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1、实验七 植物种子不饱和脂肪酸的反相纸层析,一、目的,通过操作练习，初步掌握用纸层析法测定油菜籽中脂肪酸的组成的方法。,在纸层析中，通常支持相是含水的，移动相是有机溶剂。但是脂肪酸等化合物宜用有机溶剂为支持相和含水溶剂为移动相，这样能更好的进行分配，即“反相纸层析法”。由于不同的脂肪酸在两相中分配系数不同，所以在层析滤纸上移动速率就有差异，这样就使混合脂肪酸各组分被分开。然后用醋酸铜处理，将脂肪酸转化为相应的铜盐，再用红氨酸显色（也可以不用），即可得到蓝灰色点状层析图谱。,二、实验原理,二、实验原理,三、器材和试剂,1、器材层析缸，层析纸，直尺，铅笔，微量移液器等2、试剂5%的KOH-CH3OH
2、溶液；10%石蜡-石油醚溶液；1M的HCl溶液；石油醚；1%的醋酸铜溶液；0.03%的红氨酸溶液。,四、实验步骤,1、样品制备取10粒成熟的油菜种子于10ml离心管中，加1ml KOH-CH3OH溶液，并将样品用玻璃棒捣碎，酯化68h(40)。加入 HCl 1.8ml及1ml石油醚,摇匀约5min，静置分层（上清澄清）。,2、点样,在层析纸（10 cmX11 cm）一边约1.5cm处用铅笔轻轻画一条直线，每隔1.5cm点一小点，并编号；将层析纸放入石蜡油（10%石蜡-石油醚溶液）中浸透30s，取出晾干；在层析纸各编号处用针刺一小孔（孔不能太大），然后取样品上清液10l，10l，15l，15l，
3、20l，20l按编号顺序滴入孔洞处。,3、展开溶剂系统与条件,将点好样的层析纸直立放入盛有醋酸溶液的长方形层析缸中（使编号朝下）。醋酸溶液的多少以能浸泡层析纸但液面低于点样处为宜。展开至溶液上升到纸的最上端后，展开完毕，取出层析纸，烘干(烘箱37)。,4、显色,将层析纸浸入醋酸铜溶液中10 min(摇床，37)，使生成脂肪酸铜盐.用清水稍加冲洗，再放入洁净的瓷盘中，用流水漂洗45min左右。将层析纸小心取出，用干毛巾或滤纸吸干大部分水分后，置于40烘箱中干燥。将层析纸在红氨酸溶液中一带而过，与脂肪酸铜盐作用,观察蓝灰色的斑点,结果与分析,绘出反相纸层析色谱上五种不饱和脂肪酸的位置的示意图。,十八碳三烯酸 9,12-十八碳二烯酸9-十八碳烯酸二十碳稀酸13-二十二碳烯酸,思考题,分离不饱和脂肪酸为何要用反相纸层析法？,
