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1、,洁净区微生物基础知识培训2011年 赵灵芝,微生物学,药品生产质量管理规范附录中明确规定：洁净区内的人员数量应严格控制，其工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净室的临时人员进行指导和监督。,医药工业洁净室必须以尘粒和微生物为环境控制对象二者相比，微生物更难以控制。1、存在范围广2、生长速度快3、生存能力强,什么是微生物？,微生物（Microorganism）通常是描述一切不借助显微镜用肉眼看不见的微小生物，包括病毒、细菌、真菌、原生动物、和某些藻类。,微生物的种类,具有细胞结构的微生物,没有细胞结构的微生物：病毒,原核生物：（由
2、原核细胞构成的）,真核微生物（由真核细胞构成的）,真菌显微藻类原生动物,细菌,草履虫,水绵,放线菌,微生物的共同特点（小、多、快、强、广）,（1）体积小，面积大 （细胞以微米、纳 米来计算） （2）吸收多，转化快（3）生长旺，繁殖快 如大肠杆菌（4）适应强，易变异 如感冒病毒（5）分布广，种类多,分解者微生物,消费者动物,环境土壤、空气、水,生产者植物（包括部分微生物）,微生物在生态系统中的地位：,消费者，部分生产者,微生物对环境的有害影响,植物病原菌：稻瘟病 烟草花叶病 烟草野火病动物病原菌：鸡霍乱 猪瘟(口涕疫)人类的疾病：非典型肺炎(SARS） 爱滋病 流感 伤寒,常见污染药品制剂的微生
3、物,1、葡萄球菌 可引起局部感染2、大肠杆菌 胆道和尿道感染3、绿脓杆菌 化脓性感染、中耳炎、肺炎4、枯草杆菌 结膜炎5、酵母菌 使糖分解，药液产生有机酸6、霉菌 使制剂霉坏，酸败变质,洁净室内微生物在哪里,空气水人员器具,空气中的微生物,灰尘微生物的飞行器微生物不是凭空存在，99%的微生物都附在颗粒上。控制空气中的微粒数，就是控制了微生物数量。灰尘、微粒具有沉降和粘附在趋势，所以同一区域内，地面是微粒相对集中在地方，也是微生物相对较多的地方，墙壁也容易粘附灰尘。,98版GMP,Air lock两扇门不能同时打开,Air Lock,仓库or外包间,洁净区走廊Or DISP,高效过滤器,高效过滤
4、器,气流,Air lock（缓冲间）的作用,控制空气对流，减少外界脏空气中的微粒、灰尘进入车间。 必须保持缓冲间门的关闭，不得同时开启。,空气自净和微粒的沉降与粘附,空气自净有死角顶送顶回（洁净走廊），地面顶送侧回（清洗间，操作间），对面的墙角，顶棚。微粒沉降和粘附不能用脚踏在垫仓板和料桶上。不得跑跳、大声喧哗。不靠在墙上或其他物体上。,水微生物的乐园水体是微生物广泛分布的第二个天然环境。 水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。,药品生产质量管理规范第四章设备第三十四条中明确规定：纯化水、注射用水的制备、储存和分配应能防止微生物的滋生和污染。储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀。
5、管道的设计和安装应避免死角、盲管。储罐和管道要规定清洗、灭菌周期,制药工业对水质的要求,药厂的水源：城市自来水、井水等达到饮用水标准的水源。口服制剂：片剂、颗粒剂、糖浆容器清洗：饮用水容器最终淋洗：纯化水小容量注射剂：15ml配制容器清洗：纯化水容器最终淋洗：注射用水,人洁净室中最大的微生物污染源,1、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。 2、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。3、人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。,人体内外微生物的分布,1、皮肤：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉棒杆菌、金黄色葡萄球菌等2、口腔：唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉棒杆菌
6、等3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等。4、下呼吸道：包括气管、支气管和肺 。健康人的下呼吸道是无菌的。 5、胃肠道：大肠埃希氏菌、产气杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌、粪链球菌、梭杆菌属、螺旋体属、乳杆菌属、梭菌属、拟杆菌属中的一些种6、泌尿生殖道：常见的有嗜酸乳杆菌、类白喉棒杆菌、葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌,如何阻断人体污染源,药品生产质量管理规范中明确规定：进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触药品。药品生产质量管理规范中明确规定：无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体
7、脱落物。,国外实验资料，可以认为人员的发菌量有以下数据可供参考。洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量一般为10300 个(min人)，躯体一般活动时的发菌量为1501000 个(min人)，快步行走时的发菌量为9002500 个(min人)。咳嗽一次的发菌量一般为70700 个(min人)，喷嚏一次的发菌量一般为400060000 个(min人)。穿平常衣服时发菌量为330062000 个(min人)。无口罩发菌量：有口罩发菌量为(1：7)(1：14)。发菌量：发尘量为(1 ： 500)(1：1000)。可知洁净室内穿无菌衣人员的静态发菌量一般不超过300 个(min人)，动态发菌量一
8、般不超过1000 个(min人)。,我们的更衣流程,一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对而言，脚底是最脏的部分。脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生物。洗手一定要用洗手液和充足的流水。二更带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，洁净区内不能脱下口罩带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整的包裹头发。穿连体服：阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开连体服手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。75%的酒精能杀灭99%的微生物。二次更鞋：阻断一更、二更内沉降在地板上的颗粒和微生物。洁净区工作鞋不能穿出二更的鞋
9、箱外。,平时的卫生习惯,勤洗澡、洗头，勤换内衣去除皮屑、头屑等人体脱落物，保持体表洁净。勤剪头发工作时，头皮不容易出汗，易被纸发套全部包裹。勤剪手指甲指甲内能够藏污纳垢，有很多的致病微生物。勤换鞋准备两双鞋每天交替穿着，保证鞋内干燥无异味。,器具,清洗：最后淋洗用水:纯化水。清洗后按要求包装并有清洁标签，注明清洁日期、有效期至和清洗人储存有效期，混合器，7天；部件，包括不锈钢桶、Bar、筛网等，30天,消毒（disinfection）：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。灭菌（sterilization）：杀死物体上所有微生物的方法。包括杀灭细菌芽胞在内的全部病
10、原微生物和非病原微生物。抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。防腐（antisepsis）：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。无菌（asepsis）：不存在活的细菌。,消毒注意事项,消毒剂浓度合适，针对特定范围内的细菌选择相应的消毒剂消毒剂在一定周期内轮换使用，以防细菌耐药。我公司常用消毒剂为：0.2%新洁尔灭、75%酒精溶液紫外灯消毒时记录使用时间，紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低。国产紫外灯的平均寿命（点到70%额定功率的时间）一般为2000h，超过平均寿命时，就达不到预期效果，必须更换。我公司规定紫外灯使用时间为1000h。,热原与内毒素,许多细菌、病毒
11、和真菌（如酵母菌）都能产生热原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某些药物（类固醇）等。1、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要是脂多糖。 2、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一是保护性反应。3、其他理化特性耐热性：120加热4h，可破坏98%。180加热2h或250加热30min，才可彻底破坏。滤过性：其体积小，约在15nm之间，故能通过滤器进入滤液中。具有水溶性及不挥发性。能被强酸、强碱和氧化剂破坏,热原与内毒素,4、热源引入的途径 从溶剂中带进 从原料中带进 从容器、用具、管
12、道和装置等带进 制备过程中的污染 从输液器带入,热原与内毒素,5、消除细菌内毒素的方法 高温破坏法：可用180干烤34h或250干烤30min。 吸附法：一般选用活性炭。 蒸馏法：此法仅限于制备蒸馏水。 化学酸碱和氧化法。 离子交换法。 反渗透法。 凝胶过滤法。 超滤法,药品的微生物污染,药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品及生产环境带来不良影响。药品的微生物污染也称染菌。污染药品的细菌：常见污染药物制剂的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、
13、昆虫和其它啮齿动物、生产操作人员,消毒与灭菌,下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。,芽孢,芽孢是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新
14、转变成为营养态细胞； 一般的芽孢在普通的条件下可保存几年至几十年的生活力；世界上最古老的芽孢：2.5亿年；其对热力、干燥、辐射、化学消毒等理化因素有强大的抵抗力；杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。,消毒与灭菌,一、物理灭菌方法热力灭菌法辐射杀菌法滤过除菌法超声波杀菌法干燥与低温抑菌法,消毒与灭菌,热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。1、干热灭菌法采用灼烧或干热空气灭菌 ，使用方便，适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌 。2、湿热灭菌法利用热蒸汽杀死微生物。 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法 ，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微
15、生物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体 。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。,消毒与灭菌,辐射灭菌法 1、紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀 菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯距离照射物不超过1.0米为宜 2、电离辐射 高速电子、X射线、射线 3、微波 波长1mm1m,消毒与灭菌,滤过除菌法用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的。滤菌器含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。,消毒与灭菌,二、化学灭菌方法许多化学药物能影响微生物的化学组成、物理结构和生理活性，
16、从而发挥防腐、消毒及灭菌的作用。洁净室(区)应定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。,消毒与灭菌常用消毒剂种类和用途,卫生管理,1.了解污染源 对药品生产全过程可能造成污染的来源，进行深入的了解研究，从而设计一个完好的生产工艺，制定规章制度和标准操作规程，从各个环节采取消毒和卫生措施来防止微生物污染，使产品达到所要求的卫生学质量，包括稳定性及各种微生物参数。2.进行微生物监测 在药品生产过程中，应按GMP要求不断进行各项微生物卫生学监测。例如：对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测；对无菌设备清洁灭菌的验证；对非无菌药品进行细菌和活菌数测定
17、和病原菌的限制性检查等。,卫生管理,3.定期进行环境卫生清洁 严格按照“管理规程（生）管-3生产科环境卫生管理的有关规定”对生产科各个区域进行清洁卫生，确保生产区域符合GMP卫生管理要求。4.做好生产人员卫生管理新进人员的健康检查：药品生产企业在招收新职工时，一定要对新职工进行全面的健康检查，要确保新员工不患有急性或慢性传染病。建立生产人员健康档案：药品生产企业应对职工建立个人健康档案，直接接触药品的生产人员至少每年体检一次；患有传染病或体表有伤口者不得进入洁净室。 培养药品生产人员良好的个人卫生习惯 洁净区生产人员要求：进入洁净室必须更换洁净服；并按照规定程序进出洁净室；在洁净区生产操作动作要准、稳、轻、少，减少不必要的谈话和活动；生产人员应定期进行微生物基础知识培训和卫生教育。,谢谢大家！,
