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1、.普通植物病理学实习报告目录前言一实习目的与内容二实习安排三实习过程及总结四植物病害病原鉴定报告五病害调查报告六实习实验总结七蜡叶标本展示八外出展示九实习建议十结束语前言植物病理学是主要研究引起农作物病害发生的各种生物与非生物引子及其致病机制、病原物与寄主间相互关系和控制病害发生、减轻发病程度、减少病害所致损失的原理及具体措施的一个重要农业学科。学习基本的植物病理学、流行学知识,掌握常见农业病害鉴别和病原物采集、分离等技能,是对作为高等农科院校植保专业学生提出的要求。为巩固和印证所学的植物病理知识,增强学生对本地区主要作物及主要植物病害的直观认识,我校资环学院为植保专业安排了植物病理学课的实习
2、,以加强学生理论结合实际,提高分析问题和解决问题的能力。一实习目的与内容实习目的1.巩固和印证所学植物病理学基础理论知识；2.熟练掌握植物病理学实验操作技能；3.通过室内外观察,认识本地区主要作物及主要植物病害的形态特征；4.加强理论联系实际,提高分析问题和解决问题的能力。二实习内容与方法1.线虫病害标本的采集、分离与鉴定；2.植物病害症状观察,病害标本的采集和制作及常见病害鉴定；3.植物病原真菌玻片标本制作及病原真菌鉴定方法；4.植物病原的分离与培养。二实习安排时间：20XX5月28日20XX6月8日地点：华南农业大学5月28日 华南农业大学跃进北植保农场采集病害标本；6月30日 XX市白云
3、区采集病害标本；6月4日 华南农业大学增城宁西基地采集病害标本及病害调查；指导三实习过程及总结一实习行程1、5月28日：上午8:30全班同学在资环院楼实验室227进行实习动员,实习老师布置实习事宜以及注意事项,领取实习工具,到图书馆借用工具书,病理学实习正式拉开序幕；下午3点在跃进北植保农场集中采集植物病害标本与土壤。2、5月29日：上午8:30开始在资环院楼实验室228、229,刘琼光老师和纪春艳老师分别指导我们进行细菌和真菌的分离 3、5月30日：上午8：15在东区芷园学生饭堂前集合,全体实习老师带领外出去XX市白云区采集病害标本。4、6月1日：下午3点在资环院楼实验室227,文艳华老师指
4、导我们进行土壤中线虫的分离。5、6月2、3日休息两天。6、6月4日：早上8:15在芷园饭堂前集合,全体实习老师和我们去华南农业大学增城宁西基地采集病害标本和进行田间病害调查。7、6月5日：上午8：30开始,全天在院楼228进行病害标本鉴定并观察细菌分离培养结果；下午,在老师的指导下制作玻片标本。8、6月6日：早上8:30开始全天在资环院楼实验室227进行蜡叶标本的制作与病原鉴定,并观察真菌分离培养结果；下午进行拨片鉴定。9、6月7日：在资环院楼229进行病原玻片标本观察。10、6月8日：上午9：00进行普病实验考试；各组实习以ppt形式进行小组实习总结,下午在资环院楼进行实习交流总结。二实习过
5、程中主要的内容1.外出采集病害标本和田间病害调查： 1主要有三个病害标本采集地：华南农业大学跃进北植保农场、XX市白云区、华南农业大学增城宁西基地。2采集标本应准备的工具和材料有：塑料带、标签、笔、记录本、小土铲、小剪刀、相机等。3注意取样部位：病害标本上有子实体的应该尽量在老叶上采集；病毒病应尽量采集顶梢与新叶；整个植株萎蔫的植株可连根挖出,可连通根际的土壤一起采集；危害根部的线虫病害标本要采集病根和根围土壤。4田间病害调查：选取田间的重要病害作为调查对象,采用五点取样法进行对此病害进行田间病害调查,每块田根据地形选择五个取样点,每点调查10株,根据不同作物的不同病害调查方法和严重度分级标准
6、填写病害调查表和总结病害调查报告。5采集病害标本时,应记录采集时间、采集地点、采集者、寄主名称等信息；田间病害调查时,应记录调查时间、调查地点、调查病害、调查面积、调查人、气象资料、调查小组、调查结果等信息。6实习摄影：通过摄影将标本病害症状的自然状况和我们的实习过程记录下来。7标本的保存：将采集的标本夹在书本中干燥保存,用以标本病害鉴定。2.实验室进行标本的整理及病原鉴定： 1将采集到的病害标本带到实验室,在老师的指导下,制作玻片,在显微镜下观察,参考工具书,鉴定出所采集的标本病害名称和学名,描述病原菌特征,并绘出病原形态图。2整理已鉴定标本,选取其中病症典型的叶片,继续用书本夹保持干燥以保
7、存。注：在标本鉴定过程中,要将在显微镜下观察到的病原形态和所对应的寄主形态用相机拍摄记录下来3.植物病原细菌柑橘溃疡病病原细菌和真菌水稻纹枯病菌的分离与培养；细菌培养基：牛肉膏蛋白胨培养基真菌培养基：马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基1植物病原细菌的分离划线分离法与培养步骤： 消毒：提前倒好牛肉膏蛋白胨培养基平板。并取3个小碟,分别加入一点95%的酒精点燃消毒。然后在其中依次分别加入半碟75%酒精、0.1%升汞、无菌水。选取一小片新鲜的柑橘溃疡病植株维管束病组织,用清水洗净；洗净后放于装有75%酒精的小碟中进行表面消毒30秒1分钟；将病组织加入到0.1%升汞中消毒1分钟；将病组织加入到无菌水的小碟中
8、漂洗3次。 捣碎：滴12ml无菌水在一个灭菌小皿中,将消毒好的病组织捣碎在所滴无菌水中,搅拌后静置10分钟,用以制备菌悬液。 划线：用接种环沾取一环菌悬液,用划线分离法在准备好的培养基中划线4次,每划完一次在酒精灯下灼烧一次。 培养：将划线的平板倒置,写好标签注明姓名和日期,置于2528培养箱中培养,35天后观察结果。要求及注意事项：a先倒平板,每2人一个小三角瓶,共倒4个皿,没人分离两个皿；b无菌操作,保持环境干净,减少人员流动；c分离时保持安静；d划线时动作要轻微,不要划破培养基。 成果展示：2植物病原真菌的分离与培养步骤： PDA培养基：在酒精灯火焰上方将PDA培养基倒在无菌培养皿中,倒
9、的过程中应避免污染。 消毒：并取3个小碟,分别加入少许95%的酒精点燃消毒。然后在其中依次分别加入半碟75%酒精、0.1%升汞、无菌水。切取十小片新鲜的真菌性病害植株组织取病健部位,用清水洗净；洗净后放于装有75%酒精的小碟中进行表面消毒少于40秒钟；将病组织用镊子夹到0.1%升汞中消毒不超过40秒钟；将病组织加入到无菌水的小碟中漂洗3次。 放置：选取十小片病组织中较合格的五片,用镊子夹起并轻轻放在培养基上。 培养：将划线的平板倒置,写好标签注明姓名和日期,置于2528培养箱中培养,35天后观察结果。要求及注意事项：a无菌操作,防止培养基受污染b放置病组织于培养基时,为防止平板倒置时病组织掉落
10、,可轻轻用镊子按下病组织,使之固定,但动作要轻微,不能弄破培养基。成果展示： 没有分离出相应的真菌原因分析：1. 培养皿很干净:可能没有找到病原部位或者在制作过程中用了酒精灯加热；2. 培养皿受污染：在制作过程中让实验室的菌物进入培养皿。4.植物病原线虫分离与观察寄生性线虫与腐生性线虫区别观察；1植物病原线虫的分离贝曼漏斗法： 分离前用水洗净分离线充所需实验器材,有漏斗、小试管、筛网。 分离时在漏斗下面接一个小管后,在漏斗中加入适量的水；漏斗放大小适中的筛网,筛网上铺一张纸巾维达牌后,加土样于筛网上,土样要淹没在水中若之前加的水过少,则用蒸馏瓶小心的在漏斗边缘注入水直至淹没土样,静置漏斗24小
11、时。注：每小组采集了三种种植不同作物的土样,每种土样都要进行植物病原线虫分离,故上述实验共操作三次。植物病原线虫的观察： 将小试管中收集到的物质倒入小皿中,在解剖镜下寻找线虫。 找到线虫后用胶头滴管将线虫吸到凹玻片中,盖上盖玻片,玻片在酒精灯上来回移动34次后,用显微镜寻找并观察、判断所分离出线虫。有口针的线虫为寄生线虫,无口针的线虫为腐生线虫；有交合刺的线虫为雄虫,无交合刺的线虫为雌虫3成果展示这个实验还算成功,腐生型的、寄生型的都被我们找到了,而且,部分线虫可以很清晰地看到其内部结构。5.植物病害蜡叶标本的制作：1选取鉴定完成的病害病症典型的叶片,至少两片。2将选取的叶片置于吸水纸中,用熨
12、斗加压烘干叶片至叶片完全干燥。3将熨干的病害叶片固定在一张A4白纸上最好展示叶片的正反面,在白纸的右下角写上采集时间、病害名称、拉丁学名、采集时间、采集地点、采集人。6.植物病原真菌的玻片的制作主要掌握半永久性玻片的制作：1玻片标本分类按保存时间长短、浮载剂的不同而分类临时玻片 保存时间：半天 浮载剂：水半永久玻片 保存时间：310年 浮载剂：棉蓝乳酚油 封固剂：中性树胶永久玻片 保存时间：永久 浮载剂封固剂：中性树胶、加拿大树胶2制作方法：挑刮法实验要求、撕表皮法、粘贴法、盖玻片培养菌制作法、涂抹法、组织整体透明法、徒手切片法实验要求、冰冻切片法、石蜡切片法等等。3玻片制作：杨媚老师指导我们
13、的实习要求是学习用挑刮法制作豇豆煤霉病Pseudocercospora cruenta和徒手切片法制作竹子黑痣病菌Phallychora graminis的半永久玻片。.挑刮法制作豇豆煤霉病Pseudocercospora cruenta的半永久玻片：步骤：在载玻片上滴一滴浮载剂,用刀片沾取浮载剂后刮下豇豆叶表面上生长良好的粉状物,并将其点在已滴有浮载剂的载玻片上,盖上盖玻片；在显微镜下观察到煤霉菌的分生孢子梗上着生着串生的椭圆形或卵形分生孢子；完成后写上标签。 注意：a不能两种菌混杂；b浮载剂不能太大滴；c盖玻片要用手帕擦干净。.徒手切片法制作竹子黑痣病菌Phallychora gramin
14、is的半永久玻片：步骤：选取小黑粒较多且明显突出的病组织,将病组织切成长1cm,宽0.5cm的长方形横切或纵切皆可；在载玻片上连续快速切片；切完后滴上适量清水,在解剖镜下挑取至少3个能够观察到子囊壳中子囊的薄片；再挑到滴有棉蓝乳酚油的玻片上,然后封盖。注意：a切片时刀片和载玻片保持垂直；b切片要尽量切薄。三实习中小组的总结1.经验缺乏,但收获重重在外出采集植物病害标本中,由于缺乏经验,也缺乏对一些植物的病害形态的了解,所以除了跟随指导老师摘取的病害,我们一些采集的植物植株与叶片尤其是茶叶都没有检查出病原物。在整个采集与鉴定过程中我们小组的最大诟病就是缺乏田间作物知识的积累,无法辨认出田间的植物
15、名称,尤其在第一次采集时跟随老师采集时没有标注叶片所属植物名称,以致给后来病害鉴定带来许多的麻烦。尽管如此,我们小组在整个实习过程中一直保持着虚心学习的态度,在实习过程中边采集边学习,分工明确,积极主动,外出采集收获颇丰,实验室鉴定病害也不赖。虽然实验室的鉴定很难很繁杂,但是我们从中都学到了很多知识,让我们对前几个月的理论知识做了全面系统的回顾。2.病原分离仍需努力植物病原真菌与细菌的分离与培养实验,我们了解了细菌培养基和真菌培养基的不同组成,也接触与学习到细菌与真菌的重要且基本的培养法。细菌实验得到了单个的目的菌青枯病病菌,但是平板划线并不是很成功,还是有很多菌落没有分开。真菌实验玉米的真菌
16、分离还算不错,长出了理想菌丝；但是水稻的分离中培养基有污染,培养基长出了杂菌。3.线虫分离简单鉴定难在植物病原线虫的分离与观察实验中,我们小组分别取了水稻、玉米、节瓜三种植物的根系土壤,在实验中也同时观察了其它小组的土壤线虫,除了在水稻中没发现线虫,我们小组在土壤中看到了不同种类的线虫也学会区分寄生性线虫与腐生性线虫、雄虫和雌虫。实验中文艳华老师的积极指导让我们能够更加直观的理解线虫,也让我们对线虫理论的了解更加的深入。 4.制作玻片需要耐心 植物病原真菌的半永久玻片的制作是实习中我觉得是最有难度与挑战性的一项实习内容。九里香白粉病虽然好制片,但是要做出有分生孢子梗的并且分生孢子串生在上面的玻
17、片确实有点难度。尤其是竹子黑痣病玻片的制作,这就要靠自己的刀工了,开始的时候自己几十刀下去,没有一片符合要求,这项工作也相当考验自己的耐心,最后是自己在小组成员的帮助下和老师的指导下经过一个上午的时间才艰难的挑出了三个薄片。 5.腊叶标本靠积累 腊叶标本制作也算是实习中比较轻松的内容吧,因为我们小组在采集标本的时候也注意采集特征明显好做标本的植物病害,所以给这个环节带来了很大的便捷。但是,腊叶标本需要在平时的时候就要做好采集以及压片的工作。这会直接影响到最终的结果以及标本的美观。在大家分工合作下,最后我们组共制作了包括大豆细菌性病害、豇豆煤霉病、花生褐斑病、丝瓜白锈病这四种不同病害的腊叶标本。
18、 6.玻片识别见英雄 玻片标本的辨认与识别是对我们实习的一个重要考核,也是对我们记忆力极限的一次冲击,每个人都很认真的观察、识别、绘图、记忆。这将是实习最后大家争辩英雄的时刻！尽管这次考验很艰苦,不过对我们很好地回顾真菌知识有了很大的帮助。也正是因为这个考核,使我们的更有理由去学习和认识真菌的实物。四植物病害病原鉴定报告_陈琦光 _201030200402 专业：植物保护农产品安全与检测_植保安检二班 组别：第一组 项目病害名称学名病原菌特征描述病原形态图1、水稻纹枯病RhizoctoniaSolani病菌不产生孢子。菌丝,具分支,交角处呈直角形,隔膜出有缢缩2、水稻杆腐病Sclerotium
19、 oryzae Catt.与S.oryzaeCatt. Var.irregulareRoger菌核球形、黑色,直径0.150.25毫米。叶鞘病斑和菌核表面还可产生分生孢子图3。分生孢子新月形,34个分隔,中间两个细胞褐色,两端的细胞无色,有的顶端细胞细长如卷须。3、黄瓜白粉病Sphaerotheca.fuliginea闭囊壳内产生1个子囊；附属丝菌丝状4、丝瓜白粉病Sphaerotheca.fuliginea闭囊壳内产生1个子囊；附属丝菌丝状5、苦瓜白粉病、Oidium sp.分生孢子梗,单生或3-5个串生的椭圆形分生孢子6、茄子白粉病Sphaerotheca fuliginea无性态分生孢子
20、串生在直立的分生孢子梗上7、豇豆白粉病Sphaerotheca astragali分生孢子梗上串生许多椭圆形或卵圆形分生孢子8、节瓜白粉病Erysiphe cucurbitacearum无性繁殖体分生孢子梗结构简单,分生孢子在其上串生9、空心菜白锈病Albugo bliti Kuntze很多散生的孢子囊,周围很多包囊梗。纵切会发现孢囊梗平行排列在寄主表皮下,孢子囊串生10、豇豆煤霉病Cercospora vignae分生孢子梗褐色,丛生,丝状,分生孢子针形、倒棒形、鞭形,无色,多隔膜11、黄瓜霜霉病Peronosporabrassicae孢囊梗二叉状锐角分支,末端尖锐,孢子囊卵形或椭圆形12、
21、苦瓜霜霉病Pseudoperonospora cubensis包囊梗基部稍膨大,上部呈假单轴式二叉状锐角分支,孢子囊卵形,有乳突,萌发是产生游动孢子13、莴苣霜霉病Bremia lactucae Regel孢囊梗自气孔伸出,单生或2-6根束生,无色,无分隔。主干基部稍膨大,叉状对称分枝4-6次14荔枝霜疫病Peronophythora litchi游动孢囊梗57微米,长152一l092微米,无色,有隔膜,顶部单分枝23次后在分枝先端再双叉,末小梗的顶端略尖,其上同时形成1个孢子囊15、番茄早疫病Alternaria Solani菌丝状有隔膜。分生孢子梗单生或簇生,圆筒形,有17个隔膜,暗褐色,
22、顶生分生孢子。分生孢子棍棒状,顶端有细长的嘴胞,黄褐色,具纵横隔膜。16、辣椒疫病Phytophthoracapsici包囊梗简单,菌丝状,无隔,较粗,淡色。孢子囊顶生,长椭圆形,淡色,顶端有乳头状凸起。17黄瓜疫病Phytophthora drechsleri Tucker菌丝丝状、无色、宽3571微米,多分枝。幼菌丝无隔,老熟菌丝长出瘤状节结或不规则球状体,内部充满原生质18柑橘溃疡病Xanthomonas Campestris pv.citri实验中细菌病原形态未做鉴定19芒果炭疽病Colletotrichum gloeosporioides Penz菌丝初无色,后浅褐色,圆筒形；在病斑
23、表面散生浅褐色扁平或隆起的分生孢子盘,盘内密生短小的分生孢子梗,梗上着生分生孢子。分生孢子单胞、无色、椭圆形或圆筒形、直立或稍弯20、番茄炭疽病Colletotrichum lycopersici孢子盘上有很多刚毛,灰褐色,多弯曲。分生孢子团,着生大量的分生孢子。分生孢子圆筒形、单胞、无色21、茄子炭疽病Colletotrichum truncatum分生孢子盘大小不一,盘上具密集的黑色刚毛,刚毛具03个隔膜,下粗上尖,尖端色稍浅。分生孢子无色,新月形或镰刀状,一端尖锐,另一端较钝,单细胞22、辣椒炭疽病Colletotrichum.gloeosporioides外分生子盘褐色,具刚毛,分生孢
24、子梗褐色,分生孢子新月形23、豆角炭疽病Colletotrichum lindemuthianum生孢子盘黑色,圆形或近圆形。分生孢子梗短小,单胞,无色。分生孢子圆形或卵圆形,单胞,无色,两端较圆,或一端稍狭,孢子内含12个近透明的油滴。24、荔枝炭疽病ColletotrichumGloeosporioides分生孢子梗圆柱形,在分生孢子盘内排列成一层,顶生分生孢子。分生孢子无色,长椭圆形或新月形。25、霸王花炭疽病Colletotrichum opuntiae基丝生于基质内,子实体黑色或浅色,蜡质,无包被,盘形。分生孢子梗从菌丝层或子座生出,常不分枝也不分隔,密集成栅栏状,分生孢子常埋于胶质
25、中,群集时使孢子成橙色等。分生孢子盘有刚毛,刚毛一般生于分生孢子26、玉米炭疽病ColletotrichumgraminicolaCes.Wilson分生孢子盘散生或聚生,黑色；刚毛暗褐色,具隔膜37个,顶端浅褐色,稍尖,基部稍膨大,；分生孢子梗圆柱形,单胞无色；分生孢子新月形,无色,单胞,。27、玉米大斑病ExserohilumTurcicum无性态分生孢子梭形,有时稍弯曲,中部最粗,两端渐细,基部细胞尖锥形,脐明显,突出于基细胞之外,分生孢子驹4-7个隔膜,分生孢子梗丝状,褐色,上部多呈膝状弯曲,单生或2-6根丛生28、玉米小斑病BipolarisMaydis分生孢子梗膝状弯曲,不分支,褐
26、色,多数有5-11个隔膜,端部稍细且色淡,基部较粗,色深,分生孢子进梭形,中间较粗,向两端渐细,两端细胞钝圆,脐点平截29、玉米褐斑病Physoderma.maydis休眠孢子囊扁球形,黄褐色,具有囊盖,萌发时释放多个游动孢子。30、花生褐斑病CercosporaArachidicola 分生孢子梗黄褐色,无隔或有1-2隔膜,直或略弯,上部渐细,有明显节状弯曲。分生孢子棍棒形,多具5-7个隔膜31、花生黑斑病Cladosporium personatatum梗座生于表皮下,近球形或长条形,褐色至黑色,宽75-197m。分生孢子梗极紧密簇生,青褐色至烟黑色,色泽均匀,宽度较规则,直立或稍曲,具曲
27、膝状折点1-3个,不分枝,平滑,孢痕疤明显,厚而突出32、大豆细菌性斑点病Pseudomonas svrineae实验中细菌病原形态未做鉴定33、玉米纹枯病Rhizoctonia solani病菌不产生孢子。菌丝呈直角分支,在分支处有缢缩,距分支不远处有隔膜34、菜豆花叶病Tomato aspermy virtus 实验中未做病毒形态鉴定35、节瓜花叶病Watermelon mosaic virus实验中未做病毒形态鉴定36、香蕉花叶病Cucumber mosaic virus strain Banana实验中未做病毒形态鉴定37、香蕉束顶病Banana bunchy top virus BB
28、TV实验中未做病毒形态鉴定38、茄子青枯病Ralstonia solanacearum实验中细菌病原形态未做鉴定39、辣椒青枯病Ralstonia solanacearum实验中细菌病原形态未做鉴定40、丝瓜青枯病Periconia sp分生孢子梗浅褐色,直立,不分枝,具褐色子座41、黄瓜青枯病RalstoniaSolanacearum实验中细菌病原形态未做鉴定42、黄瓜枯萎病Fusarium oxysporum病菌的孢子梗数根丛生,褐色,顶端具次分枝,分枝顶端密生小柄, 其上生大量分生孢子。分生孢子圆形至椭圆形,单细胞,近无色,43、黄瓜锈病Uromyces setariae夏孢子单细胞,椭
29、圆形,黄褐色,表面有刺,柄无色,具34个芽孔44、丝瓜锈病Uromyces setariae夏孢子单细胞,椭圆形,黄褐色,表面有刺,柄无色,具34个芽孔五病害调查报告调查地点：增城宁西基地 调查病害：玉米小斑病 调查面积：1010米气象资料：29左右,晴 调查小组：调查结果： 发病个体数样点号 严重度发病率%病情指数0级1级2级3级4级5级第一点451110242121251000131003141001个体小计1021623578.7%0.32第二点062110041111081000070111031012个体小计0285344100%0.38第三点53000062000035000091
30、0000330002个体小计2614000238.1%0.11第四点2710013710011910013800022110001个体小计1142300682.3%0.25第五点442110251220250010470010341120个体小计1525447072.7%0.33合计62130189141775.2%0.267注：发病率%=发病样本数/调查样本总数100病情指数=发病级值各级发病样本数/玉米小斑病严重度分级标准：0级叶片上无病斑1级叶片受害面积为叶面积的1/5.2级叶片受害面积为叶面积的2/53级叶片受害面积为叶面积的1/24级叶片受害面积为叶面积的3/55级叶片受害面积为叶面积的4/5以上10 结束语为期两个星期的植病实习就这样在田地与实验室的来回奔波中结束了。回顾这两周的实习,感觉真是收获颇多,首先感觉自己掌握的不再是书本上的知识而是把书本上的知识具体化、生动化,让我觉得植病其实也没有那么难,而且开阔了我的视野,真正的做到了将理论带到实践中去,让我有了一次难忘的经历,希望以后也会有这样的机会。.
