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1、癌症基因检测靶向用药治疗检测靶点及检测意义,贺先生186.2031.2865专注癌症基因检测,肿瘤背景介绍,常见肿瘤在分子靶向治疗中的应用,化疗药物与生物标志物,1234,肿瘤个体化相关基因检测流程,目录,肿瘤背景介绍,常见肿瘤在分子靶向治疗中的应用,化疗药物与生物标志物,1234,肿瘤个体化相关基因检测流程,目录,全球癌症病例呈现迅猛增长态势； 2012年1400万人，逐年递增至2025年的1900万人， 到2035年达到2400万人； 新增病例近一半出现在亚洲，大部分在中国，中 国新增癌症病例高居第一位。,肿瘤数据,发病前十位恶性肿瘤数据,手术 放疗 化疗 靶向治疗,肿瘤的主要治疗方法,标
2、准化治疗,个体化治疗,精准医疗,（1）是与癌症发生发展相关的重要基因 （2）医学界的最新观点认为，每一种肿瘤背后都有一个“驱动基因”，它是导致基因突变、产生肿瘤的“元凶” （3）驱动基因决定了这个癌症的最主要的原因,驱动基因,作用靶点,常用靶向药物,铂类,ERCC1 mRNA，BRCA1 mRNAERCC1(118)、ERCC2(312)XRCC1(194/399)、GSTP1(105),顺铂卡铂,抗微管类,TUBB3 mRNA，STMN1 mRNA,紫杉醇长春瑞滨长春花碱多西他赛,氟尿嘧啶类,TYMS mRNA、TYMP mRNATYMS(3-/5-UTR)MTHFR(677/1298)、D
3、PYD(2A/5A/9A),培美曲塞,吉西他滨,RRM1 mRNA，RRM1(37),依托泊苷,TOP2A mRNA,伊立替康,UGT1A1(*6/*28),丝裂霉素,NQO1(465/609),基因表达/多态性检测能有效预测患者化疗的药物敏感性及毒副作用强弱!,常用化疗药物,分子导向的抗肿瘤药物有效率大大提高,Gleevec BCR-ABL 80% Iressa EGFR突变型 70% Vemurafenib BRAF突变型 50% Crizotinib EML4-ALK 50%,基因检测使药物有效率提高,肿瘤背景介绍,常见肿瘤在分子靶向治疗中的应用,化疗药物与生物标志物,1234,肿瘤个体
4、化相关基因检测流程,目录,1、肿瘤的辅助诊断、分子分型等（结合分子病理等）； 2、常见高发肿瘤的早期筛查； 3、癌症的风险评估；4、靶向药物个体化检测，如非小细胞肺癌EGFR TKI耐药相关；5、肿瘤的预后监测，如耐药性监测。,应用方向,肺 癌,小细胞肺癌 (SCLC 16.8%） 非小细胞肺癌（NSCLC 80.4%）,吸烟成肺癌主因,癌症的第一大杀手肺癌,Giaccone G, et al. 2013 ASCO Abstract 7513. Aisner DL, et al. 2014 ASCO Abstract 11030.,呈现人种差异,NSCLC驱动基因突变谱,EGFR（表皮生长因子
5、受体）属于受体酪氨酸激酶（TKI）家族，至少与33%50%的人类表皮肿瘤相关,是表皮肿瘤治疗的重要靶点。EGF诱导EGFR胞外域进行构象变化,通过二聚化/寡聚化解除胞外域对胞内域激酶活性形成的抑制作用,促使胞内域相互作用形成激酶活性并完成胞内域酪氨酸残基的磷酸化，从而启动信号转导通路。,表皮生长因子受体（EGFR）,EGFR基因突变状态是EGFR酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗晚期NSCLC最重要的疗效预测因子,EGFR信号通路及靶向治疗机制,Nature Review 2007, 7:169,非小细胞肺癌中药物敏感相关的EGFR突变,ASCO2011指南：考虑用EGFR TKI进行一线
6、治疗的非小细胞肺癌患者应该进行肿瘤EGFR突变检测来确定适合一线使用EGFR TKI还是一线使用化疗药物治疗。,ESMO2012指南：进行个体化治疗决定前应有足够的组织材料进行组织学诊断和分子检测在疾病进展时应考虑重新检测应当系统分析EGFR突变状态在晚期非鳞非小细胞肺癌患者组织中进行标准检测,NCCN2014指南：对晚期非鳞NSCLC及不吸烟/小标本鳞癌的治疗强调了治疗前必须检测EGFR/ALK，并指出 “多重/下一代测序项目应该包含这2个靶点的检测”,指导临床基因检测,NCCN更新很快,EGFR突变和TKI疗效显著相关，尤其是19外显子缺失突变，21外显子突变（L858R、L861），和1
7、8外显子突变（G719X、G719）20外显子插入突变可能与TKI耐药相关TKI治疗耐药与KRAS突变及特定的获得性EGFR（T790M）有关,EGFR突变类型与EGFR-TKI疗效关系,主要用于非小细胞肺癌（NSCLC）,FDA要求对拟采用易瑞沙、特罗凯等EGFR-TKI治疗的患者，进行EGFR基因突变检测,EGFR-TKI,Dacic S. Adv Anat Pathol 2008; 15:241-247.Riely GJ, et al. Clin Cancer Res 2006; 12(24):7232-7241.Murray S, et al. J Thorac Oncol 2008;
8、 3:832-839.,外显子19，21突变为药物敏感突变类型,EGFR突变较易发生于亚洲人、女性、腺癌、不吸烟患者。最有效的是E19/E21突变，占总突变90%，E20为耐药突变。肺腺癌患者EGFR突变阳性率在高加索人约10%，在亚裔和我国均为50%左右EGFR突变患者使用吉非替尼反应率可达到71.2%，而野生型患者只有1.1%。EGFR野生型患者使用吉非替尼死亡风险增加185%。,EGFR基因检测,非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识，中华医学杂志，2015，95（46）：3721-3726,NSCLC患者EGFR检测流程,间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphom
9、a kinase，ALK)是靶向治疗的主要靶标。亚洲肺癌患者ALK重排阳性率约3%-13%EML4-ALK主要存在于腺癌中、轻度吸烟、年轻男性亚洲人、33%非EGFR、KRAS突变的NSCLC患者出现EML4-ALK突变,ALK信号通路,Sasaki T et al.Eur J Cancer.2010;46:1773-80.,ALK融合基因,NCCN临床实践指南（非小细胞肺癌）推荐在使用靶向药前对 ALK（融合基因） 进行检测。,NCCN临床实践指南,EML4-ALK主要存在于腺癌中、轻度吸烟、年轻男性亚洲人、33%非EGFR、KRAS突变的NSCLC患者出现EML4-ALK突变，排他性强。E
10、ML4-ALK融合阳性NSCLC独立于EGFR、KRAS突变，中国阳性率为3%-11%；EML4-ALK阳性者并不能从EGFR-TKI靶向治疗中获益。EGFR突变与EML4-ALK融合互斥，大多数情况不同时发生克唑替尼对EML4-ALK突变型晚期NSCLC患者的疾病控制率可达90%，ALK阳性者可以从克唑替尼的治疗中获得最大化的生存效益。,ALK融合基因检测,当临床检测ALK阴性时，建议检测ROS融合基因和c-Met基因扩增，可预测克唑替尼的疗效大量临床实验结果表明，对于EML4-ALK基因融合阳性（ALK+）或ROS1基因融合（ROS+）或C-MET基因扩增阳性（MET+）的非小细胞肺癌患者
11、可显著的从克唑替尼（Crizotinib）及色瑞替尼（Ceritinib）的治疗中获益FDA在药物生物标记物标签中明确要求，使用克唑替尼及色瑞替尼进行非小细胞肺癌治疗之前，应对患者ALK及ROS1基因融合状态进行检测,Luc Friboulet,Nanxin,et al.Cancer Discovery,2014,4:662-673Marco Gerlinger,Larry Norton,et al.N Engl J Med,2013,369:1172-73,ROS/c-Met基因检测,KRAS/BRAF/PIK3CA基因，发生突变患者使用EGFR单抗类药物治疗无获益KRAS基因，发生突变患者
12、对顺铂+长春瑞滨的联合化疗无获益；且预后较差,关于互斥性 EGFR突变与KRAS突变互斥，同时突变的发生率1%,KRAS/BRAF/PIK3CA,结直肠癌,结直肠癌检测靶点,结直肠癌,确定为复发或转移性结直肠癌时，推荐检测RAS、BRAF基因状态所有转移性结直肠癌患者都应检测KRAS基因状态；只有KRAS野生型患者才建议接受EGFR抑制剂如西妥昔单抗（Cetuximab）和帕尼单抗（panitumumab）的治疗一些KRAS/NRAS野生型的患者同样无法受益于靶向药物，野生型BRAF对爱必妥/帕尼单抗的有效性是必须的。结直肠癌大约有5-9%的患者发生BRAF突变。EGFR不推荐作为常规检查项目
13、,NCCN结直肠癌临床实践指南2015结直肠癌诊疗指南（2015版）结直肠癌KRAS基因突变检测专家共识.中华病理学杂志,2012年;9:635-636.,临床意义,K-RAS信号通路,K-RAS基因属Ras基因家族，正常时能调控细胞生长路径；异常时，导致细胞持续生长。K-RAS蛋白是EGFR信号传导中关键下游调节因子。K-RAS基因突变使结直肠癌患者对西妥昔单抗治疗产生耐药性。,K-RAS信号通路,Hiroshi Soeda,Hideki Shimodaira,et al.Int J Clin Oncol,2013,18:670-677,K-RAS基因野生型，西妥昔单抗治疗中获益,De Ro
14、ock W et al.Lancer Oncol.2010;11:753-762.,K-RAS常发生密码子12、13、61的突变，其中以12密码子GGT GTT最常见NCCN临床指南推荐：接受西妥昔单抗治疗前，进行K-RAS基因突变检测，可确定患者是否适合接受靶向治疗研究表明KRAS第12、13、61密码子和NRAS第61密码子的突变与西妥昔单抗、帕尼单抗及EGFR-TKIs的耐药有关,K-RAS基因检测,B-RAF基因在EGFR信号通路中于K-RAS下游的基因，编码MAPK通路中丝氨酸苏氨酸蛋白激酶，参与细胞周期调控。,B-RAF是MAPK的最强激活剂，40多种突变，15外显子1799T/A
15、（V600E）最常见；多见于黑色素瘤（突变率40-60%）、结直肠癌、甲状腺乳头状癌、NSCLC（突变率0.5-4.9%，女性、肺腺癌患者）,Xing M, et al.JAMA 2013; 309: 1493-501.,B-RAF,胃肠道间质瘤,胃肠道间质瘤检测靶点,胃肠道间质瘤,胃肠道间质瘤,KIT的突变类型有4种，外显子9（8%），外显子11（65%），外显子13（1%），外显子17（1%）PDGFR的突变发生在没有KIT突变的肿瘤中，有三种突变类型外显子12（2%），外显子14（1%），外显子18（8%）,Mark Linch,Jeroen Claus,et al.Onco Targe
16、ts and Therapy,2013,6:1011-1023Yun Zhu ,Int J Clin Exp Pathol,2014,7(7):4280-4285,GIST的致癌基因,C-KIT、PDGFR突变可预测伊马替尼疗效，C-KIT11外显子突变这疗效最佳6585%胃肠道间质瘤患者都有C-KIT第9、11外显子突变，优先检测对GIST患者的C-KIT检测至少要包括第9、11、13、17外显子及PDGFR第12、14外显子对于继发性耐药GIST患者，宜增加C-KIT14、18外显子检测PDGFR18（D842V及D846V）突变的GIST患者对伊马替尼、舒尼替尼原发性耐药,NCCN临床实
17、践指导2015年版Yun Zhu ,Int J Clin Exp Pathol,2014,7(7):4280-4285Mark Linch,Jeroen Claus,et al.Onco Targets and Therapy,2013,6:1011-1023,GIST的致癌基因,除了C-KIT和PDGFR外，还有多种基因异常导致GIST发生，这些占了15%左右，如HRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF等曾有报道，在一些无KIT及PDGFR突变在高危小肠GIST检测出BRAF外显子15突变（V600E）,Agaram NP,Wong GC,et al. Genes Chromosomes
18、Cancer 2008;47:853-859Agaimy A,Tenrracciano,et al. J Clin Pathol 2009;62:613-616,其他致癌基因,乳腺癌,乳腺癌检测靶点,乳腺癌驱动基因,研究发现，人表皮生长因子受体2（HER2）基因与乳腺癌、胃癌的发生发展密切相关。25%-30%乳腺癌患者存在HER基因扩增，20%胃癌患者存在HER扩增,JT Jorgensen et al. Oncology 2010;78:26-33. Shaheenah Dawood et al. JCO,2010; 28:92-98.,HER2,HER2是乳腺癌明确的预后指标，用于确认患者
19、是否受益于赫赛汀（曲妥珠单抗）和帕妥珠单抗,Mass R,Press MF,et al.Clinical Breast Cancer 6:240-246,2005,乳腺癌靶向药,研究表明，HER2扩增的乳腺癌患者可以从曲妥珠单抗治疗中获益，而未扩增的患者疗效不明显。大量临床研究表明：HER2 mRNA的表达水平与赫赛汀疗效相关，在晚期（转移性）乳腺癌的临床研究中发现，HER-2mRNA过表达的患者在接受赫赛汀治疗时有较长的无疾病进展生存时间。,Nigel Fleeman,Adrian Bagust,et al.Pharmaco Economics,2014,DOI 10.1007Drew R
20、Oostra,Erin R Macrae,et al.Breast Cancer:targests and Therapy,2014,6:103-113,乳腺癌靶向药,NCCN指南中明确指出：乳腺癌患者接受靶向药物曲妥珠单抗治疗前，必须进行HER2基因扩增检测，根据检测结果决定是否应用药物,NCCN 2015乳腺癌临床实践指南,NCCN指南,Gravalos C, Jimeno A. Ann Oncol 2008;19:1523-1529NCCN 2015胃癌临床实践指南,NCCN指南中明确指出：推荐曲妥珠单抗作为转移性胃癌一线及二线药物，且胃癌患者接受治疗前，必须进行HER2基因扩增检测，根
21、据检测结果进行靶向治疗,NCCN指南,1.指出HER2与临床病理特征有关，但不足以独立作为判断胃癌患者预后的标志物；再次强调HER2是胃癌曲妥珠单抗治疗的预测因子。2.更新了其他抗HER-2药物在HER-2+胃癌的试验数据。3.补充曲妥珠单抗一线治疗的新证据。4.所有病理确诊胃癌患者均需接受HER2检测。5.对复发/转移且初次评估HER-2阴性的患者，应考虑再次检测HER-2状态。,基于ToGA数据结果显示，约16.6%的胃癌患者为HER2阳性，这相当于每6名胃癌患者中，就有1名HER2阳性胃癌患者。,中国专家共识-胃癌抗HER2共识更新要点,IHC检测,乳腺癌HER2检测指南（2009版）,
22、Her2检测标准流程,New Findings May Improve Treament Of Inherited Breast Cancer,Science Daily.Oct.11,2008,遗传性乳腺癌,遗传性乳腺癌,BRCA1/2突变相关的癌症：终身风险,遗传性乳腺癌（BRCA1/2基因突变）,大量研究发现女性若携带BRCA1基因突变会导致在70岁前患乳腺癌的累计风险高达80。同时伴有40 患卵巢癌的风险，是普通人风险的10倍左右 。BRCA1突变率在不同国家、不同人种中差异显著。俄罗斯为79，意大利为29 美国25，德国、荷兰以及日本均小于20，中国为10,Science,2003,
23、302(24):643-646Hall M J，Reid J E，Burbidge L A，et alCancer，2009，115(10)：2222-2233Gerhardus A，Schleberger H，et alEuropean Joumal of Human Genetics，2007，15(6)：619-627,BRCA1/2突变携带者患病风险,筛查乳腺癌高危因素、易感基因以及明确乳腺癌发病机制对早期发现乳腺癌、改善患者预后、减轻患者家庭负担均具有重要价值,临床意义,肿瘤背景介绍,常见肿瘤在分子靶向治疗中的应用,化疗药物与生物标志物,12345,肿瘤个体化相关基因检测流程,案例分
24、享,目录,铂 类 药 物,铂类药物是最常用的肿瘤化疗药物之一，包括顺铂、卡铂、和奥沙利铂等。大量临床试验结果表明：铂类药物的疗效与ERCC1、BRCA1 mRNA基因表达水平呈现负相关，反之，对于基因高表达患者表现耐药。ERCC1、BRCA1基因低表达水平的非小细胞肺癌、结直肠癌、胃癌等患者对铂类药物的治疗较为敏感。,铂类药物与ERCC1、BRCA1 mRNA表达,ERCC1在所有的肿瘤细胞中都存在表达，而且表达水平差异很大临床研究已证实ERCC1参与铂类药物耐药的发生，其表达水平与多种肿瘤铂类药物化疗的疗效和生存期呈负相关美国NCCN临床实践指南（第二版，2010）中明确指出：在接受铂类药物
25、化疗前进行ERCC1基因水平的表达检测,对非小细胞肺癌患者进行的研究结果表示：ERCC1低表达患者使用铂类药物效果明显优于ERCC1高表达患者。,Bepler G et al.J Clin Oncol.2006; 24:4731-7Lord RV et al.Clin Cancer Res.2002; 8(7): 2286-91Olaussen KA et al.N Engl J Med.2006; 355(10): 983-91NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology for NSCLC.V2.2010,铂类药物与ERCC1、BRCA1 mR
26、NA表达,临床研究表明：铂类药物的疗效与肿瘤组织中BRCA1基因mRNA表达水平密切相关BRCA1基因表达水平低的患者对铂类药物敏感，反之表达水平高的患者表现耐药。,对卵巢癌患者进行研究结果：BRCA1 mRNA的表达水平与铂类药物的疗效相关。与BRCA1 mRNA高表达患者相比，低表达的患者在接受铂类化疗后生存延长。,TARONM, ROSELL R, FELIP E,et al.Hum MolGenet, 2004, 13(20): 2443-2449.KENNEDY R D, QUINN JE, MULLAN P B,et al.NatlCancerInst, 2004, 96(22):
27、 1659-1668,铂类药物与ERCC1、BRCA1 mRNA表达,大量临床案例表明，铂类药物的疗效和副作用存在显著的个体化差异，而患者自身遗传特征的不同是造成药物疗效及副作用存在巨大差异的主要原因之一。其中患者遗传特征主要涉及DNA修复相关基因和解毒酶相关基因的多态性（SNP）。根据大量科学研究报道，发生突变的核酸切除修复基因（ERCC1、ERCC2、XRCC1）数量与铂类药物的疗效呈负相关。,铂类药物与ERCC1、ERCC2、XRCC1、GSTP1基因多态性,ERCC1 Asp118Asn（C/T）基因多态性影响ERCC1表达水平，CC型患者对铂类药物化疗反应优于CT/TT型，生存期长。
28、ERCC2（XPD）Asp312Asn（G/ A ）基因多态性影响编码蛋白修复损伤DNA能力。GG型更易形成铂类-DNA结合物，更敏感。XRCC1 194编码区突变型患者化疗有效率高于野生型C/C，399位点G/G野生型患者治疗有效率高于突变型G/A或A/A。GSTP1 Ile105Val（A/G）基因多态性影响GSTP1酶的活性，携带105Val会导致GSTP1酶活性降低，铂类药物不易排泄而药效增强。,Wei Z et al. Clin Cancer Res. 2004;10:4939-43 David JP et al. Cancer Res. 2001;61:8654-8Sarada G
29、 et al. J Clin Oncol. 2004;22:2594-601 Baorui L et al. Eur J Hum Genet. 2007;15:1049-53,铂类药物与ERCC1、ERCC2、XRCC1、GSTP1基因多态性,ERCC1 CC型非小细胞肺癌患者对铂类药物化疗反应优于CT/TT型，生存期长（9.16months/5.53months),GSTP1 GG/GA型非小细胞肺癌患者对铂类药物化疗反应优于AA型，生存期长（9.16months/5.53months),Hongying Lv,Ting Han,et al.Med Oncol,2014,31(86):81-
30、87,铂类药物与ERCC1、ERCC2、XRCC1、GSTP1基因多态性,抗代谢类药物,氟类药物是最经典的临床抗代谢类药物，包括5-氟尿嘧啶（5-Fu）、替加氟、卡莫氟、氟脲苷、脱氧氟脲苷及卡培他滨、培美曲塞等,抗代谢类药物与TYMS、TYMP mRNA表达,大量临床试验结果表明：TYMS、TYMP mRNA表达水平的高低与氟尿嘧啶抗代谢类药物的化疗敏感性相关。TYMS mRNA低表达水平的非小细胞肺癌、结直肠癌患者接受卡培他滨等氟类药物治疗的效果更佳，中位生存期更长。TYMP mRNA高表达水平的乳腺癌、卵巢癌、胃癌等患者则更易受益于卡培他滨、培美曲塞等氟类药物的治疗另外，TYMP在肿瘤组织
31、中的表达水平与患者预后直接相关，TYMP低表达水平的患者其预后明显好于高表达水平的患者。,R. Song et al. Ann Oncol. 2008; 19: 915-919 Roshawn G Watson et al. J EJC. 2010; 46(18): 3358-3364K Hata et al. British Journal of Cancer. 1999; 79(11-12): 1848-54 Dennis Salonga et al. Clin Cancer Res. 2000; 6: 1322-27,抗代谢类药物与TYMS、TYMP mRNA表达,对结直肠癌患者进行的临
32、床研究结果显示：TYMS mRNA表达水平与含5-FU化疗方案的疗效相关。TYMS低表达患者治疗的疗效显著优于TYMS高表达患者。,R. Song et al. Ann Oncol. 2008; 19: 915-919 Roshawn G Watson et al. J EJC. 2010; 46(18): 3358-3364,抗代谢类药物与TYMS、TYMP mRNA表达,大量临床案例表明，抗代谢类药物的疗效和副作用存在显著的个体化差异，患者遗传基因的多态性（SNP）是主要原因之一。,Maring J G, et al. British journal of cancer. 2002;86:
33、 1028-1033Cho H J, et al. Therapeutic drug monitoring. 2007;29: 190-196Lecomte T, et al. Clin Cancer Res. 2004;10: 5880-5888Schwab M, et al. J Clin Oncol. 2008 May 1;26(13): 2131-8Yawata A, et al. Cancer chemotherapy and pharmacology. 2005;56: 465-472,抗代谢类药物与TYMS、DPYD、MTHFR基因多态性,TYMS基因3和5-UTR区的基因多态性
34、影响结直肠癌等患者接受氟类药物治疗的有效率，3R/3R更易产生耐药。DPYD基因2A、5A、9A突变将降低DPYD酶的活性，药物疗效增强，但是毒副作用也加大MTHFR基因第677位碱基的CT突变可以导致酶活性显著下降，从而增加对5-FU的敏感性。,A Loganayagam,M Arenas Hernandez,et al.British Journal of Cancer,2013,108:2505-15,抗代谢类药物与TYMS、DPYD、MTHFR基因多态性,吉 西 他 滨,吉西他滨(GEM)是脱氧胞嘧啶核苷同系物，属细胞周期特异性抗代谢类化疗药，主要作用于S期（DNA合成期）的肿瘤细胞，
35、同时也阻断细胞周期由G1期（DNA合成前期）向S期过渡。,吉西他滨与RRM1 mRNA表达,NCCN临床实践指南（第二版，2015）中指出：非小细胞肺癌患者RRM1表达与吉西他滨疗效密切相关，在用药前应进行RRM1基因表达水平的检测。患者RRM1表达水平与吉西他滨疗效相关，RRM1 mRNA低表达的非小细胞肺癌患者，吉西他滨治疗效果较好，中位生存期长,H Sasaki,Y Murakami,et al.British Journal of Cancer,2014,399:1-10NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology for NSCLC.V2
36、.2015,吉西他滨与RRM1 mRNA表达,对非小细胞肺癌患者的临床研究结果显示：RRM1 mRNA表达水平与含吉西他滨化疗方案的疗效相关（r=-0.498，P=0.002）。图中红色点表示肿瘤缩小30%（疾病部分或完全缓解）,J Clin Oncol. 2010,28:160,吉西他滨与RRM1 mRNA表达,Padovani L .J Clin Oncol. 2008,26:S14652. Xu D, Appl Environ Microbiol.2010 Oct 8,大量临床试验结果表明，患者RRM1 mRNA表达水平与吉西他滨疗效密切相关。RRM1 mRNA低表达的非小细胞肺癌、乳腺
37、癌、胰腺癌、胆管癌等患者明显受益于以吉西他滨为基础的化疗方案，并且中位生存期较长，预后较好。,RRM1（C37A）位点的基因多态性在不同的种族具有差异性，非裔美洲人的AA基因型频率约为13%，中国人的AA基因型频率约为30%，与朝鲜人相似（27%）,Radoslaw Mlak,Pawel Krawczyk,et al.Oncology Reports,2013,30:2385-98,吉西他滨与RRM1基因多态性,临床试验结果表明，在大量NSCLC患者中，RRM1（C37A）位点携带突变杂合AC基因型的患者在接受以吉西他滨为基础的化疗后疾病进展时间（TTP）和总生存时间（OS）均相对优于突变纯合
38、CC基因型患者。,Radoslaw Mlak,Pawel Krawczyk,et al.Oncology Reports,2013,30:2385-98,吉西他滨与RRM1基因多态性,抗微血管类药物,临床常用的康微血管类药物主要有：紫杉醇、多西他赛、长春花碱、长春新碱和长春瑞滨等。多种肿瘤细胞系的研究及大量临床试验结果均显示TUBB3 、STMN1 mRNA的表达水平与抗微管类药物的疗效密切相关。,Pascal S and Charles D. Lancet Oncol. 2008; 9:169-175Pascal S et al. Mol Cancer Ther. 2005; 4:2001-
39、2007Pascal S et al. Clin Cancer Res. 2005; 11:5481-5486 Rafeal R et al. Oncogene. 2003; 22:3548-3553,抗微血管类药物与TUBB3、SYMN1 mRNA表达,对非小细胞肺癌患者的临床研究显示：TUBB3 mRNA表达水平与含微管类化疗方案的疗效相关。TUBB3低表达患者无进展生存率和总生存率显著优于高表达患者。,对非小细胞肺癌患者的临床研究显示：STMN1 mRNA表达水平与抗微血管类药物治疗疗效有关，低表达患者生存率显著优于高表达者。,Pascal S and Charles D. Lancet
40、 Oncol. 2008; 9:169-175胡俊等，临床研究，2012,50（25）：38-41,TUBB3低表达非小细胞肺癌、胃癌等患者接受紫杉醇类或长春碱类化疗的效果较好，中位生存期较长。而TUBB3高表达的患者的抗微管类化疗疗效较差。STMN1 低表达的肿瘤患者接受长春瑞滨/顺铂治疗的效果较好，中位生存期较长，反之，STMN1 高表达的患者接受长春瑞滨/顺铂的疗效较差。而且，STMN1 在肿瘤中mRNA 的表达水平与患者预后直接相关，STMN1的表达水平越高，肿瘤发生转移的风险越高。,Jun-Eul Hwang,Ji-Yun Hong,et al.BMC Cancer,2013,13:
41、431-39T Hemdan,M Linden,et al.British Journal of Cancer,2014,427:1-8,抗微血管类药物与TUBB3、SYMN1 mRNA表达,依 托 泊 苷,依托泊苷是DNA拓扑异构酶2(Topo)抑制剂，主要用于治疗小细胞肺癌、恶性淋巴瘤、恶性生殖细胞瘤和白血病，对神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、卵巢癌、NSCLC、胃癌和食管癌等也有一定疗效。,依托泊苷与TOP2A mRNA表达,临床证据表明，Topo酶活性降低或表达水平低都会造成Topo抑制剂的耐药；TOP2A表达水平高的患者使用依托泊苷效果较好，表达水平低的患者对依托泊苷药物耐药。,Niki
42、Karachaliou,Chara Papadaki,et al.Plos One,2013,8(9):1-9Ming Geng,Lin wang,et al.Diagnostic Pathology,2013,8:198-203,对晚期乳腺癌患者的临床研究结果显示：在接受含依托泊苷化疗方案治疗的患者中，TOP2A mRNA在药物反应率高患者的表达水平要高于那些疾病稳定与进展的患者。,依托泊苷与TOP2A mRNA表达,伊 立 替 康,伊立替康（irinotecan）是DNA拓扑异构酶I抑制剂，能诱导单链DNA损伤，引起DNA双链断裂，导致细胞死亡。伊立替康主要用于治疗成人晚期/转移性大肠癌，
43、对小细胞和非小细胞肺癌、宫颈癌和卵巢癌均有疗效。,伊立替康与UGT1A1基因多态性,UGT1A1*6突变频率在东亚人群中(日本、韩国和中国)约为13，而在白人和非洲人中没有发现这一突变。多个亚洲人群的临床研究结果都证明UGT1A1*6和*28突变与伊立替康的毒副作用风险增加显著相关；UGT1A1*28、UGT1A1*28*6与UGT1A1*6基因型患者的毒副作用风险相近。,携带UGT1A1突变型的患者接受伊立替康治疗后有超过50%出现严重毒副作用，而携带野生型的患者只有约10%产生毒副作用；并且突变型患者比野生型患者更早出现副作用,Ct J.F. et al. Clin Cancer Res.
44、 2007;13:3269-75 Liu CY et al Clin Cancer.2008;112(9):1932-40Jada SR. et al. Cancer Sci. 2007; 98: 1461-7,伊立替康与UGT1A1基因多态性,甲 氨 蝶 呤,甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）是叶酸拮抗剂，能抑制亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR），主要用于各型急性白血病、乳腺癌、肺癌等疾病治疗。但在治疗过程中患者常出现不良反应，包括胃肠道反应、骨髓移植和肝功能损害等。,甲氨蝶呤与MTHFR基因多态性,研究发现M
45、THFR基因第677位碱基的CT突变显著增加MTX的毒副作用,VeliaDAngelo,MariaRamaglia,et al.Leukemla&Lymphoma,2013,54(12):2639-44,甲氨蝶呤与MTHFR基因多态性,研究结果表明，MTHFR基因A1298C位点的基因多态性与甲氨蝶呤的疗效及毒副作用密切相关。,目前研究，存在MTHFR C677T、MTHFR A1298C 等基因型，以上位点多态性与多种疾病相关：（1）妇幼保健类：神经管缺陷、先天性心脏病、唇腭裂、妊娠期高血压疾病，自发性流产；（2）肿瘤类：肺癌、胃癌、大肠癌等；（3）高血压、冠心病、脑梗塞、脑溢血；（4）精神
46、类疾病。,Song, C., et al. 2001. 61(8): p. 3272-5Boccia, S. et al. Am J Epidemiol, 2008. 167(5): p. 50Miao, X. et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2,甲氨蝶呤与MTHFR基因多态性,替 莫 唑 胺,替莫唑胺（temozolomide,TMZ）是一种口服二代烷化剂，是恶性脑胶质瘤术后辅助治疗的药物，可改善脑胶质瘤患者的生存质量。其抗癌机制复杂，主要包括DNA甲基化等过程，最终导致DNA断链及细胞凋亡。,替莫唑胺与MGMT甲基化,大量临床试验结果表明，
47、MGMT 发生甲基化的脑胶质瘤患者更易从替莫唑胺的治疗中收益。,肿瘤背景介绍,常见肿瘤在分子靶向治疗中的应用,化疗药物与生物标志物,1234,肿瘤个体化相关基因检测流程,目录,鑫诺美迪公司及产品介绍,背景介绍,常见肿瘤在分子靶向治疗中的应用,化疗药物与生物标志物,12345,肿瘤个体化相关基因检测流程,内容,标本送检途径,样本采集,DNA质控,DNA提取,病理评估,分子诊断,结果报告,合适的标本类型足够的标本重量可靠的标本质量,明确的病理诊断标本的再次质控检测项目的确定,优质的提取试剂规范的提取操作标准的提取流程,专业的报告解析人员质控结果判读标准诊断结果判断出具分子诊断报告报告分析及临床解读
48、,合适的分子诊断技术科学的检测仪器硬件优质的分子诊断试剂标准的实验室环境训练有素的诊断人员故障及问题解决机制,超微紫外分光光度计1.8A260/A2802.0A260/A2302.0浓度50ng/ul体积20ul,标本检测流程,mRNA表达，靶向检测，C-MET；25mg（大于米粒大小23粒）；70%肿瘤细胞含量且不少于100个肿瘤细胞；10%中性福尔马林固定液固定（立即送检时可用无水乙醇保存）；避免癌旁及正常组织。,靶向检测、mRNA表达，c-met；1年内且切片面积50mm2（成人拇指盖大小）；10张厚度为5um切片或5张厚度为10um切片；70%肿瘤细胞含量且不少于100个肿瘤细胞；10
49、%中性福尔马林固定且未经染色；不同标本切片需要更换新刀片，避免交叉污染。,化疗SNP；2ml（用EDTA或枸橼酸盐抗凝）；严禁使用肝素抗凝剂；采集后28保存，24小时内提取效果最佳；避免溶血、凝血及漏液。,新鲜冰冻组织（含穿刺活检）,石蜡包埋组织,血液标本,标本选择,Different tissue types from NSCLC,NSCLC检测标本组成,循环肿瘤DNA(ctDNA)示意图,体血液循环系统中不断流动的携带一定特征（包括变，缺失，插入，重排，拷贝数异常，甲基化等）来自肿瘤基因组的DNA片段；是拥有广泛应用前景的一类肿瘤标志物来源：来自于坏死的肿瘤细胞； 来自于凋亡的肿瘤细胞；
50、循环肿瘤细胞； 来自于肿瘤细胞分泌癿外排体； 含量低，约占整个循环DNA的1%，甚至只有0.01%。 可无创用于肿瘤早期诊断、发展过程监测、预后判断及个性化用药指导。,循环肿瘤 DNA（ ctDNA）-液态活检,血浆中ctDNA的含量不预后密切相关，含量越高，病人的5年生存率越低（P0.001） ctDNA含量的增高及CTC数目的增加，病人的预后显著发差对肝癌的诊断具有较高的灵敏性和特异性，分别达80%和94%,循环肿瘤 DNA（ ctDNA）,液态活检检测标准流程,开展ctDNA检测的关键,Swinkels et al., Clinical Chemistry 2013; 49; 525-5
