实验粗蛋白质的测定.ppt

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1、实验五:粗蛋白含量的测定(微量凯氏定氮法),1实验原理 样品与浓硫酸、催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出,而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏,使氨蒸出,用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。,消化:NH2(CH2)2COOH+3H2SO42CO2+3SO2+4H2O+NH3 2NH3+H2SO4(NH4)2SO4蒸馏:(NH4)2SO4+2NaOH2H2O+Na2SO4+2NH3吸收:NH3+4H3BO3 NH4HB4O7+5H2O滴定:NH4HB4O7+HCl+5H2O NH4Cl+4H3BO3,

2、2.实验材料、仪器与试剂材料:豆奶粉仪器:消化炉,100mL容量瓶,微量凯氏定氮蒸馏器,125mL三角瓶,酸性滴定管,移液管。试剂:浓硫酸,硫酸铜,硫酸钾,40%氢氧化钠,2%硼酸溶液,0.1mol/L盐酸溶液,溴甲酚绿甲基红混合指示剂。,3.实验步骤(1)消化:准确称取豆奶粉样品0.5g左右,置于消化管中,加入6g硫酸钾、0.2g硫酸铜,再加20mL浓硫酸摇匀,待剧烈反应结束后,在消化炉上消化,待溶液澄清透明后再消化30min,然后将消化液无损地转移到100mL容量瓶中,定容。,样品0.5g0.2g硫酸铜6g硫酸钾20mL浓硫酸,摇匀,小火炭化至泡沫完全停止,大火加热保持液体微沸,消化液蓝绿色并澄清透明,继续消化0.5h,冷却后定容至100mL,(2)蒸馏、吸收与滴定:装好微量定氮装置,准确移取消化稀释液5mL于反应管内,经漏斗再加入10mL40%氢氧化钠溶液,用少量蒸馏水洗漏斗数次,夹好漏斗夹,进行水蒸汽蒸馏。冷凝管下端预先插入盛有10mL 2%硼酸吸收液的液面下。蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为绿色开始计时,继续蒸馏5min后,将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏。然后用0.01mol/L盐酸滴定吸收液。,微量凯氏定氮蒸馏装置(凯氏),半微量凯氏定氮蒸馏装置(马氏),4.结果计算,

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