄糖 10 g硫乙醇酸钠 1 g硫代硫酸钠 6 g亚硫酸氢钠2.5 g吐温 80 5 g卵磷脂 7 g溴甲酚紫 0.02 g最终 pH 7.60.2 于 25,18,准备性试验（二）,中和剂毒性将10100 CFU的微生物加入到中和剂中薄膜过滤，冲洗，培养，计数与菌液对照组比较，回收率应70,19,准备性试验（三）,中和效力将消毒剂和中和剂混合（记录时间）加入10100 CFU微生物薄膜过滤，冲洗，培养，计数与菌液对照组比较，回收率应70,20,验证方法-薄膜过滤法,菌悬液和消毒
6、剂直接混合，在不同的时间间隔条件下过滤，培养后评价。,21,验证准备：,-测试菌液准备 增菌过夜，并调整至106108 CFU/ml-消毒剂稀释至规定浓度。分装10ml于若干无菌试管中；试管上标注消毒时间：如“1分钟组”，“5分钟组”，“10分钟组”或其他要求的时间段。-配制中和剂（分装100ml，300ml）,22,验证步骤（1）：,-接种 接种各验证菌种至盛有待验证消毒剂的试管（使接后浓度104 CFU/ml)，混合均匀，并立即开始计时。-中和、过滤将消毒剂倾入100ml中和剂中，混合，稀释（如需要），过滤，然后用100ml中和剂清洗滤膜，滤过3次。-阳性对照 用无菌水代替消毒剂，步骤同上
7、。,23,验证步骤（2）：,培养和计数 取下滤膜放入规定的培养基平板，在规定的温度、时间培养后，记数。和阳性对照相比，微生物数量下降应至少3个对数值（细菌芽孢至少2个对数值）。,24,验证步骤（3）：表面挑战试验,根据设施的实际情况，选择不同材质的载体。玻璃，不锈钢，塑料薄膜，乳胶，墙面涂料，地面材质接种，并确认实际数量接触杀菌、中和、过滤,25,正确使用消毒剂（1）,稀释消毒剂时应用纯化水、注射用水设备使用后作彻底清洁将环境常见菌列入验证范畴轮换使用不同的消毒剂，消毒剂间要用无菌水充分清洗,26,正确使用消毒剂（2）,使用消毒剂的人员要接受相关的培训严格遵守“人流”、“物流”的途径消毒的SOP：配制、使用、纠正、防护等供应商的审核和确认,27,消毒剂的文件,-标准操作规程 SOP-消毒剂配制记录-消毒剂使用记录-消毒剂标签 消毒剂文件，应该等同与原始记录。,28,800-820-0865,
