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1、实验七 小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,杭州师范大学 刘姬艳,一、实验目的,通过小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初 步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体 的方法2.熟悉染色体的形态、种类及小白鼠等动 物染色体的数目及特点,二、实验原理,骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。,首先,为了获
2、得较多的中期分裂相骨髓细胞,必须给动物注射一定剂量的秋水仙素。秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后,处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成,中期染色体不能正常趋向两极,因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。其次,为了能够清楚的观察染色体的形态，取出的骨髓细胞要经过低渗(KCl溶液)处理使细胞膨胀、染色体适当的分散。固定(甲醇:冰醋酸)使染色体保持完好的形态。染色(Giemsa液)使染色体易分辨、观察。,二、实验原理(continued),1.材料：小白鼠2.试剂：0.01秋水仙素,0.4%氯化钾(KCl),固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giem
3、sa染液,0.01M磷酸缓冲液(pH 6.8)，2%柠檬酸钠。3.器材：离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊 子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻 片和盖玻片、染色缸、玻片盒,三、实验用品,四、实验步骤,四、实验步骤(continued),在显微镜下观察Giemsa染色之后的染色体片(染色体呈紫红色)，找出分散适度的中期染色体图象,观察小白鼠的染色体形态，统计其染色体数目。制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质已被去掉，镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细胞膜包裹，染色体之间无重叠，易分辨，臂的长度适中。但最重要的是分裂相要多。,五、实验结果,几种动物染色体形态特征,六、注意事项,低渗与离心等步骤的操作要轻。,观察细胞的标准为：,七、实验报告与思考题,实验报告1.记录所观察小白鼠骨髓细胞染色体的数目和形态。2.绘制一个你所观察到的小白鼠骨髓细胞染色体分裂相图。思考题1.简述小白鼠骨髓细胞染色体的制备过程。2.制片过程中为什么要进行低渗处理？3.在取骨髓前为什么要给动物注射秋水仙素?,
