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1、实验一 显微镜的基本知识及使用方法,一、目的要求,学习显微镜的原理、使用方法和保养。利用显微镜观察微生物标本学习显微数码系统的使用方法。学习生物绘图。,二、实验程序,了解显微镜的构造、原理,利用显微镜观察微生物标本,了解显微数码系统的使用方法,生物绘图与拍照,三、实验材料,微生物染色装片标本。显微镜、计算机、香柏油、二甲苯或乙醇乙醚混合液、擦镜纸等。,四、实验步骤,（一）了解显微镜的构造、原理链接实验录相,1、光学部分：接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。它使检视物放大，造成物象。2、机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它
2、起着支持、调节、固定等作用。,显微镜的构造,图1-2 光学显微镜的成像原理,工作原理,1、放大倍数=接物镜放大倍数接目镜放大倍数 2、显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：D=/2n sin(/2)式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。：可见光的波长（平均0.55m)n:物镜和被检标本间介质的折射率。：镜口角（即入射角）。3、数值孔径 N.A=n.sin（/2）,干燥系物镜 以空气为介质，如常用的40以下的物镜，数值孔径均小于1。油浸系物镜 常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为90100，数值孔值大于1。根据物镜放大率的高低，可分为：低倍物
3、镜 指16，NA值为0.040.15；中倍物镜 指625，NA值为0.15 0.40；高倍物镜 指2563，NA值为0.350.95；油浸物镜 指90100，NA值为1.251.40。,油镜使用的原理,增加照明亮度：油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。提高分辨率：香柏油（n=1.515）为介质时，其折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，从而增加数值孔径达到提高分
4、辨率的目的。,（二）了解显微数码系统的使用方法,链接演示显微数码系统软件的使用方法演示拍照的方法,图片保存要求建文件夹：D:环境0511班200522200*图片：格式：JPG 文件名：环境200522200*大肠杆菌（10100）,（三）利用显微镜观察微生物标本,1、观察前的准备2、低倍镜观察3、高倍镜观察4、油镜观察5、镜检完毕后的处理,1、观察前的准备,（1）将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为34cm。检查零件是否齐全，镜头是否清洁。（2）调节光亮度（3）调节目镜及数值孔径大小 链接实验录相,2、低倍镜观察,将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处
5、在物镜正下方。转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。链接实验录相,3、高倍镜观察,在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在正常情况下，高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其上的盖玻片。若使用不同型号的物镜，在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节旋钮，使载物台下降，直至物像出现，再用细调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观察。链接实
6、验录相,（1）升高镜筒，将油镜转至工作位置。在玻片标本区域滴加香柏油。（2）从侧面注视，用粗调节器慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。（3）将光线调亮，目镜观察，用细调节器校正焦距，直至物像看清为止。仔细观察并绘图。链接实验录相,4、油镜观察,5、镜检完毕后的处理,（1）观察完毕，下降载物台，取下载玻片。（2）将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚酒精混合液）擦掉残留的香柏油，最后再用干净的擦镜纸擦干残留的二甲苯（注意向一个方向擦拭）。（3）将各部分还原。转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字
7、形位置，再将镜筒下降至最低，同时降下聚光器。用柔软纱布清洁载物台等机械部分，最后套上镜罩，置阴凉干燥处存放。链接实验录相,6、结果报告,拍照与提交图片 提交在高倍镜和油镜下观察到的微生物（*菌）形态图片，注明总放大倍数。生物绘图,五、注意事项,1、不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。2、镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。3、观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4、观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。5、拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。6、显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。,六、思考题,1、使用油镜时，为什么必须用镜头油？2、使用油镜应特别注意哪些问题？,实验结束后请确保油镜头擦拭干净！请值日同学留下,
