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1、激光荧光光谱分析,原子蒸汽的荧光现象早在十九世纪末期和二十世纪初期就有人研究过，用太阳光通过聚焦作用作为激发源，试管中装有要检查的试样，用肉眼来检测在太阳激发后试样所发出的荧光，以辨别新的化合物，此后荧光测量装置逐步发展并完善起来。但是，因为长期没有得到荧光强度和试样浓度之间的线性关系，所以这种分析方法到本世纪四十年代末还不能认为是可信赖的。一直到灵敏的光电倍增管的出现，并用于探测荧光之后，荧光分析方法才开始真正建立起来。一九五零年之后开始出现了商品荧光光谱仪。这种装置采用两个单色仪，一个用来选择激发光的波长，另一个用来分析样品受激发后发出的荧光波长。,一、基本原理及发展,荧光分析中最重要的一
2、类方法是原子荧光分析。原子荧光是一种辐射的去活化过程。其机理是原子受到某一合适的波长的辐射(能量)的激发，接着辐射去活化而发出辐射荧光。荧光的波长可以和激发的波长相同，也可以不同。不同时多为荧光波长比激发波长长。荧光波长比激发波长短的情况极少。荧光波长和激发波长相同的荧光称为共振荧光。荧光波长和激发波长不同的称为非共振荧光。由于相应于原子的激发态和基态之间的共振跃迁的几率一般比其他跃迁的几率大得多，所以这种共振跃迁产生的谱线是对分析最有用的共振荧光光线。也有人建议吧这类荧光称为“激发态共振荧光”。原子也可以处在由热激发产生的较低的亚稳态级。共振荧光也可以亚稳态能级上产生。这种荧光称为“热助”共
3、振荧光。非共振荧光的两个主要类型是直越线荧光和阶跃线荧光。一个原子受光辐照而被激发（通常从基态）到较高的激发电子态，然后直接跃迁到高于基态的亚稳态，这时发射的荧光称为直越线荧光。而当激发线和发射线的高能级有差异时，就产生阶跃线荧光。当荧光的波长比激发波长短时就成为反斯托克斯荧光。这时光子能量的不足通常由热能补充，所以这种荧光也是一种“热助”荧光。此外还有一种荧光称为“敏化荧光”。它的产生是被外部光源激发的原子或分子通过碰撞把自己的激发能转给待测原子，然后待测原子通过辐射去活化而发出原子荧光。当两个或多个原子激发同一原子，此原子跃迁到较高的激发态，然后去活化而跃迁回到基态，这时产生的荧光称为多光
4、子荧光。最常产生的是双光子荧光，其波长是激发波长的二分之一。图1用能级图表示了共振荧光与非共振荧光的简单原理。,a共振荧光 A共振跃迁 B“热助”共振跃迁 b直跃线荧光 A起源于原子基态 B起源于亚稳态 c阶跃线荧光 A正常阶跃线荧光 B“热助”阶跃线荧光 d“热助”反斯托克斯荧光 e敏化荧光 f双光子荧光,图1 各种类型荧光的跃迁能级简图,原子荧光光谱分析是一种新的微量分析方法。它的灵敏度非常高。对于很多化合物，它的检测下限为10E-6到10E-9，因而特别适用于痕量分析。要得到最好的检测极限，通常要有大的激发辐射，透射到检测器上的散射光应该尽可能的小，火焰有做够高的温度，检测荧光的分光计要
5、有大的聚光本领。在采用激光作为激发光源之前，光源大都采用氙气、空心阴极灯、无极放电灯和金属蒸汽灯等。要得到单色辐射还要经过一个单色器，因此光谱能量不高，而且光谱宽度较宽。用可调谐染料激光器作为激发光源，不仅不需要激发单色仪，而且因为它具有很高的峰值功率和很窄的线宽，特别是在采用脉冲可调谐染料激光器时，脉宽窄，可以具有很低的占空因子，而大大提高了信噪比。虽然到现在还没找到波长低于300nm的高效率的激光染料，但是利用ADP，KDP，KB5等倍频晶体可以得到波长约为211nm的紫外激光，这完全可以满足激发光源的要求。利用激光作为激发光源可以获得更高的检测灵敏度，较高的信号功率并可以实现选择激发。例
6、如，用非发射的均匀气体介质代替火焰，1972年Jenhings和Keller用一台连续的染料激光器测定了2*10e6个钠原子/cm2。而同年Hansch和Schawlow甚至测定了1*10e2个钠原子/cm2。这相当于4*10e-15ug/ml。特别是使用了脉冲可调谐染料激光器，由于提高了信噪比，检测灵敏度大大提高。,二、检测激光原子荧光的装置,图2为现在国内使用最多的MPF-4型光学荧光光度计的光学系统图。由图中可看到原子荧光检测装置一般需要光源、激光单色器、样品室、发射单色器和探测记录系统等部分组成。图3是一台激光原子荧光检测装置的各部分示意图，从这两图的对比中可以看到：激光原子检测装置与
7、光学原子荧光检测装置的不同，只在于前者用可调谐染料激光器代替了后者的光源的激发单色器，其他样品室、发射单色器和荧光检测系统仍然需要。,图2 MPF-4型荧光分光光度计光学系统图,图3 激光原子荧光分析装置系统组合图,1激光电源 2氮原子激光器 3染料激光器 4火焰原子化器 5聚光镜 6透镜 7单色器 8光电倍增管 9Boxcar积分器 10记录器 11光电倍增管电源,样品室实际上就是一个原子化器，它与分析原子吸收光谱所用的原子化器相同，主要可分为火焰法和电热装置两种，前者有空气、乙炔、一氧化二氮、乙炔火焰等，后者包括石墨管与碳棒等。在探测时采用何种原子化器为好，根据实际情况。值得指出的是，虽然
8、众多的激光原子荧光分析采用火焰作为原子化器，但是由于激光光源的稳定性至今还不能做到和光学荧光分析仪中所用的空心阴极灯和无极放电灯那样稳定，加上火焰法产生的荧光背景很强，因而影响可激光荧光火焰光度法德分析灵敏度的提高。而采用石墨原子化技术，则可以进一步提高其分析灵敏度，而且还可以直接分析固体样品。,作为激光光源的激光器可以是脉冲染料激光器（泵浦源为倍频红宝石激光器，倍频掺铷YAG激光，氮分子激光或用闪光灯泵浦），或者连续波染料激光器。用连续波染料激光器作为激发源对钠和钡进行研究，已经得到很好的探测极限，但是这种激光器可以用的波长范围，迄今还限于520nm以上的比较长的可见光区域，用闪光灯泵浦的倍
9、频染料激光器研究了镁（在285.2nm）和铅（283.3nm）,也有很好的探测极限。但是它们都要有比较大容积的染料溶液。到现在为止用于激光原子荧光最有效的激光器，是脉冲氮分子激光倍频泵浦的可调谐染料激光器，主要是它有高的峰值和宽的可用波长范围（大约220nm到950nm）。,激光激发原子荧光的探测系统通常由光电倍增管和采样示波器或者Boxcar积分器耦合组成。用高的光谱辐射的脉冲光源和门探测电路结合起来，是一种接近于最佳的分析系统。它可以使信噪比大大提高。因为探测器仅在激光工作的那个时刻“打开”或者有一个很短的延时，因此背景噪音仅在“打开”的短时间内起作用。也就是说脉冲激发和门探测电路的组合的
10、优点是是提高了峰值功率和低的占空因数的组合结果。,对于共振荧光，影响信噪比的噪音主要是瑞利散射发射噪音，而对于非共振荧光，影响探测极限的噪音有暗电流噪音、放大器噪音、火焰背景发射噪音和分子荧光背景噪音。由于并非所有的元素都有足够的非共振荧光，所以作为一具较好的分析装置，应该尽可能设计成对于共振荧光和非共振荧光都能获得最佳的信号，以满足分析需求。由于激光的光谱带宽极窄，典型的例子如图4所示，用激光扫描观察到钠在589.0nm和589.6nm处，荧光发射线的半宽度仅为0.03nm，而用单色仪扫描观察到的半线宽度1.6nm，两者竟差50倍，再加上使用门探测电路，因此可以用较大口径的光学系统，以得到大
11、的信号。一系列的研究表明如果用扩展的或不扩散的光束，使原子蒸汽激发到近饱和的状态，荧光信号则将随着被辐射的体积而成正比，这也可以得到大的探测信号和有比较大的线性动态范围。从上面的分析可以看到不管在什么情况下，源载发射噪音都应大大限制，因此采用扩展光束，减少散射，用专用的光收集器和挡光板等措施，将大大减少噪音，而改善分析的品质因素。,图4 钠D线的荧光激发线和发射轮廓图,左边是扫描激光器观察到的轮廓图 右边是单色仪观察到的轮廓图,图5是Weeks等人用来做激光激发原子荧光火焰光谱分析法的装置的系统组合简图。他们用这个系统做了大量的研究，表1是他们所用的激光染料，表2是他们汇总的激光激发原子荧光火
12、焰光谱分析法的探测极限，特转载于此。用激光激发原子荧光火焰光谱分析法分析过的几乎所有的元素的线性动态范围大约是5到7个数量级，和采用ICP（电感耦合等离子体）得到的差不多4到7个数量级，比用普通光源的原子荧光光谱分析和原子发射光谱分析所得到的要大1到2个数量级,图5 激光激发原子荧光测量装置,1氮分子激光器 2染料激光器 3染料激光控制装置 4真空泵 5氮分子激光器电源6触发源 7光束扩展束 8薄板 9光阑 10燃烧器/汽化器 11光收集器 12光收集器13光阑 14挡光板和透镜 15单色仪 16光电倍增管检测器 17记录器 18Boxcar积分器19光电倍增管电源,表1 Weeks等采用的激
13、光染料,表2汇总的激光激发原子荧光火焰光谱分析法的探测极限,为了提高探测极限，Epstein等人用闪光灯泵浦的倍频染料激光器研究铁的反斯托克斯跃线荧光。图6是他们研究所采用的装置简图。激光染料为若丹明6G，每秒10个脉冲，每个脉冲约15J，探测器为1P28光电倍增管，并和Boxcar积分器组合，门宽1us，积分时间常数0.01ms，观察时间常数为0.8或8s，采用的分析单色仪焦距是0.1m，相对孔径f/3.5，线色散倒数8nm/mm。采用1200线/mm的全息光栅作为色散元件，缝宽2mm。缝高10mm，激发波长为296.7nm，荧光波长为373.5nm。探测极限高达0.06ng/ml。此外，N
14、.Omentto等人还将激光和ICP联用，对ICP（电感耦合等离子体）中的原子进行荧光探测。它具有很高的空间分辨率和优良的信噪比。虽然，迄今为止作为商用仪器的激光激发原子荧光光谱分析装置还没有出现，但是，随着这种方法的大量研究和使用，它必将逐渐的变为一种有效的痕量分析的新方法，因而也必将跟着有成熟的商品仪器问世。,图6 激光原子荧光测量装置原理图,激光原子吸收光谱分析,一、分析原理,作为元素分析方法的原子吸收光谱分析法最早是由澳大利亚学者瓦尔许在1953年提出来的。1955年开始提出实验装置。它与火焰发射光谱法不同的是，火焰发射光谱法是通过燃烧火焰的热能将火焰中的待测物质的原子激发到高于基态的
15、高能态上，然后处于高能态的原子跃迁回到基态而发出特征光，并根据发射光的强度来测定待测物质的含量。这对于碱金属，在火焰的燃烧温度中处于较高能态的原子数比较大，因而跃迁回到基态时发射的光能比较多，而在光谱中出现亮线，是很好的分析方法。但是其他的金属例如铁、锌等，即使在火焰燃烧温度中处于高能态的原子数也不多，因此用火焰发射光谱法可能测得的光非常弱，因此这种方法不准确了。,对这些元素如果以一定频率的光照射其处于基态的原子，使之向较高能级态跃迁，测出被吸收的光强，并用来计算样品中的原子数，从而得到该元素的含量，这就比火焰发射光谱法准确。这就是原子吸收光谱分析法。原子吸收光谱分析法同样需要把待分析物质做成
16、溶液喷射到燃烧的火焰中，它的作用是由于火焰的温度而使溶液汽化成原子状态，如图7是原子吸收光谱分析法的原理图,图7 原子吸收光谱分析装置方框图,图中可以看到，作为一个原子吸收分析装置必须有光源、雾化器、燃气系统、分光计、检测和现实系统。由于原子的谱线很窄，例如多普勒线宽为0.02埃，因此分光计要有很高的分辨率。激发光源的线宽必须小于原子线宽才能有效的测定。过去原子吸收分光计的发展主要是三方面：（1）改进原子汽化的加热炉；（2）提高激光光源的强度和减小其线宽；（3）设计制造高分辨率的光栅分光器。在使用激光器作为激发光源之前，空心阴极灯有自吸收现象，因此使分析灵敏度降低。使用空心阴极灯还有一个缺点，
17、就是对多种元素的分析，要相应的变换用不同元素的灯。而且，由于砷、硒等元素的共振线位于远紫外区，在这些区域，空心阴极灯不能给出足够的亮度，而多采用无级放电灯。,染料激光器在相当宽的波长范围内可以连续调谐，而且谱线的半宽度可以做到很窄，例如，现在以可以做到的最小线宽约为7MHz,也就是对6000埃的谱线，其线宽约为810e-5埃，激光的亮度也比空心阴极灯要高。因此，用可调谐染料激光器作为原子吸收光谱分析的光源，可以提高分析灵敏度，波长连续可调，便于进行定性和定量分析。1967年的国际量子电子学会议上展出了第一台染料激光原子吸收分光光度计。,二、激光原子吸收光谱分析的特点及其装置,染料激光原子光谱分
18、析可以采用腔内吸收和腔外吸收两种方法。腔内吸收方法的分辨率比较高，但是染料激光波长调谐受到限制。现在，介绍一种用的最多的Hansch型激光器用于原子吸收光谱分析的研究结果来说明可调谐染料激光原子吸收光谱分析的特点，这主要是根据日本久得田嘉隆德研究结果。如图8,图8 用于原子吸收分析的染料激光器原理简图,（一）光谱线宽和分析灵敏度 这个装置的激光输出线宽是0.01nm，输出功率是5kw。为了使激光线宽变窄，在腔外加上法布里珀罗标准具。由于用了三种不同的标准具，得到三种不同的线宽，最小的为0.0004nm。其结果和空心阴极灯的线宽对比见表3。,表3 几种线宽变窄方法的线宽和空心阴极灯线宽的比较,图
19、9是用染料激光器做光源时的吸收光谱测定系统。用这些光源对同一浓度的钠原子进行吸收光度测定的结果表明，激光的线宽越窄，吸光度越大，也就是说检测线的斜率越大，分析的灵敏度也越高。,图9 用燃料激光器作吸收光谱测定装置原理图,和空心阴极灯相比，V1的分析灵敏度要高出2到3倍。因为V1的线宽要比空心阴极灯的小10多倍。但是V3的线宽虽比空心阴极灯的线宽小不到一倍，它的分析灵敏度却比空心阴极灯低。其原因是激光的线型是洛伦兹型，而空心阴极灯的谱线线型是高斯型。由此可见用激光光源时必须尽量使其线宽变窄，若比空心阴 极灯的线宽小的不多，就不见得能提高分析灵敏度。而现在广泛使用的元素的原子化方法得到的吸收线宽是
20、0.1nm左右，因此激光的线宽能达到0.02nm左右就可以了,（二）激光强度的影响 光源的强度太低，当然影响灵敏度。但是如果激光的强度太高会引起吸收饱和现象也对分析的灵敏度不利，图10是在不考虑饱和现象时的光源强度和吸收强度之间的关系。,图10 吸收光谱与光源强度的关系 I为相对光强,通常用原子吸收光谱可以分析的（Ag、Al、As、Au、B、Ba、Be、Bi、Ca、Cd、Co、Cr、Cs、Cu、Dy、Er、En、Fe、Ga、Ge、Hg、In、Ir、K、Li、Mg、Mn、Mo、Na、Ni、Pb、Pt、Rb、Rh、Ru、Sb、Se、Si、Sn、Sr、Te、Ti、V、Zn）46个元素的分析灵敏线中，
21、在400nm以下的有36个元素，其中26个元素的分析灵敏线在300nm以下。因此，用于原子吸收分析的激光器应该是在紫外区波长可调谐的。现在虽然可用倍频方法来使可见光区的染料激光器在紫外区产生倍频光，但光强较弱，所以研制在紫外光区能得到足够光强和适当线宽的可调谐染料激光器将是研究激光原子吸收光谱分析装置的重要课题。此外积极采用新的脉冲信号处理技术以减少由于脉冲激光光强不稳定而影响分析精度也是极为迫切的任务。,（三）分析结果的精度 就目前来说，虽然激光原子吸收光谱分析的灵敏度较高，但是精度较低，也就是吸光度数值的误差较大。其原因是脉冲激光的脉冲强度不如空心阴极灯辐射的强度稳定。,前面已经讲到被分析
22、的试样，可以放在激光器的腔内也可以激光器的腔外。放在谐振腔内除了可以得到较高的分辨率之外，还可以增强痕量吸收的可检测性。和单通道吸收相比，增强系数可达10e2到10e5，这已为多个研究者的工作所证实。这也可以应用于原子吸收光谱学中。M.Meada等人曾经应用这个技术来研究稀土元素的痕量分析并证明有极高的灵敏度。他们用一标准的一氧化氮、乙炔火焰放在闪光灯泵浦的染料激光器的谐振腔内。用了香豆素120，1，102，6，若丹明6G，辉光硫核黄素，甲苯紫罗兰等八种染料，可在432到670nm的光谱范围内调谐。结果观察到除Pm（钜）以外的所有稀土元素的1200条原子吸收谱线。比传统的方法观察到的谱线。其中镧（La）17条，铈（Ce）191条，镨（Pr）46条，钕（Nd）263条，铒（Fr）46条，铥（Tu）25条，镱（Yb）6条，镥（Lu）10条，特别是火焰中铈的原子吸收线，在传统的方法中是很难观察到的。,武汉大学物理电子学赵恒,
