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1、混合斑检验 Examination of mixed stain 概念 类型 鉴定,混合斑的概念,两种或两种以上的血液、体液、分泌液相互混合形成的斑痕统称为混合斑。,混合斑类型 血液与血液混合斑 两个或两个人以上的血液混合斑 血液与体液混合斑 血液与唾液 血液与精液 血液与阴道分泌液 血液与汗液 体液与体液混合斑 精液与阴道分泌液,混合斑的鉴定,确定混合斑（确定各组分的特异性成分）血痕 红细胞（Hb）白细胞 唾液 唾液淀粉酶 精液 精子 P30 阴道分泌液 VP混合斑的个人识别,精液与阴道分泌液混合斑的检验,Examination ofSemen and Vaginal fluid mixed
2、 stain,通常所说的混合斑主要是指精液与阴道分泌液混合斑,一、混合斑的确定,一）精斑的确定 二）阴道分泌液的确定 1、阴道上皮细胞的检查 2、阴道肽酶测定（Vaginal pepetidase VP）电泳分离 检出率 0.64 检出时限 7 个月,二、混合斑的血型测定一）对比推断法（测定混合血型）二）测定精子和阴道上皮细胞的血型三）分离并测定混合斑中的ABH物质 四）测定精子特有的血型五）精斑的DNA分析,一）对比推断法,1、混合斑中精液ABO血型判定 混合斑血型 受害人血型 推测精液的血型 se se se Ose se Ose Ose Ose，se Ase se Ase Ose Ase
3、 Ase Ase，Ose，se,混合斑血型 受害人血型 推测精液的血型 Bse se Bse Ose Bse Bse Bse，Ose，se ABSe se ABSe Ose ABSe Ase ABSe，Bse Bse ABSe，Ase ABSe ABSe，Ase，Bse，Ose，se,2、其他血型,Gc Gm KmPGM1 GLOI Fu,二）测定精子和阴道上皮细胞的血型,混合凝集实验原理方法,混合凝集实验结果（示意图）,A红细胞,B红细胞,三）分离并测定混合斑中的ABH物质,中和实验电泳分离a2SGP的ABH测定,1、中和实验原理方法,2、电泳分离混合斑中的ABH物质 PAGE梯度电泳 原理
4、 方法,浓缩胶ABH分离胶,3、醋酸纤维膜包被a2SGP血清技术,检材浸液,56C,解离实验ELISA,醋酸纤维膜,抗a2SGP,棉纤维,测定ABH血型,3小时，洗,56 C,解离实验ELISA,吸附,3、醋酸纤维膜包被a2SGP血清技术,1小时,洗3次,10分钟,干燥固定,浸泡,测定ABH血型,SPP的ABH测定,a2SGP、SPP存在于精浆中不受阴道分泌液中ABH物质的干扰,四）测定精斑特有的血型,1、DIA32、yGGT3、ORM1,精斑DIA3电泳分型,1-1 2-1 2-2,精斑GGT电泳分型,1-1 2-1 2-1,精斑ORM1等电聚焦分型 1-1 2-1 2-2,五）精斑的DNA
5、分析,混合斑（精子、阴道上皮细胞）,SDS、蛋白酶K,DNA（阴道上皮细胞）,完整精子,二次消化,DNA（精子）,SDS、蛋白酶K,DDT,五）精斑的DNA分析,混合斑（精子、阴道上皮细胞）,SDS、蛋白酶K,DNA（阴道上皮细胞）,完整精子,二次消化,DNA（精子）,SDS、蛋白酶K,DDT,混合斑各血型测定方法价值一）对比推断法（测定混合血型）首选方法 简单易行 价值有限 二）测定精子和阴道上皮细胞的血型 方法简单可靠 灵敏度高 适于较新鲜的检材,三）分离并测定混合斑中的ABH物质 中和实验 测定a2SGP、SPP的ABH物质,四）测定精子特有的血型 DIA3 yGGT ORM1五）精斑的DNA分析,混合斑（精子、阴道上皮细胞 SDS、蛋白酶K完整精子 DNA（阴道上皮细胞）DDT二次消化 SDS、蛋白酶DNA（精子）,
