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1、病原菌标本的采集,1、血液及骨髓标本的采集2、尿液标本的采集3、粪便标本采集4、分泌物的标本采集5、特殊标本的采集（如：脑脊液的采集、浆膜腔积液的采集）,病原菌标准的采集方法：,血液及骨髓标本的采集,1.皮肤消毒程序：(1)75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上。(2)用一根碘酊或聚维酮碘（碘伏）棉签消毒皮肤，12碘酊作用30s或聚维酮碘作用60s，从穿刺点向外以1.52cm直径画圈进行消毒。(3)75酒精脱碘。对碘过敏的病人只能用75%酒精消毒，消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。,2.培养瓶消毒程序(1)用75酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。(2)酒精作用60s。(3)在血液注入血培养
2、瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。3.培养瓶接种程序抽取血液后，不要换针头，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，然后再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。,1.清洁中段尿标本:嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，再用清水冲洗尿道口周围，开始排尿，将前段尿排去，插入性接取中段尿约10ml于无菌容器中，立即送检，于一小时内接种。2.耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦，病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取
3、标本困难的婴儿尿标本的采集。,尿液标本的采集,3.直接导尿：按常规方法对会阴部进行清洗消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液。可减少尿液标本的污染，准确地反映膀胱感染情况。4.小儿收集包：对于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液。5.留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液。,粪便标本采集,1.自然排便采集法：自然排便后，调取有脓血粘液部位的粪便23g，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。2.直肠拭子法：如不易获得粪便时或排便困难的患者及幼儿，可采用直肠拭子方法采集，取出后置于灭菌容器内送检。,
4、分泌物的标本采集,1.开放性感染和已溃破的化脓灶：先用灭菌生理盐水冲洗表面的污染菌，用灭菌拭子采取脓液及病灶深部的分泌物。注意尽量取化脓组织与正常组织交界处的脓汁，因为脓汁中心的细菌大部分已死亡，交接处的活菌较多，会提高阳性率。2.闭锁性脓肿：一般采用穿刺或手术引流的方法采取.采集前先用2.5-3%的碘酊和75%的酒精消毒周围皮肤。,特殊标本的采集,1.先用2%碘酊消毒穿刺要通过的皮肤.2.用针穿刺法或外科手术引流法采集标本，然后放入无菌试管或无菌容器内。3.尽可能采取更多的液体，至少为1ml。,病原菌接种的方法,接 种,2.接种工具:在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。
5、由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。,1.定义：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。,1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀,3.常用的接种方法,(1)划线接种:这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。(2)三点接种:在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种
6、在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。,(3)穿刺接种:在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。做法：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，(4)浇混接种:该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。,(5)涂布接种:与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速
7、用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。(6)液体接种:从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。,(7)注射接种:该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。(8)活体接种:活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。,病原菌的分离纯化,接种方法,(1)划线接种(2)三点接种(3)穿刺接种(4)浇混接种(5)涂布接种(6)液体接种(7)注射接种(8)活体接种,平板划线法,最简单的分离微生物的方法。常见的的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。,成品,微生物分离纯培养方法的比较,
