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1、实验技术六放线菌的培养与形态观察,一、实验目的,1.学习并掌握用玻璃纸培养放线菌的方法；,2.观察放线菌的培养特征；,3.初步了解放线菌的个体形态特征。,二、基本原理,玻璃纸具有半透膜性，其透光性与载玻片基本相同。将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养使放线菌生长在玻璃纸上。观察时，将长菌的玻璃纸剪取小片，贴放在载玻片上，直接镜检。这种方法可观察到放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态。,三、实验器材,1.菌种：405（球孢链霉菌）和 4029（紫色链霉菌）；,2.培养基：高氏号培养基；,3.其他器材：无菌平皿、无菌玻璃纸、无菌盖玻片、无菌玻璃涂棒、1m
2、L无菌吸管、盛有9mL无菌水试管若干支、无菌镊子、酒精灯、接种环、剪刀、载玻片、显微镜等。,四、实验步骤,1.玻璃纸灭菌,将玻璃纸和滤纸剪成与培养皿大小相同的圆形纸片，用水浸泡后把湿滤纸和玻璃纸交互重叠地放在培养皿中，使滤纸和玻璃纸隔开，然后进行湿热灭菌，备用。,2.制备琼脂玻璃纸平板培养物,（1）将高氏一号琼脂培养基熔化后倒平板，待凝固后，无菌操作用镊子将玻璃纸覆盖在琼脂平板上，展平。（2）稀释菌液：将放线菌斜面菌种制成10-3的孢子悬液。（3）接种：用1mL无菌吸管取0.2mL孢子悬液滴加在玻璃纸平板上，然后用无菌涂棒涂抹均匀。也可用接种环挑取菌种斜面菌苔在玻璃纸上划线。（4）培养：将平板倒置于28-30下培养5-7天。,在洁净载玻片上加一杯水，用剪刀剪取小片玻璃纸，菌面朝上平贴在玻片的水滴上（勿产生气泡），先用低倍镜观察，再用高倍镜找到适宜部位，用油镜仔细观察。要区别基内菌丝、气生菌丝、孢子丝及孢子的形态、粗细和颜色的差异。,3.自然生长状态的观察,注意：1.接种时注意玻璃纸与培养基间不宜有气泡，以免影响其表面放线菌的生长；2.操作过程，勿碰动玻璃纸菌面上的培养物。,五、思考题,1.为什么在培养基上放了玻璃纸后放线菌仍能生长？,2.玻璃纸法可否用于其他微生物？为什么？,
