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1、男科实验室常用科研方法,陆金春南京军区南京总医院武警江苏总队南京医院,主要技术,免疫分析技术 荧光、酶、放射、发光、Western印迹、免疫组化等PCR技术芯片技术 基因芯片、蛋白质芯片核酸分子杂交技术电泳技术基因差异显示技术基因重组及蛋白质表达技术流式细胞术、电镜及质谱技术等,免疫分析技术基本原理,利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质的球蛋白。,免疫测定技术分类,均相法（Homogeneous）,免疫凝集法：自然凝集：血型测定 肥达氏反应等 敏化凝集：血球凝集法 凝胶（微粒）比浊法等
2、免疫扩散法：单扩、双扩等免疫电泳法,非均相法（Heterogeneous）,放射免疫法（RIA）、免疫放射法（IRMA）等荧光免疫法（FIA）酶联免疫法（EIA，ELISA）化学发光法（LIA）免疫印迹（Western-blot免疫组织化学技术金标法组合技术：酶联荧光法（FEIA）、酶联化学发光法（ELIA）、时间分辨荧光法（DELFIA）、电化学发光法（ECLIA）等,双抗体夹心法（三明治法）原理,包被抗体,竞争法的原理,间接法原理,俘获法原理,双抗原夹心法原理,间接包被夹心法原理,几种标记/检测技术灵敏度的比较,发光检测技术的灵敏度及线性范围都已经接近了免疫反应的极限片面宣扬检测技术灵敏度
3、和线性范围的强弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的免疫学检测的瓶颈在于抗体亲合力和干扰免疫反应的因素，而不是检测技术筛选抗体、屏蔽干扰，生产工艺、管理水平和技术服务是试剂生产的关键,几种标记/检测技术线性范围的比较,几种标记/检测试剂的有效期比较,免疫分析的干扰因素,Western blotting的概念,Western印迹、蛋白质印迹或免疫印迹法，这是一种用抗原抗体的特异性结合来检测固定在固相载体上蛋白质的免疫化学技术,基本步骤,将SDS-PAGE电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素/PVDF膜上，然后与特异性的一抗进行反应；洗涤去除没有结合的特异性抗体后，加入二抗（标记有酶、同位素或荧光）；反应一
4、段时间后再次洗涤去除非特异性结合的标记抗体，加入适合标记物的检测试剂进行显色或发光等，观察有无特异性蛋白条带的出现，也可通过条带的密度大小来进行特异性蛋白的半定量。,1 固体相上的蛋白质2 针对蛋白质的特异性抗体（一抗）3 带上HRP针对一抗的抗体（二抗）4 加入底物，在酶的作用下，分解产生 有色物质,蛋白转膜系统,转膜系统示意图,结果显示,免疫组织化学(Immunohistochemistry),利用特异性抗体对组织中某种特异成份(抗原)进行抗原-抗体反应,达到检测组织细胞内是否有此特异性物质。其本质就是用标记的抗体追踪抗原(以确定组织细胞内的某种化学物质)。,应用与结果判定,用已知抗体探测
5、未知抗原：受体、酶、递 质、肽类、细胞骨架蛋白等用已知抗原探测未知抗体结果判定:有阳性产物，说明细胞内有此物质，但是否由此细胞产生不能完全肯定定量:阳性细胞数、灰度值或光密度值,免疫组化操作步骤,1.组织标本制备：固定、包埋、切片2.封闭：异种蛋白质间会有非特异性结合，常用正常羊血清（NGS）或牛血清白蛋白（BSA）封闭3.与一抗孵育：最佳浓度需摸索，为提高抗体向组织内穿透，可在抗体稀释液中加入0.1%0.3%TritonX-100。需长时间孵育时应加入0.01%0.3%NaN3防腐 产生一抗的动物一定要知道，以便选择二抗,4.洗涤：去掉非特异性结合5.与二抗孵育：浓度1:100200，二抗必
6、须针对一抗动物种属，二抗上结合的物质不同，显色用不同方法：ABC、PAP、荧光显色、IGSS（免疫金银染色法）。ABC、PAP经典、产物稳定；荧光法不需三抗，不需脱水透明，但荧光易淬灭；IGSS非常敏感，不用DAB做反应，但背景难以控制,6.与底物（DAB）反应：DAB能致癌，在强光下可氧化（应尽量避光），68 min出现阳性产物，镜下控制反应7.对照：阴性对照：NGS 或缓冲液代替一抗；去二抗；吸附实验：将一抗与过量的抗原一起孵育一 段时间后，以此混合液再作免疫组化染色 阳性对照：已知含有待检物的某种组织,PBS洗片 0.5%3%H2O2 15min(灭活内源性过氧化物酶)PBS洗片 510
7、%NGS(或510%BSA)+0.2%TritonX-100 孵育12h(封闭)一抗4过夜 PBS洗片5min 3次 二抗24h室温 PBS洗片5min 3次 ABC 12h（可无）PBS洗片10min 3次 DAB显色,聚合酶链式反应（PCR）技术,Polymerase Chain Reaction的简称，是一种体外扩增特异DNA片段的技术。利用PCR技术可在短时间内获得数百万个特异的DNA序列的拷贝。PCR技术在分子克隆、遗传病的基因诊断等方面得到广泛的应用。PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板
8、DNA结合的特异性。,PCR：变性退火延伸,反应分为三步：1.变性：在高温条件下，DNA双链解离形成单链DNA 2.退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链；3.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应。以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达到1067个拷贝。,基本材料,仪器 1.PCR仪 2.台式离心机 3.微量取液器模板DNA 组织、细胞提取RNA经逆转录;组织、细胞DNA试剂 RNA/DNA提取试剂盒 逆转录（RT）试剂
9、盒 PCR试剂盒,获得基因的方法,1.化学合成方法 主要用于较小基因的合成，或需改变密码子的基因2.半化学合成法 mRNA cDNA 加人工接头或合成一段DNA 与载体相连3.筛选法 用于各种方法从基因组文库或cDNA文库中选择目的基因,操作步骤,1.在0.2ml Eppendorf管内配制50l反应体系 ddH2O：33.5 ul 10 x PCR buffer：5 ul dNTPs（2.5mM）：4 ul 引物1(2uM)：1 ul 引物2(2uM)：1 ul MgCl2 3 ul Taq 酶：0.5 ul 模板：2 ul,2.按下述循环程序进行扩增 94 5分钟，1个循环；94 30秒，
10、55 30秒，72 30秒，3040个循环；72 延伸 710 分钟。4保温。,3.电泳检测 扩增结束后取5l扩增产物，加入含EB的加样缓冲液，利用琼脂糖电泳检测DNA扩增情况,必要时切胶用于回收,原位杂交(In Situ Hybridization),原位核酸分子杂交技术（In situ nucleic acid molecular hybridization)简称原位杂交技术。是用标记的NDA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内待定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA-DNA杂交，DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交。,基本原理,碱基互补配对原则待测mRNA
11、探针(probe):-AGTCTAGT-+-UCAGAUCA-digoxin 一定温度、时间与条件-AGTCTAGT-UCAGAUCA-digoxin+digoxin抗体-碱性磷酸酶-AGTCTAGT-UCAGAUCA-digoxin-digoxin抗体-碱性磷酸酶+NBT 显色,探针的类型,cDNA probe：杂交反应有较高的专一性。因其为双链结构，需加热变性解链。解链后只有半数DNA链与特定的mRNA杂交，另一半DNA链则与mRNA竞争，并导致DNA链的自我“退火”（即重新形成双链）。mRNA probe（互补的RNA）：为单链结构，杂交反应专一性高，杂交链稳定，制备复杂。Oligonu
12、cleotide probe：由DNA合成仪合成，制备简单，由于链不长，又是单链，较易穿过组织，操作方便，但杂交链因其链短而不够稳定。,原位杂交操作,1.组织样本的制备：A.组织取材：尽可能新鲜，由于组织RNA降解较快，新鲜组织和培养细胞最好在30min内固定。取材时应戴手套，防止外源性RNA污染 B.固定：4%多聚甲醛，灌注固定时固定剂的用量一般为动物体重的2倍；浸泡固定时，组织与固定剂的体积比不低于1:10 C.切片：冰冻切片或石蜡切片,2.预处理目的增强组织的通透性和探针的穿透性方法：A.稀酸和酸酐(0.2M HCl,0.25%乙酸酐)处理：防止探针与组织中碱性蛋白之间的静电结合 B.去
13、污剂(0.010.3%TritonX-100)处理：增强组织的通透性，利于探针进入组织细胞 C.蛋白酶(proteinase K)处理：消化包围靶核酸的蛋白质，使经固定后被遮蔽的靶核酸暴露，以增加探针对靶核酸的可及性。,3.预杂交杂交前用不含探针的杂交缓冲液在杂交温度下孵育一定时间，以阻断标本中可能与探针产生非特异性结合的位点，达到降低背景的目的为防止外源性RNA酶污染，杂交前处理过程中都需要戴消毒手套，实验所用玻璃器皿及镊子都应于实验前一天置高温（180）烘烤，杂交前及杂交时所用的溶液均需经高温消毒处理。,4.杂交cDNA探针变性解链：95100，510min，探针变性后要马上进行杂交反应。
14、杂交液：除含一定量的标记探针外，还含有较高浓度的盐类（高度Na+可使杂交率增加，减低探针与标本之间的静电结合）；甲酰胺（可使杂交温度降低）；硫酸葡聚糖（能与水结合，减少杂交液的有效容积，提高探针有效浓度）；BSA、载体DNA与RNA（变性鲱鱼精DNA、酵母转运RNA）（阻断探针与组织结构成分之间的非特异性结合，减低背景）。,杂交温度：当杂交液含50%甲酰胺，盐浓度为0.75 mol/L左右时,cDNA探针杂交温度约为42,mRNA探针为5055,寡核苷酸探针约为37杂交时间:一般为1620h,杂交反应时间不要超过24h,反应时间过长,形成的杂交体会自动解链,杂交信号反而减弱,对照阳性对照 1、
15、已知阳性组织对照 2、Northern或Southern印迹反应 3、免疫组织化学阴性对照 1、已知阴性组织 2、正义RNA(Sense RNA)探针 3、省去探针 4、杂交前用RNA酶或DNA酶处理标本 5、检测系统的阴性对照,生物芯片技术,利用特异性的分子间相互作用，将待检测样本标记后与生物芯片反应，得到信号值。信号值代表了结合在探针上的待测样本中的特定大分子的信息。,基因芯片,基因芯片技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效、快速的核酸序列分析手段。它将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样本进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。在一块1cm2大小的基因芯片上，根据
16、需要可固定数以千计甚至万计的基因，以此形成一个密集的基因方阵，实现对千万个基因的同步检测。,主要类型,按制备方式分：原位合成芯片：采用显微光蚀刻等技术在特定部位原位合成寡核苷酸而制备的芯片。探针较短DNA微集阵列：将预先制备的DNA片段以显微打印的方式有序地固化于支持物表面而制成的芯片。探针的来源较灵活,基因芯片技术主要步骤,芯片制备样本制备杂交反应信号检测结果分析,蛋白质芯片,采用原位合成、机械点样或共价结合的方法将多肽、蛋白、酶、抗原、抗体固定于硅片、玻璃片、塑料片、凝胶、尼龙膜等固相介质上形成的生物分子点阵,蛋白质芯片检测流程,生物芯片的应用,健康检查 基因多态性分析 序列测定 微生物菌
17、种鉴定，致病机理及抗药性分析 发现新的疾病标志物作为临床诊断的指标 筛选药物靶，发现新药物，研究药理学,健康检查,SNPs检测芯片,生物芯片的优点,高通量大规模高度平行性快速高效高灵敏度高度自动化,存在的问题,生物芯片的重复利用生物芯片的多重用途统一的行业标准定量分析降低检测生物芯片的仪器的价格,电泳的概念和分类,电泳：带电粒子在电场中向带有异相电荷的电极移动的现象电泳使用不同的支持介质，早期有滤纸、玻璃珠、淀粉粒、纤维素粉、海砂、海绵、聚氯乙烯树脂；以后有淀粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（PAGE）和琼脂糖凝胶。,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)：以聚丙烯酰胺凝胶为支持物
18、的电泳。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N,N,N,N-四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(AP)或核黄素(vitB2)的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。,SDS-PAGE的原理,PAGE电泳主要取决于三个因素：蛋白大小、形状和电荷SDS是一种阴离子去垢剂，SO32-带负电荷。蛋白质在SDS溶液中与SDS分子结合时，可形成SDS-蛋白质复合物。这种复合物由于结合大量带负电荷的SDS，好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖了，从而起到消除各蛋白质分子之间自身的电荷差异的作用。SDS能断裂分子内和分子间氢键
19、，破坏蛋白质的二级和三级结构，能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，使蛋白复合物分解成多个亚基。SDS-PAGE电泳时，蛋白质分子的迁移速度主要取决于蛋白质（亚基）分子大小,凝胶浓度的选择与蛋白质相对分子质量有关,SDS-PAGE电泳分类,连续系统：电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应分离 不连续系统：由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度以及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳,不连续系统的特点,不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶
20、，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样本浓缩的主要因素,垂直电泳系统,SDS-PAGE电泳操作步骤,1 SDS-PAGE凝胶的制作（1）将玻璃板用蒸馏水洗净晾干,准备2个干净的小烧杯（2）把玻璃板在灌胶支架上固定好，放好密封条和隔离板,固定玻璃板时，两边用力一定要均匀，防止夹坏玻璃板（3）配制分离胶与浓缩胶（4）先注入分离胶，再注入浓缩胶，插上梳子，防止气泡,聚丙
21、烯酰胺具有神经毒性，操作时要戴手套,2 样本的制备：样本和蛋白标准分别与5倍上样缓冲液按5:1的比例混匀，并在100沸水浴中煮5 min，取出待用3 上样：拔出梳子后，在内槽中加入缓冲液，用微量注射器或加样枪加样,4 电泳：接通电源，100V恒压电泳，至溴酚蓝距凝胶边缘约0.51cm时，停止电泳5 剥离与染色：电泳结束后，撬开玻璃板，剥胶时要小心,保持分离胶完好无损,将分离胶做好标记后放在大培养皿内，加入考马斯亮蓝染色液染色，染色后的凝胶用脱色液脱色至蛋白质区带清晰6 图像扫描分析或用于蛋白质印迹操作,等电点聚焦电泳,电泳系统中加进两性电解质载体，当通已直流电时，两性电解质载体即形成一个由阳极
22、到阴极连续增高的pH梯度。蛋白质进入时，不同的蛋白质移动到与其等电点相当的pH位置上，从而使不同等电点的蛋白质得以分离。优点：分辨率高，区带清晰、窄，加样部位自由，重现性好，可测定蛋白质或多肽的等电点。缺点：需无盐溶液，不适用于在等电点不溶解或发生变性的蛋白质。,mRNA差异显示技术（DD）,由Liang于1992年创立，是分离差异表达基因强有力的工具。其依赖于RT-PCR技术和DNA电泳技术。原理,5,MNAAAAAAAAAAAA(A)n 3,Poly(A)RNA,5 T12MN 3锚定引物,逆转录,5,MNAAAAAAAAAAAA(A)n 3,3,M N TTTTTTTTTTTT 5,变性
23、,5,MNAAAAAAAAAAAA(A)n 3,3,M N TTTTTTTTTTTT 5,退火,5 T12MN 3锚定引物寡核苷酸随机引物,3,M N TTTTTTTTTTTT 5,延长,dNTP、Taq聚合酶,3,M N TTTTTTTTTTTT 5,5,MNAAAAAAAAAAA 3,变性、退火、延伸,电泳,显示,T12MN(M为A、G、C，N为A、T、G、C),启动cDNA第一链合成,不同长度的PCR产物,回收差异条带，再扩增，克隆测序，同源比对,随机结合到cDNA链上,DD的优点,灵敏度高，仅需0.2g的总RNA可以同时比较多个样本间基因表达的差异 可以同时检测到“上调”及“下调”的基
24、因 时间短，实验过程中可步步验证比较 可进行多基因家族的表达分析,DD的缺点,假阳性高 样品mRNA可能有部分降解 有少量的DNA污染 单条带可能由一种以上cDNA 片段所构成 有些特异cDNA片段太短,在Northern杂交时检测不到杂交信号 PCR扩增了一些稀有mRNA片段,在杂交时显示不出差异表达的信号 绝大多数差异条带仅含有3-UTR 500bp以内的一短片段的信息，这些区域的序列结构相对保守，得不到特异的基因 对低丰度mRNA检出率低,DD技术的改进,引物设计反应条件的优化显示方法假阳性鉴定,引物设计,Mol等将12种锚定引物变为4种，并发现G的扩增效果最好王夏等在T12MN之前加上
25、了一段T7启动子序列，提高了PCR反应的严谨性Liang发现910个mer长度的随机引物比较适宜Liang还发现，当长度为13bp，在5端增加Hind酶切位点，能更有效的扩增，并能提高特异性,反应条件优化,RNA模板量在23g时，能扩增出较多的条带不同条件下dNTP浓度不是固定不变的 1.52.0mmol/L的Mg2+浓度效果较好4042的退火温度通常能得到较好的扩增效果，周宁新等在PCR的头两个循环，用低严谨的退火温度36，在随后的循环中退火温度提高到45，获得了很清晰的电泳图谱,显示方法,最初DDRT-PCR通过放射性同位素在变性胶上进行放射自显影成像Sanguinetti介绍了一个快速银
26、染方法，只需15分钟，而且容易克隆回收 Rompf等通过琼脂糖凝胶电泳分辨差异cDNA片段余桂华等建立了荧光mRNA差异显示方法，最大限度地降低了假阳性,假阳性的鉴定,Northern blot仍是鉴定差异的一个主要手段；分析较多条带，反向Northern blot是较为切合实际的选择Heinz通过SSCP（单链构象多态性）分析排除了非差异表达的cDNA污染Callard把纯化后的PCR 产物分成两部分:一部分用于克隆，另一部分用作探针杂交以筛选克隆Sompayra设计了向5步移的方法,蛋白表达体系,1.原核体系2.真核体系,原核表达系统,大肠杆菌(Escherichia coli)遗传背景清
27、楚，基因工程操作方便，商品化表达载体种类齐全，表达效率高；基本不分泌，易形成包含体(无正确折叠的立体结构)，无加糖等修饰枯草杆菌(Bacillus subtilis)分泌蛋白质能力强，一般有天然立体结构；无加糖修饰功能，培养液中蛋白酶活性高，重组蛋白易受蛋白酶的水解；质粒不稳定，尚无商品化的表达载体其他：乳酸菌(Lactic acid bacteria)、沙门氏菌(Salmonella typhimurium)等,真核表达系统,酵母细胞可生产分泌型蛋白；有天然立体结构，有加糖修饰功能；可进行染色体整合型基因表达糖链与哺乳动物加工的不一致，培养上清多糖浓度高商品化表达体系：毕氏酵母；酿酒酵母;裂
28、殖酵母等昆虫细胞可以病毒感染的型式在成虫中生产，也可在体外培养细胞中生产蛋白适合分泌型和膜蛋白的表达，有加糖修饰糖链有所区别，表达量有限作为药物宿主细胞未被FDA认可CHO细胞可进行分泌表达，有天然立体结构，加糖方式与人体蛋白质完全一致表达量不够高，培养成本较高,体系选择,研究基因功能:大肠杆菌,裂殖酵母,昆虫细胞,CHO细胞多肽药物生产:大肠杆菌,毕氏酵母,CHO细胞,乳腺组织疫苗:大肠杆菌,酵母,沿用细胞培养产物进行灭毒单抗生产:杂交瘤细胞工业酶生产:各种微生物,原核表达系统外源基因在大肠杆菌中表达,常用表达载体 pJLA50X系列;pcDNAII;etc单纯表达 pET系列(T7 pro
29、moter,Novagen公司)pQE系列(T5 promoter,Qiagen公司)pMAL系列(周质表达,BioLabs公司)pGEX系列(GST融合表达,Pharmacia公司)pBAD系列(Arabinose诱导型)pTYB系列(CBD融合,可以自我切割,BioLabs),操作流程,真核表达系统外源基因在毕赤酵母中的表达,在科研和临床中需要大量的蛋白质，不可能由人体组织或体外细胞培养而大规模的获得，人们利用一些低等生物的特点，来生成和获得这些人属蛋白质。酵母菌是单细胞真核生物，具有生长快、易于遗传操作、能对外源蛋白进行翻译后加工和修饰、不产生有毒产物等特点，被认为是表达外源蛋白的合适宿
30、主。几种工业酵母尤其是巴氏毕赤酵母(pichia pastoris,Pp)，因具有旺盛的生长力以及一些独特的性质，已发展成为较成熟的蛋白表达系统。毕赤酵母以甲醇为营养来源。由毕赤酵母表达应用于临床的蛋白目前有胰岛素、HBsAg、TNF、EGF、人血清白蛋白，以及多种抗体等。,常用载体的基本结构,5AOX1启动子片段含有AOX1启动子，在甲醇的诱导下可启动外源蛋白的表达-因子信号肽序列为约89个氨基酸的信号肽序列，能使外源蛋白分泌到发酵上清中，更利于外源蛋白的纯化多克隆位点含多个酶切位点，为外源基因的插入提供位点TT序列提供有效的转录终止和polyA修饰信号HIS4为营养缺陷型筛选标志3AOX1
31、 基因片段能够与基因组AOX1基因属同源重组抗Amp 基因和pBR322能使空载体和构建的表达载体在E.coli中筛选和复制,基本步骤,构建表达载体转化至酵母菌中筛选阳性转化单克隆筛选高表达单克隆,流式细胞术,流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）：利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。流式细胞仪（Flow Cytometer)：集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。,FACSCalibur,特点：光路调节系统固定自
32、动化程度高操作简便使用寿命长主要用于细胞分析,检测范围,细胞大小细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量,应 用,临床：淋巴细胞亚群测定（AIDS诊断、治疗和疗效评价）、白血病和淋巴瘤免疫分型、HLA-B27分析、人类同种异体器官移植中应用、血小板分析、细胞因子测定等科学研究：淋巴细胞功能、树突状细胞（DC）研究、造血干细胞研究、细胞周期分析、细胞凋亡分析、凋亡相关蛋白分析、细胞功能研究、多药耐药基因研究（MDR）、肿瘤相关基因表达研究、RNA测定、DNA测定、癌基因和抑癌基因表达产物测定、血管内皮细胞研究等,数据显示类型,FSC（小角散射光)它反映细胞的相对大小和截面积的大小SSC(90度角散射光)代表细胞的颗粒度和精细结构的变化,数据显示类型,X轴：代表荧光信号或散射光信号的强度，用“通道数”表示，可以与光强度之间呈线性关系或对数关系Y轴：代表该通道内所出现具有相同光信号特征性细胞的频率,谢谢,
