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1、实验二富集培养物的分离,光合细菌的富集培养,2,光合细菌：具有原始光能合成体系的原核生物，是在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称,应用：净化水质、饲料添加剂、减少鱼类病害、培养有益藻,光合细菌的富集培养,1.采样：选取有机污染严重的水塘或有机质丰富的园地做为采样地点。2.样品的富集：a 无菌操作分别取泥样1g或水样1mL于厌氧管中（厌氧管已灭菌）；b 加半固体培养基至满，拧上螺口帽，造成厌氧环境；c 在温度为30，光强为30005000lux下培养箱中培养12周。,3,示意图,4,First.1 g 土壤或1 ml污水,Second.半固体培养基（加满）,光照富集培养2周,半固体琼脂法创
2、造相对厌氧环境分离（在好氧平板上不能形成单菌落）。,富集样品一周,观察富集液颜色,继续转接富集,分离单菌落,颜色不明显,颜色明显,分离单菌落,通常光合细菌菌数的数量级为108左右，确定稀释的梯度为10-110-7（正确计算）,分离单菌落,1,2,3,4,5,6,7,0.9 ml的生理盐水,分离单菌落,1,2,3,4,5,6,7,菌液,0.1ml菌液,分离单菌落,1,2,3,4,5,6,7,0.1ml的10-1菌液,注意：每次稀释前摇匀！,10-7,10-6,10-5,10-4,10-3,10-2,10-1,分离单菌落,10-7,10-6,10-5,取0.1ml,加半固体培养基至满，塞上橡皮塞，
3、颠倒混匀，每个梯度分别做两个平行,温度为30,光照强度30005000lux,光照培养箱中培养七天,思考,根据以上步骤，需准备什么？,离心管、管架、生理盐水、移液枪、枪头、小试管、橡皮塞、半固体培养基（参照上节课）、无菌操作所要的准备等,光合细菌培养基的配制,光合细菌是一群能进行光合作用的原核生物，分产氧光合菌（即蓝细菌）和不产氧光菌，通常所说光合细菌是指不产氧光合细菌以厌氧异养光养生长的紫色细菌在自然界分布广、功能多样、应用价值最大。多生活在有机质丰富，且光线能到达的的环境中。用含小分子有机物和大量、微量元素、微生素的培养基在光照下可富集分离。半固体琼脂法创造相对厌氧环境分离（在好氧平板上不能形成单菌落）。,培养基母液配制,乙酸钠母液(0.2g/ml)NH4Cl母液(0.1g/ml)磷酸缓冲液母液(1M)大量元素溶液微量元素溶液维生素溶液酵母膏(0.1g/mL),培养基母液中所加母液的量,乙酸钠母液NH4Cl母液磷酸缓冲液母液大量元素溶液微量元素溶液维生素溶液酵母膏,10ml/L10 ml/L5ml/L10 ml/L1 ml/L1 ml/L1 ml/L,加水960ml,每组配200 ml(固体）,2ml2 ml1ml2ml0.2 ml0.2 ml0.2 ml,加水192 ml,调pH值=6.9,半固体培养基：加0.4%琼脂,厌氧培养,海水培养基：加2.5%NaCl,
