《高三生物复习》二轮复习课件.ppt

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1、选修1 生物技术实践,细菌培养基LB（Luria-Bertani)液体培养基,一、 培养基,LB固体培养基需加琼脂1克,1、培养基的配制原则,(1)目的要明确 根据种类、目的配制(2)营养要协调 (3)pH要适宜 如细菌：pH6.57.5 真菌(如霉菌)：pH5.06.0,2、细菌培养基的制备：,培养基的配制,灭菌,搁置斜面,称量,溶化,调pH,分装,加棉塞,包扎,什么叫灭菌？什么叫消毒？为什么要灭菌？,若混有杂菌，将与菌种形成竞争关系，影响菌种的生长或不能分离到所需的微生物。,灭菌是指用物理或化学方法，杀死一定环境中所有微生物的细胞、芽孢和孢子的方法。,二、 灭菌操作,消毒是指用物理或化学方

2、法，杀死病原菌的方法。,在培养微生物时必须进行无菌操作,无菌操作的要求: (1)各种器皿必须是无菌的 (2)各种培养基必须是无菌 (3)转移操作及其它环境也应是无菌的,灭菌的方法,(1)干热灭菌(火焰灼烧)(2)高压蒸汽灭菌(在 1kg/cm2压力的高压蒸气锅中(121)灭菌15min。)(3)过滤灭菌法（G6玻璃砂漏斗）(4)紫外光灭菌法(5)化学药剂灭菌法（如70%75%酒精等）,实验操作前，实验用具放在超净台上，以紫外灯和过滤风灭菌30min。,如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，可在90以上(500g/cm2压力)的高压蒸气锅中灭菌30min。 有些不能加热灭菌的化合物，如尿素

3、，可用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌。,灭菌或消毒对象接种环等金属或某些玻璃用具手培养基试管、培养皿、三角瓶等超净台,灭菌或消毒方法火焰灼烧70%75%酒精高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌紫外光和过滤风,三、 细菌的分离,1、划线分离法,方法：用烧红后冷却的接种环蘸取带菌的培养物，在固体培养基的平板上划线。,分离划线法,连续划线法,2、涂布分离法,方法：将培养的菌液稀释，通常稀释10-510-7倍。取0.1mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基的平面上，然后进行培养。在某个稀释度下，可培养得到相互分开的菌落，通常以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。,划线分离法：方法简单

4、。涂布分离法：单菌落更易分开，但操作复杂些。,单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。,实验1 大肠杆菌的培养和分离,一、实验内容 1、用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。 2、在固体平面培养基上划线进行分离。,大肠杆菌和革兰氏染色,大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。,二、设备及用品 灭菌锅、三角瓶、封口膜和橡皮圈（或棉塞）、培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性手套、酒精棉球、镊子、有棉塞的试管等。,三、实验材料 1、LB培养基（液体和固体） 2、大肠杆菌菌种斜面 3、空白斜面,将装有LB液体和固体培养基的三角瓶，

5、加上封口膜（或棉塞）。将培养皿用牛皮纸包好，一起放入高压灭菌锅内，1kg/cm2压力（121），灭菌15min,四、实验步骤,1、为什么用棉塞而不用橡皮塞？,棉塞（封口膜）能防止杂菌污染，又保证通气良好。,2、高压蒸汽灭菌以前，为什么要将灭菌锅内的冷空气排尽？,3、灭菌完毕后，如果压力未降至零，就打开气阀，会出现什么现象？为什么？,如果灭菌锅内的冷空气没有排尽，当压力上升至98kPa（1kg/cm2压力）时，锅内的温度就不会上升到应有的高度（121），导致灭菌不彻底。,如果压力未降到零就打开气阀，试管内的培养基就会冲出管口。这是因为高压蒸气灭菌锅内外压力不平衡的缘故。,4、固体培养基冷却至60

6、左右才能用来倒平板。用什么方法来估计培养基的温度？,用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉有些热又不烫手时。,5、为什么需使锥形瓶瓶口通过火焰？,通过烧灼灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,将三角瓶内的固体培养基倒入培养皿中，使之置于水平位置，并轻轻晃动，使培养基铺满底部，凝固后即可形成平面。,6、接种操作为什么要在火焰旁进行？,空气中存在有大量的微生物，而接种灯的火焰旁能形成一个无菌的区域，在这里操作，可以避免杂菌的污染。,在酒精灯火焰旁，用灭菌的接种环将菌种接种到三角瓶内的液体培养基中，37摇床振荡培养12h。,7、如何使接种环冷却后再挑取菌体？为什么要冷却？,让环先接触培养基上未长菌的部位，使

7、环冷却。,以免接种环温度太高,杀死菌种。,在酒精灯火焰旁，用灭菌的接种环蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，将培养皿倒置，37恒温培养箱中培养24h。,8、为什么在操作的第一步要灼烧接种环？,为了避免接种环上可能存在的微生物造成污染。,9、若用分离划线的方法，为什么每次划线前都要灼烧接种环？,及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。,10、为什么在划线操作结束时仍需灼烧接种环？,为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使一次划线时，接种环上的菌种直接来自上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目减少，以便得到单菌落。,11、进行恒温培养时为什么要

8、将培养皿倒置?,恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸汽的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸汽所凝结的水滴留在盖上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。,12、接种斜面画线时要注意什么？,(1)由里向外画，(2)线条要细且密；(3)不要重复划线，(4)不要画破培养基，不要接触到管壁或管口。,13、在什么条件下培养细菌？,恒温箱中，在37 下培养24小时。,在酒精灯火焰旁，将单菌落用灭菌的接种环取出，用划线法接种在斜面上，37恒温培养箱中培养24h后,置于4 冰箱中保存。,14、如何操作才可以尽量避免被杂

9、菌污染?,(1)胆大心细，操作快捷。(2)注意灭菌原则，灭菌彻底，降低环境污染几率，手和实验服要清洁，减少操作时间。(3)注意微生物生长条件，如pH、渗透压、温度等。,15、培养后如何判断是否有杂菌污染?,(1)从菌落形态看：细菌菌落：表面一般光滑而湿润，有黏稠性，多数透明或半透明。放线菌菌落：表面是紧密的绒状、坚实多皱，长孢子后就成粉末状，常有不同颜色，菌丝可深入到培养基内。霉菌菌落：为绒毛状，孢子有各种颜色。(2)用显微镜镜检，观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢子等。,16、实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理?,所有接触过细菌的器皿都必须先高压灭菌后再洗涤，特别是培养基。使用后的废弃物

10、也要高压灭菌后再抛弃。,17、如果分离的是转基因工程的工程菌，如何保证没有被普通的大肠杆菌污染?,因转基因用的质粒通常是经过改造的质粒，具有某种抗性基因。可用含某种相应抗生素的培养基培养。,实验4 果汁中的果胶和果胶酶,1、果胶,一、果胶和果胶酶的基础知识,果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，起着将植物细胞粘合在一起的作用。它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物(含半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯)，不溶于乙醇。会减少水果组织的分散性，故在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使果汁浑浊。,果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，通常包括果胶酸酶（多聚半乳糖醛酸酶）、原果胶

11、酶和果胶甲酯水解酶等。,2、果胶酶,去掉果胶，植物组织变得松散，利于榨取果汁。,作用：果胶酶分解果胶，瓦解细胞壁和胞间层，使榨取果汁变得更容易，提高水果的出汁率。果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使浑浊的果汁变得澄清。,来源：有些微生物如黑曲霉、苹果青霉等都可用于生产果胶酶。,二、实验内容 1、探究利用苹果匀浆制作果汁的最佳条件。 2、检测果胶酶的活性。 3、了解果胶酶对果汁形成的作用和收集果胶酶的应用材料。,三、设备及用品 匀浆机、小刀、烧杯、水浴锅或酒精灯、试管、移液管、量筒等。,四、实验材料 1、山楂或苹果 2、黑曲霉提取液或2%果胶酶溶液 3、95%的乙醇,五、实验步骤,1、将苹果洗净、

12、切开，去皮、籽、柄，切成小块，将切成小块的苹果放入匀浆机中，榨取苹果汁2、将榨取的苹果汁倒出，用双层纱布过滤后装入烧杯中备用。,+,4ml 苹果汁,+,45保温15分钟,1,2,1ml果胶酶,+,+,3,4,+,沸水浴,4ml 苹果汁,+,45保温15分钟,1ml果胶酶,4ml 苹果汁,+,45保温15分钟,1ml蒸馏水,沸水浴,4ml 苹果汁,+,45保温15分钟,1ml蒸馏水,1 2 3 4,+,2ml 乙醇,+,静置10分钟,1,2,1ml1号管上清液,+,+,3,4,+,1 2 3 4,2ml 乙醇,+,静置10分钟,1ml2号管上清液,2ml 乙醇,+,静置10分钟,1ml3号管上清

13、液,2ml 乙醇,+,静置10分钟,1ml4号管上清液,1 2 3 4,分层十分明显，沉淀浓缩成一小团，果汁澄清度(+ + + +),分层十分明显，不如1号试管澄清度(+ + +),液体浑浊，比4号稍澄清度(+ +)。,液体浑浊，澄清度(+),果汁被稀释沉淀物(+),果汁被稀释沉淀物(+ +),产生絮状沉淀沉淀物( + + +),产生大量絮状沉淀沉淀物(+ + + +),1 2 3 4,1 2 3 4,六、实验结果,另取试管做,七、实验原理,1、果胶酶能使果胶完全水解成半乳糖醛酸，增加固形物的分散度，降低水果匀浆的黏度，使果汁澄清。,2、果胶不溶于乙醇，加乙醇能使果胶析出。,1.影响果胶酶降解

14、果胶的因素,温度, pH值,酶作用时间,酶的用量,酶抑制剂等等,八、问题讨论,2.设计实验，探究果汁制作中果胶酶催化的最适温度。,3.设计实验，探究果汁制作中果胶酶催化的最适pH。,用滤出的苹果汁的体积大小或果汁的澄清度来判断果胶酶活性的高低。,自变量、因变量、无关变量分别是什么？如何控制自变量和无关变量？,观察指标是什么？,混合苹果泥和果胶酶之前，要将果泥和果胶酶分装在不同的试管中恒温处理。,4.设计实验，探究果汁制作中果胶酶的最佳用量。,自变量、因变量、无关变量分别是什么？如何控制自变量和无关变量？,观察指标是什么？,5.果胶酶还可能有什么作用？,果胶酶除用于制备果汁外，还用于果酒澄清，还

15、可作为洗衣粉的添加剂（除去衣服上的果汁、果酱等）。,6.果胶酶水解果胶的最终产物是什么？要使果汁澄清，应该使用果胶酶和果胶甲酯酶中的哪一种？还是同时使用？为什么？,这样才能使果胶完全水解成半乳糖醛酸，增加固形物的分散度，降低水果匀浆的黏度，有利于过滤掉不溶物，使果汁澄清。,应同时使用。,果胶酶水解果胶的最终产物是半乳糖醛酸。,实验5 加酶洗衣粉的使用条件和效果,表面活性剂有离子型和非离子型两种类型。离子型又可分为阳离子型和阴离子型。,一、基础知识,一般的家用洗衣粉和其他各种家用洗涤剂的成分基本相同，主要含有表面活性剂、水软化剂、碱剂、漂白剂和香精等成分。,洗衣粉中主要含阴离子表面活性剂如十二烷

16、基硫酸钠，有的也加入非离子型表面活性剂如脂肪醇聚氧乙烯醚。,表面活性剂种类,表面活性剂能优先吸附在各种界面上,起到降低表面张力、改变体系界面状态的作用。,表面活性剂中含有疏水基团和亲水基团，在洗涤过程中有乳化作用和通透作用，使衣服中的脂肪类物质进入水中。,表面活性剂作用,加酶洗衣粉就是在普通洗衣粉中，加入0.20.5的酶制剂制成的。在洗衣粉中添加的酶的种类很多，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶等。其中蛋白酶多用枯草杆菌碱性蛋白酶。,加酶洗衣粉添加的酶,二、实验内容1、探究加酶洗衣粉与普通洗衣粉洗涤效果的区别。2、用加酶洗衣粉洗涤沾有鸡血的棉织品，观察不同温度下的洗涤效果。,三、设备及用品 三

17、角瓶、镊子、水浴锅、沾有鸡血的棉布等。,四、实验材料 加酶洗衣粉和不加酶洗衣粉,+,100ml 水,+,40水浴保温,1,2,0.5g加酶洗衣粉,3,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌或摇动,+,观察洗涤效果,+,100ml 水,+,100ml 水,+,40水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌或摇动,+,+,40水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌或摇动,+,0.5g普通洗衣粉,不加洗衣粉,五、实验步骤,比较污物的残留状况，如：已消失、颜色变浅、面积缩小等。,判断洗涤效果好与差的指标是什么？,六、实验原理,衣服上的污渍，一般有血、汗、油、色素和食物的汁液等，它们无非是淀粉、蛋白质、脂质等物质。这些物质

18、可用淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶水解成为水溶性小分子物质。因此，加酶洗衣粉除了具有表面活性剂的作用外，还有各种水解作用，更有利于去除污渍。,1.设计实验，探究加酶洗衣粉在什么温度下洗涤效果最好？,自变量、因变量、无关变量分别是什么？如何控制自变量和无关变量？,观察指标是什么？,2.设计实验，探究不同种类的加酶洗衣粉洗涤效果的差别？,七、问题讨论,+,100ml 水,+,40水浴保温,1,2,0.5g加酶洗衣粉,3,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌或摇动,+,观察洗涤效果,+,100ml 水,+,100ml 水,+,40水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌或摇动,+,+,40水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,

19、搅拌或摇动,+,0.5g普通洗衣粉,不加洗衣粉,3.丝绸和毛织品能否用加酶洗衣粉洗涤？为什么？,加酶洗衣粉中，多数都加了蛋白酶，丝绸和毛织品都是由蛋白质纤维组成的织物，酶能切断纤维蛋白。因此，不能使用。,4.脂肪酶对沾有矿物油的棉布是否起作用？,脂肪酶水解的是酯键，只有对羟基和羧基形成的酯键起作用。但矿物油多为饱和链烃，没有酯键，不能将其水解。因此，不起作用。,实验6 -淀粉酶的固定化 及淀粉水解作用的检测,一、基础知识,固定化酶：是将酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。,优点：固定化酶固定在一定的空间范围内，可以重复使用，且能及时与产物分离。,酶固定化的

20、常用方法,1. 吸附法 (1)物理吸附法 (2)离子交换法,4. 包埋法 将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中。,3. 交联法 酶蛋白的氨基以戊二醛与载体相连。,1. 吸附法 (1)物理吸附法：将酶蛋白分子吸附在惰性载体上。惰性载体指对蛋白质有高度吸附能力的活性炭、石英砂等。 (2)离子交换法：酶蛋白带有电荷的基团与离子交换剂形成离子键。,2. 共价偶联法 酶蛋白的一些基团与载体共价结合。,二、实验内容 1、用吸附法将-淀粉酶固定在石英砂上。,三、设备及用品 塑料注射器、烧杯、滴管、自行车用气门心和夹子、注射器架、试管或微量离心管等。,四、实验材料 1、 -淀粉酶，石英砂， 2、可溶性淀粉溶液

21、 3、5mmol/LKI-I2溶液,五、实验原理,一定浓度的淀粉溶液经过固定酶柱后，可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色，表明水解产物糊精生成。,淀粉,糊精,麦芽糖,葡萄糖,遇碘显蓝色,遇碘显红色,遇碘不显色,-淀粉酶,-淀粉酶,糖化淀粉酶,六、实验步骤,5mg -淀粉酶+4mL蒸馏水+5g石英砂（搅拌30min）,装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中,10倍体积蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的淀粉酶，流速1mL/min,用滴管滴加淀粉溶液，以0.3mL/min流速过柱,流出5mL溶液后接收0.5mL流出液，加12滴KI-I2溶液，观察颜色,10倍体积蒸馏水洗涤注射器4保存

22、,为什么要控制流速？,1 2 3 4,1、2mL水+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液+稀释1倍,七、实验结果,1.冰箱保存后的固定化酶柱，重复实验，是否有相同结果？,2.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶？,八、问题讨论,实验8 果酒及果醋的制作,一、酵母菌的基础知识,形态结构 单细胞真菌，属真核生物，呈圆形、椭圆形等。 繁殖方式 酵母菌的繁殖方式有出芽生殖、分裂生殖和孢子生殖，常进行出芽生殖。分布 自然界中，酵母菌分布广泛，多分布在含糖较高的偏酸环境中，如水果、花、树皮等。一年四季，土

23、壤始终是酵母菌的大本营。,第一节、果酒的制作,需氧呼吸的反应式：厌氧呼吸的反应式：,C6H12O6+6O2+6H2O 6CO2+12H2O+能量,C6H12O6 2C2H5OH+2 CO2+能量,酶,当乙醇浓度超过16时，酵母菌死亡。,代谢类型 异养，兼性厌氧,繁殖的最适温度：20；酒精发酵的温度范围：1825。,影响酒精发酵的主要环境条件,酶,温度、氧气和pH,三、设备及用品 510L的大瓶、适合于瓶口的软木塞或橡胶塞或压紧的一大团棉花、有弯曲的安全玻璃管、过滤器 、纱布 、多功能榨汁机或研钵及杵 、若干带瓶盖的小口瓶等,四、实验材料(葡萄酒的制作） 1、紫葡萄 2、新鲜酵母或干酵母,四、实

24、验步骤,1、高锰酸钾溶液中浸泡5 min 的作用？,应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。,葡萄洗净高锰酸钾溶液中浸泡5 min冲洗后榨成浆状,2、你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？,适量干酵母(每2.5kg葡萄约1g干酵母)加少量温水(小于40)在烧杯内调成糊状。为使其迅速发生作用，可加极少量蔗糖，混匀，放置片刻，出现气泡即可。,葡萄浆放入发酵瓶中，装量不超过2/3，然后加入酵母悬液，搅拌均匀。加上一个软木塞，塞内插入弯曲玻璃管。,3.为什么发酵瓶中的液体不能装满?,发酵过程中有气体产生，留有空间可暂时储气，起缓冲作用；否则液体装满后气体会

25、使液体外溢，损失发酵液，且瓶口等处由于有发酵液易引起杂菌污染。,4.装水的弯曲玻璃管起什么作用?,既可防止氧气进入，又可排出二氧化碳，同时还能防止杂菌污染。,5.发酵完毕的标志是什么?,6.适宜温度是多少？高于30，为什么需要降温？,发酵瓶放在2530条件下23天，当停止出现气泡，表示发酵完毕。若温度偏低，则时间相对延长。若温度高于30，需要降温，否则酒的风味不佳。,用两层纱布滤去葡萄皮和籽，将获得的滤液分装到12L的细口瓶中，加盖密封，静置。待沉淀后，上清夜即为葡萄酒。（可保存12年）,在发酵的过程中，随着酒精度的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈红色,7、葡萄酒呈红色的原因？,七

26、、实验原理,C6H12O6 2C2H5OH+2 CO2+能量,酶,酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵，将葡萄糖氧化成酒精,八、问题讨论,1.葡萄或其他果实上常有天然的野生酵母存在,为什么上述实验还要接种酵母?,为了加速反应，使观察更直观，需要较多数量的酵母菌；同时，加酵母后使酵母的酒精发酵占有优势，避免许多霉菌生长，出现异味。,2.制酒时必须保证所有用具都是清洁的，为什么?,各种水果对微生物来说都是良好的培养基，特别是霉菌。如果用具不洁净，就可能有许多杂菌进入果汁，那制作的就不是果酒，而是杂菌培养液。,3、你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？,对发酵瓶、纱布、榨汁机、盛葡萄汁的器皿等实验用具进行

27、清洗并消毒。先用温水反复冲洗几次,再用浓度为75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。如果要快速可以使用吹风机吹干。,用果汁制作果酒,用葡萄制作的葡萄酒含糖较低，酒精含量也低（平均体积分数为8%）。 用果汁制作的果酒含糖量高，酒精含量也较高（可达）15%。,设备及用品,同“用葡萄制作葡萄酒”,材料,1.苹果（最好）、梨、柑橘或其他水果2.新鲜酵母或干酵母,实验步骤,1.为什么要加蔗糖?,向发酵瓶中先加一定量蔗糖，再倒入果汁，最后倒入酵母悬液，混匀，加盖。,2、发酵开始时，酵母菌的需氧呼吸会使发酵瓶内出现负压，为什么?,为了加速反应，使观察更直观，需要更多的底物参加反应。,3天后气泡冒出，10天后剧烈的发

28、酵停止，取出过滤分装。若3天后还没有气泡冒出，必须加入更多酵母，使发酵尽快发生。静置56个月，酵母下沉，上清液即为果酒。可用虹吸法取出。,一、醋化醋杆菌的基础知识,形态结构 单细胞原核生物，椭圆、杆状等。 繁殖方式 分裂生殖,第二节、果醋的制作,代谢类型 异养需氧型,C2H5OH+O2 CH3COOH+H2O,最适生长温度： 30 35。最适pH值为3.56.5。,在有氧条件下，能将乙醇氧化成醋酸,醋杆菌,醋酸含量可高达13。,二、设备及用品,5L的下口瓶2个 、500L锥形瓶1个、直角玻璃管(长短不同)3根、直玻璃管4根、单孔橡胶塞2个、双孔橡胶塞1个、胶管约1m 、锯末适量(足以装满1.5

29、L的下口瓶 、脱脂棉少量 、铝箔少量、水族箱通气泵1、铁架及铁夹几副,三、材料,1.果酒2.醋酸杆菌,四、步骤,1.装置连接,如图，甲内装入800mL酒-水混合物，铝箔盖住上口。乙瓶为发酵瓶，内填锯末至八分满；下口各插入一直角玻璃管(发酵液出口)和另一直角玻璃管(内塞脱脂棉,用以过滤空气,另一端升至锯末之上),(2)将水族箱通气泵的出气管与乙瓶上塞棉花的玻璃管相连，通气。,2.醋酸发酵,(1)适量醋化醋杆菌的培养物或醋曲悬液加入200mL酒-水混合物中混匀，pH调至7.0后倒入乙瓶，使锯末均匀湿透。,2.为什么要向发酵瓶中通入空气?,3.为什么空气要用棉花过滤?,醋酸发酵为需氧发酵,可防止微生

30、物进入,1.锯末的作用是什么?,使醋化醋杆菌附着在锯末上,(3)发酵48h，检测pH，若明显酸性，则进入下一步。,(4)调节甲到乙的流量为每5分钟1滴。乙到丙也同样速度。,2.醋酸发酵,(5)每天检测pH，等到流出液pH不再减少，或甲瓶液体全部流入乙瓶时，停止实验。,2.醋瓶子、未喝干的啤酒瓶子放置久了，在醋和啤酒表面形成一层“白膜”。它是怎样形成的？,醋酸菌大量繁殖形成的。,1.影响醋酸发酵的环境因素有哪些？,3.你所得到的丙瓶中的液体是否就是市售的白醋,为什么?,不是，市售白醋除含有醋酸外还有丰富的不挥发性酸、糖、酯、醇等物质，这些多为酵母所产生。,温度、氧气和pH等,八、问题讨论,酒精发

31、酵和醋酸发酵的比较,醋酸发酵,酒精发酵为醋酸发酵提供 。,酒精发酵,联系,氧气,微生物,区别,酵母菌,醋化醋杆菌,无氧,有氧,酒精,实验10 泡菜的腌制和亚硝酸测定,第一节 泡菜的制作,泡菜腌制过程中起作用的主要是假丝酵母和乳酸菌。,无氧条件下，微生物利用菜中的糖和其它营养物进行发酵，发酵产物有有机酸和醇类物质等，其中也有亚硝酸盐。,泡菜是一种以湿态发酵方式加工制成的浸制品，是一种发酵食品。泡菜制作容易，成本低 廉，风味可口，利于贮存。,一、基础知识（泡菜的制作）,三、设备及用品 泡菜坛、菜刀、菜板；,四、实验材料 各种蔬菜均可，一般用白菜、洋白菜、黄瓜、柿子椒、胡萝卜、 白萝卜等； 添加的调

32、味品，如花椒、大蒜、 辣椒等； 白酒； 食糖和盐。,二、实验内容,制作泡菜并对亚硝酸盐进行测定,五、实验步骤,1.起发酵作用的主要菌种是什么？来自哪里？,假丝酵母和乳酸菌，主要来自蔬菜等自然环境。,2.加入白酒起什么作用？,可抑制泡菜表面杂菌的生长，它也是一种调味剂，可增加醇香感。,创造无氧环境，使乳酸菌进行乳酸发酵。如不封闭，则会有许多需氧细菌生长，蔬菜会腐烂。,3.用水封闭坛口起什么作用？不封闭有什么结果？,无氧环境，使许多需氧菌不能生存。乳酸菌产生的乳酸及某些代谢产物能抑制细菌的生长。,4.为什么泡菜较耐贮存？,5. 有时要加一些“腌制过的泡菜汁”，有什么作用?,腌制过的泡菜汁中有较多假

33、丝酵母和乳酸菌等菌种，可减少腌制时间。,第二节 亚硝酸盐含量的测定,一、实验原理 亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，这一产物再与N-1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。可用光电比色法定量。 （将经过反应显色后的待测样品与标准液比色，即可大概算出样品中的亚硝酸盐含量。）,二、材料与器具泡菜N-1萘基乙二胺溶液、对氨基苯磺酸、硫酸锌溶液、氢氧化钠、亚硝酸钠、氯化铵缓冲液等蒸馏水、移液器、容量瓶、榨汁机、分光光度计等,亚硝酸钠标准溶液(测定时用)： 取1mL亚硝酸钠储液，移至100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，即制得5g/mL亚硝酸钠标准液。,显色液：将N1萘基乙二胺溶液与对氨基苯磺酸溶液(上清

34、液)等体积混合。,试剂的配制,取25g泡菜，打成匀浆，过滤，洗涤，用NaOH调pH至8，加25mLZnSO4，60水浴，过滤，洗涤，定容于500mL容量瓶中。,用移液器吸取10mL样品溶液，加入4.5 mLNH4CL缓冲液，2.5mL60%乙酸和5mL显色液，加水定容于25mL的容量瓶中。混合均匀，暗处静止25min ，测光密度值。以10mL水为空白对照。,用移液器先吸取0，0.5，1.0，3.0，5.0mL的亚硝酸钠标准溶液，分别置于25mL容量瓶中。再各加入4.5 mLNH4CL缓冲液，2.5mL60%乙酸和5mL显色液，加水定容至25mL，混合均匀，暗处静置25min，测光密度值。以亚硝

35、酸钠质量为横坐标，以光密度值为纵坐标，绘标准曲线。,若通过标准曲线，查出10mL样品中含m2(g)的亚硝酸盐，则每千克样品中含亚硝酸盐多少mg?,实验11 植物的组织培养,1、植物组织培养的过程,外植体,愈伤组织,胚状体或根、芽等,植物体,脱分化,再分化,愈伤组织,一、基础知识,你认为培养基应有哪些成分?,2、植物组织培养的培养基,培养基的成分矿质元素 蔗糖 植物激素 维生素 有机添加物 琼脂等,MS培养基,MS培养基含有十几多种化合物，配制不方便也难称量准确，可将培养基中的各种成分扩大一定倍数分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。(母液配制见下表),Murashige和Skoog于

36、1962年为烟草细胞培养设计的。能满足植物细胞的营养和生理需要，适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。,MS培养基的配制: 按比例分别取适量各种成分的母液，加入烧杯，称取适量的蔗糖和琼脂，加适量蒸馏水并加热使琼脂溶解，按照需要的浓度分别加入激素，用1mol/L NaOH和1mol/L HCl溶液调节pH至5.86.0。灭菌。,调控芽和根的发生细胞分裂素/生长素大致相等时，愈伤组织继续生长而不分化细胞分裂素/生长素比例高，有利芽的发生细胞分裂素/生长素比例低，有利根的发生,3、植物激素对植物组织培养的影响,实验中使用的生长素是人工合成的萘乙酸（NAA），细胞分裂素也

37、是人工合成的苄基腺嘌呤（BA）,MS培养基+相对较多的细胞分裂素（BA）+相对较少的生长素（NAA）发芽培养基（长丛状苗）。MS培养基+相对较多的生长素（NAA）生根培养基。,二、植物组织培养的基本过程,外植体的消毒：,流水冲洗20分钟,放入70酒精浸泡10min,在5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟,在另一5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟,无菌水冲洗23次，无菌吸水纸吸干,炼苗与移栽 炼苗：先在外界环境闭瓶锻炼3天，再开瓶锻炼3天（以培养基上开始长出菌为宜）。 移栽：去净培养基，可先在灭过菌的草炭土或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。,三、实验原理,1、影响植物组织培养的因素有哪些？植物的材料

38、培养基植物激素pH值外界因素（温度，光照，通气状况，材料处理等）,四、问题讨论,2.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？,不同植物、不同组织的生根和生芽对生长素和细胞分裂素浓度的需求是不一样的。因此，不可贸然使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度。可以参考已发表文献上成熟的经验，也可自己探索。,3.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？,植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成激素在植物中没有相应的分解它的酶，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。,蛭石是云母类次生硅质矿物，为铝、镁、铁的含水硅酸盐。蛭石可向作物提供自身含有的K、Mg、Ca、Fe以及微量的Mn、Cu、Zn等元素。蛭石的吸水性、阳离子交换性及化学成分特性，使其起着保肥、保水、储水、透气和矿物肥料等多重作用。,草炭即泥炭，是沼泽发育过程中的产物。由沼泽植物的残体，在多水缺氧条件下， 不能完全分解堆积而成。含有大量水分和未被彻底分解的植物残体、腐殖质以及一部分矿物质。有机质含量在30以上，质地松软易于散碎，具有可燃性和吸气性。,