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1、实验项目 蛋白质变性与沉淀,一、实验目的,1.掌握蛋白质变性与沉淀的原理及各种沉淀方法；2.熟悉刻度吸量管的正确使用；3.了解蛋白质变性与沉淀两者的关系。,二、实验原理,（一）蛋白质沉淀原理 蛋白质溶于水形成稳定的胶体溶液，维持蛋白质胶体溶液稳定因素：1.蛋白质颗粒表面的水化膜；2.蛋白质颗粒表面的电荷。去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出。,蛋白质沉淀析出常用的方法有等电点法、盐析法、重金属离子沉淀法、有机酸试剂沉淀法、有机溶剂沉淀法等。,（二）蛋白质变性原理,蛋白质受某些物理或化学因素的影响，空间结构发生改变，生物活性丧失。称为蛋白质变性。,蛋白质变性，分可逆；不可逆。,三、实验仪器与试剂,
2、1.仪器试管、刻度吸量管、洗耳球等。,2.试剂 5蛋白质溶液、2.5蛋白质溶液、10ZnSO4溶液、o.1mol/LNaOH、1三氯醋酸、无水乙醇、NaCl（固体）,四、实验内容及操作步骤,1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质,2.乙醇沉淀蛋白质,（一）实验内容,（二）操作步骤,1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质,1）实验原理,pH pI,pH pI,pI,两性离子,负电荷,正电荷,盐,盐,2）操作步骤,3）观察、记录实验现象，并解释之。,结构记录,实验现象分析,试管1中加入碱，其pH pI，蛋白质分子带负电荷，与Zn2+结合生成不溶于水的盐沉淀。试管2中加入酸，其pH pI，蛋白质分子带正电荷，与
3、三氯醋酸根结合生成不溶于水的盐沉淀。试管3中只加有蛋白液和ZnSO4 蛋白质分子因带较少的正、负电荷，与Zn2+不反应。,2.乙醇沉淀蛋白质,1）实验原理 乙醇溶解于水，破坏蛋白质分子的水化膜，加入少量中性盐抑制蛋白质的解离，使电荷减少，沉淀更完全。,2）操作步骤,3）观察、记录实验现象，并解释之。,结果记录,实验现象分析,试管1中加入无水乙醇，破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。试管2中加入无水乙醇和少量的氯化钠，不但破坏蛋白质分子表面的水化膜，同时蛋白质分子表面的电荷减少，沉淀更充分。,五、注意事项 1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污染试剂。2.刻度吸量管不能交叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。3.做完实验把把试剂按原样摆放，试管和刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干净，登记签名。4.值日生听老师安排，认真打扫，经老师批准才能离开实验室。,六、思考题 1.临床抢救重金属中毒患者，为什么用鸡蛋清或牛奶？2.蛋白液中加入适量乙醇，为什么会产生沉淀？3.蛋白液在碱性条件下加入ZnSO4，为什么会产生沉淀？4.蛋白液中加入三氯醋酸，为什么会产生沉淀？,下次实验：P74页 激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验报告明天交，请组长负起责任。谢谢同学们配合！,下次实验：P70页 酶的特异性实验报告可以下课交，最晚明天交，请组长负起责任。谢谢同学们配合！,
