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1、黄曲霉素的检测方法,王慧,由于黄曲霉素在自然界的广泛存在和对人、畜等生物的巨大危害性（主要为致癌性，WHO将其列为自然界最强的三大致癌物之一），国际上将其纳入到严格控制的有害生物名单之中。农产品黄曲霉素含量是国际上食品卫生和农产品贸易中的必检指标。在我国加入WTO后，黄曲霉素（A flatoxin）也常常成为某些国家和组织限制我国农副产品出口的绿色壁垒，我国已连续多次因为黄曲霉素被检出而遭受农产品贸易损失。基于上述这些原因，我们必须加强农副产品及饲料产品中各型黄曲霉素检测的工作。,世界公认的三大致癌物：黄曲霉菌、三四苯并芘、亚硝酸盐,黄曲霉毒主要存在于发霉的粮、油、花生中，它是黄曲霉及寄生曲霉
2、的代谢产物，毒性极强，可致肝癌，由于黄曲霉素是一种热稳定的化学物质，所以在烹调过程中不易破坏。预防措施主要是防霉。但如果食品已霉变产毒，则应采取适当去毒措施：如花生米可用排除霉粒法；大米可用碾轧法及水搓法；植物油可用加碱去毒法等。 目前已分离鉴定出18种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 以及由B1、B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2 等，B1为毒性及致癌性最强的物质。其毒性为氰化钾的10倍、砒霜的68倍,被列入严管的特剧毒物质！,中药材的采收、加工、销售、直到使用需要一段相当长的时间，如果储存环境不合理，会造成药材或饮片发霉变质，特别是含油脂比较丰富的种子类药材，更容易发生
3、变质，产生大量黄曲霉素。 2010版中国药典，修改增加了很多项目，尤其是增加了安全性控制指标，其中首次增加黄曲霉素控制。,2010版药典规定每1000g含黄曲霉素B1不得过5g，含黄曲霉素G2、黄曲霉素G1、黄曲霉素B2和黄曲霉素B1的总量不得过10g。 在药典一部中增加了僵蚕、酸枣仁、桃仁、胖大海、陈皮等五个品种的黄曲霉素检查。,测定方法,测定黄曲霉毒素B1的方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、荧光光度法、酶联免疫吸附测定法、免疫亲和层析柱-高效液相色谱法、免疫亲和层析柱-荧光光度计法等,薄层分析法( TLC),最经典、最常用，至今仍为一些检测机构所用，也是一种国标方法 原理是用适宜的萃取溶剂
4、将黄曲霉素从试样中萃取出来，经柱层析（它利用吸附剂对不同物质吸附能力的差异，用溶剂将混合物的组分逐一洗脱分离的一种分离方法）净化后，再在薄板上展开后分离，利用黄曲霉素的荧光特性,根据荧光斑点的强弱与标准比较确定其含量，对于一些组分很复杂的试样要双向展开，才能获得较高的灵敏度TLC法设备简单，检测费用低，但操作繁琐费时，萃取和净化效果不理想，灵敏度差，对操作人员的身体健康存在较大程度的危害,液相色谱法( HPLC) 原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离，再用荧光检测器测定。当前，该方法大多用免疫亲和柱来净化分离，净化效果优异 该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素，检测速度快且定性与定量准确
5、，检测限低，可作为仲裁法使用，但仪器设备价格昂贵前处理方法相对繁琐，若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加，对操作人员的身体健康仍存在一定的危害,柱后衍生：利用衍生反应使被测物与相应的试剂分析反应，以改变其物理或化学性质，使其被检测到。例如将发色基团或荧光基团键合到样品中去，多极放大检测灵敏度柱后衍生系统：有碘衍生化法、溴衍生化法及较为先进的电化学衍生化法和光化学衍生化法免疫亲和柱：基于抗原抗体反应，特异性抗体连接在柱体内，选择性吸附样品中的待检物，杂质不被吸附，流出柱外，柱上结合的目标物再被特定的洗脱液洗下来，可以用于液相色谱(HPLC)分析或者ELISA含量测定，是一种高效的前处理柱。,原
6、理是根据抗体和抗原之间特异性的免疫学反应，最后用测定酶活力的方法来增加测定的灵敏度 ELISA法将已知的待测AFB1抗原(或抗体)吸附于固定载体的免疫吸附剂上，洗涤未吸附的其他抗原和杂质,加入酶标记的AFB1 抗体(或抗原)与样品中的待测物(抗原或抗体)发生特异免疫学反应，形成酶标记的抗原一抗体复合物，洗涤后，加入酶底物，进行显色反应，通过颜色的深浅来测定AFB1抗原或抗体的含量。,酶联免疫法(ELISA ),ELISA法相对于HPLC具有特异性强、干扰小，样品的预处理简便，且快速、灵敏、高效等特点，而且回收率高，提取方法简单，可以进行定性和定量测定，并且对设备装置的投资比HPLC降低了许多，
7、大大节约了测试的成本，因而ELISA已广泛用于食品中黄曲霉毒素的测定。,一种常用的国标方法原理是利用黄曲霉素各种毒素的荧光特性，用荧光光度计测定样品中黄曲霉素的含量。大致过程是：试样先经甲醇水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉素特殊抗体的免疫亲和柱净化（生物免疫学原理，此抗体对黄曲霉素具有专一识别功能），黄曲霉素键合在免疫亲和小柱的抗体上，用蒸馏水将柱上的杂质除去后，以甲醇将目标化合物洗脱下来，加显色剂于专用的荧光光度计中测定样品中的黄曲霉素含量该方法对检测人员身体健康无危害,检测速度迅速，灵敏度高，适用于大量试样检测，且定量准确，但检测费用较高，需要配置专用设备，且不能对单一的毒
8、素进行检测,荧光光度法(IAC/SFB ),几种黄曲霉素检测方法的特点,免疫亲和层析净化高效液相色谱法,试样经过甲醇一水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒素B1，B2,G1，G2具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水或吐温-20/PBS将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量。 将免疫亲和柱与高效液相色谱法结合应用是目前采用较多的一种方法 这些新方法新手段的快速应用 为黄曲霉毒素的检测提供了更广泛的选择余地适应了不同的检测目的和要求,免
9、疫亲和层析净化荧光光度法,黄曲霉毒素速测仪 农业部油料及制品质检中心中国农业科学院油料作物研究所根据 GB/T18979-2003研制成042NYART型黄曲霉毒素速测仪 , 本仪器采用的是免疫亲和层析净化荧光光度法 试样经过甲醇一水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒素B1，B2,G1，G2具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水将免疫亲和柱上杂质除去.以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度。洗脱液通过荧光光度计测定黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)总量。该方法准确、简单、快速、安全。,毛细管电泳
10、法(CE),是一种新发展起来的分析黄曲霉素的方法 该方法与激光减弱荧光检测器(LIF) 连用可很好地提高灵敏度等用毛细管电泳激光减弱荧光检测器测定AFB1、AFB2和 AFG1 、AFG2 ，取得了较为理想的分离效果，其中对AFB2的测定最为灵敏 ,但CE法的成本较高，操作复杂，不适宜在试样检测中广泛应用,生物传感器法,是使用固定化技术将具有分子识别能力的生物活性物质与物理化学换能器结合，可以用来探测生物体内外的环境化学物质或与之起特异性交互作用后产生响应的一种装置。其中利用分子间特异亲和性制备的亲和型生物传感器为免疫传感器。 根据能量转换器所传导的物理或化学信号的不同,免疫传感器又可分为电化
11、学免疫传感器、光学免疫传感器、压电晶体免疫传感器等 由于生物传感器具有选择性高，响应快操作简单携带方便和适合于现场检测等优点，因此各国科研工作者正积极探索研制新型生物传感器用于检测黄曲霉素。,研,11醉翁亭记 1反复朗读并背诵课文，培养文言语感。2结合注释疏通文义，了解文本内容，掌握文本写作思路。3把握文章的艺术特色，理解虚词在文中的作用。4体会作者的思想感情，理解作者的政治理想。一、导入新课范仲淹因参与改革被贬，于庆历六年写下岳阳楼记，寄托自己“先天下之忧而忧，后天下之乐而乐”的政治理想。实际上，这次改革，受到贬谪的除了范仲淹和滕子京之外，还有范仲淹改革的另一位支持者北宋大文学家、史学家欧阳
12、修。他于庆历五年被贬谪到滁州，也就是今天的安徽省滁州市。也是在此期间，欧阳修在滁州留下了不逊于岳阳楼记的千古名篇醉翁亭记。接下来就让我们一起来学习这篇课文吧！【教学提示】结合前文教学，有利于学生把握本文写作背景，进而加深学生对作品含义的理解。二、教学新课目标导学一：认识作者，了解作品背景作者简介：欧阳修(10071072)，字永叔，自号醉翁，晚年又号“六一居士”。吉州永丰(今属江西)人，因吉州原属庐陵郡，因此他又以“庐陵欧阳修”自居。谥号文忠，世称欧阳文忠公。北宋政治家、文学家、史学家，与韩愈、柳宗元、王安石、苏洵、苏轼、苏辙、曾巩合称“唐宋八大家”。后人又将其与韩愈、柳宗元和苏轼合称“千古文
13、章四大家”。关于“醉翁”与“六一居士”：初谪滁山，自号醉翁。既老而衰且病，将退休于颍水之上，则又更号六一居士。客有问曰：“六一何谓也？”居士曰：“吾家藏书一万卷，集录三代以来金石遗文一千卷，有琴一张，有棋一局，而常置酒一壶。”客曰：“是为五一尔，奈何？”居士曰：“以吾一翁，老于此五物之间，岂不为六一乎？”写作背景：宋仁宗庆历五年(1045年)，参知政事范仲淹等人遭谗离职，欧阳修上书替他们分辩，被贬到滁州做了两年知州。到任以后，他内心抑郁，但还能发挥“宽简而不扰”的作风，取得了某些政绩。醉翁亭记就是在这个时期写就的。目标导学二：朗读文章，通文顺字1初读文章，结合工具书梳理文章字词。2朗读文章，划
14、分文章节奏，标出节奏划分有疑难的语句。节奏划分示例环滁/皆山也。其/西南诸峰，林壑/尤美，望之/蔚然而深秀者，琅琊也。山行/六七里，渐闻/水声潺潺，而泻出于/两峰之间者，酿泉也。峰回/路转，有亭/翼然临于泉上者，醉翁亭也。作亭者/谁？山之僧/曰/智仙也。名之者/谁？太守/自谓也。太守与客来饮/于此，饮少/辄醉，而/年又最高，故/自号曰/醉翁也。醉翁之意/不在酒，在乎/山水之间也。山水之乐，得之心/而寓之酒也。节奏划分思考“山行/六七里”为什么不能划分为“山/行六七里”？明确：“山行”意指“沿着山路走”，“山行”是个状中短语，不能将其割裂。“望之/蔚然而深秀者”为什么不能划分为“望之蔚然/而深秀
15、者”？明确：“蔚然而深秀”是两个并列的词，不宜割裂，“望之”是总起词语，故应从其后断句。【教学提示】引导学生在反复朗读的过程中划分朗读节奏，在划分节奏的过程中感知文意。对于部分结构复杂的句子，教师可做适当的讲解引导。目标导学三：结合注释，翻译训练1学生结合课下注释和工具书自行疏通文义，并画出不解之处。【教学提示】节奏划分与明确文意相辅相成，若能以节奏划分引导学生明确文意最好；若学生理解有限，亦可在解读文意后把握节奏划分。2以四人小组为单位，组内互助解疑，并尝试用“直译”与“意译”两种方法译读文章。3教师选择疑难句或值得翻译的句子，请学生用两种翻译方法进行翻译。翻译示例：若夫日出而林霏开，云归而
16、岩穴暝，晦明变化者，山间之朝暮也。野芳发而幽香，佳木秀而繁阴，风霜高洁，水落而石出者，山间之四时也。直译法：那太阳一出来，树林里的雾气散开，云雾聚拢，山谷就显得昏暗了，朝则自暗而明，暮则自明而暗，或暗或明，变化不一，这是山间早晚的景色。野花开放，有一股清幽的香味，好的树木枝叶繁茂，形成浓郁的绿荫。天高气爽，霜色洁白，泉水浅了，石底露出水面，这是山中四季的景色。意译法：太阳升起，山林里雾气开始消散，烟云聚拢，山谷又开始显得昏暗，清晨自暗而明，薄暮又自明而暗，如此暗明变化的，就是山中的朝暮。春天野花绽开并散发出阵阵幽香，夏日佳树繁茂并形成一片浓荫，秋天风高气爽，霜色洁白，冬日水枯而石底上露，如此，
17、就是山中的四季。【教学提示】翻译有直译与意译两种方式，直译锻炼学生用语的准确性，但可能会降低译文的美感；意译可加强译文的美感，培养学生的翻译兴趣，但可能会降低译文的准确性。因此，需两种翻译方式都做必要引导。全文直译内容见我的积累本。目标导学四：解读文段，把握文本内容1赏析第一段，说说本文是如何引出“醉翁亭”的位置的，作者在此运用了怎样的艺术手法。明确：首先以“环滁皆山也”五字领起，将滁州的地理环境一笔勾出，点出醉翁亭坐落在群山之中，并纵观滁州全貌，鸟瞰群山环抱之景。接着作者将“镜头”全景移向局部，先写“西南诸峰，林壑尤美”，醉翁亭坐落在有最美的林壑的西南诸峰之中，视野集中到最佳处。再写琅琊山“
18、蔚然而深秀”，点山“秀”，照应上文的“美”。又写酿泉，其名字透出了泉与酒的关系，好泉酿好酒，好酒叫人醉。“醉翁亭”的名字便暗中透出，然后引出“醉翁亭”来。作者利用空间变幻的手法，移步换景，由远及近，为我们描绘了一幅幅山水特写。2第二段主要写了什么？它和第一段有什么联系？明确：第二段利用时间推移，抓住朝暮及四季特点，描绘了对比鲜明的晦明变化图及四季风光图，写出了其中的“乐亦无穷”。第二段是第一段“山水之乐”的具体化。3第三段同样是写“乐”，但却是写的游人之乐，作者是如何写游人之乐的？明确：“滁人游”，前呼后应，扶老携幼，自由自在，热闹非凡；“太守宴”，溪深鱼肥，泉香酒洌，美味佳肴，应有尽有；“众
19、宾欢”，投壶下棋，觥筹交错，说说笑笑，无拘无束。如此勾画了游人之乐。4作者为什么要在第三段写游人之乐？明确：写滁人之游，描绘出一幅太平祥和的百姓游乐图。游乐场景映在太守的眼里，便多了一层政治清明的意味。太守在游人之乐中酒酣而醉，此醉是为山水之乐而醉，更是为能与百姓同乐而醉。体现太守与百姓关系融洽，“政通人和”才能有这样的乐。5第四段主要写了什么？明确：写宴会散、众人归的情景。目标导学五：深入解读，把握作者思想感情思考探究：作者以一个“乐”字贯穿全篇，却有两个句子别出深意，不单单是在写乐，而是另有所指，表达出另外一种情绪，请你找出这两个句子，说说这种情绪是什么。明确：醉翁之意不在酒，在乎山水之间
20、也。醉能同其乐，醒能述以文者，太守也。这种情绪是作者遭贬谪后的抑郁，作者并未在文中袒露胸怀，只含蓄地说：“醉能同其乐，醒能述以文者，太守也。”此句与醉翁亭的名称、“醉翁之意不在酒，在乎山水之间也”前后呼应，并与“滁人游”“太守宴”“众宾欢”“太守醉”连成一条抒情的线索，曲折地表达了作者内心复杂的思想感情。目标导学六：赏析文本，感受文本艺术特色1在把握作者复杂感情的基础上朗读文本。2反复朗读，请同学说说本文读来有哪些特点，为什么会有这些特点。(1)句法上大量运用骈偶句，并夹有散句，既整齐又富有变化，使文章越发显得音调铿锵，形成一种骈散结合的独特风格。如“野芳发而幽香，佳木秀而繁阴”“朝而往，暮而
21、归，四时之景不同，而乐亦无穷也”。(2)文章多用判断句，层次极其分明，抒情淋漓尽致，“也”“而”的反复运用，形成回环往复的韵律，使读者在诵读中获得美的享受。(3)文章写景优美，又多韵律，使人读来不仅能感受到绘画美，也能感受到韵律美。目标导学七：探索文本虚词，把握文言现象虚词“而”的用法用法文本举例表并列1.蔚然而深秀者；2.溪深而鱼肥；3.泉香而酒洌；4.起坐而喧哗者表递进1.而年又最高；2.得之心而寓之酒也表承接1.渐闻水声潺潺，而泻出于两峰之间者；2.若夫日出而林霏开，云归而岩穴暝；3.野芳发而幽香，佳木秀而繁阴；4.水落而石出者；5.临溪而渔；6.太守归而宾客从也；7.人知从太守游而乐表
22、修饰1.朝而往，暮而归；2.杂然而前陈者表转折1.而不知人之乐；2.而不知太守之乐其乐也虚词“之”的用法用法文本举例表助词“的”1.泻出于两峰之间者；2.醉翁之意不在酒；3.山水之乐；4.山间之朝暮也；5.宴酣之乐位于主谓之间，取消句子独立性而不知太守之乐其乐也表代词1.望之蔚然而深秀者；2.名之者谁(指醉翁亭)；3.得之心而寓之酒也(指山水之乐)【教学提示】更多文言现象请参见我的积累本。三、板书设计路线：环滁琅琊山酿泉醉翁亭风景：朝暮之景四时之景山水之乐(醉景)风俗：滁人游太守宴众宾欢 太守醉宴游之乐(醉人)心情：禽鸟乐人之乐乐其乐与民同乐(醉情) 可取之处重视朗读，有利于培养学生的文言语感，并通过节奏划分引导学生理解文意，突破了仅按注释疏通文义的桎梏，有利于引导学生自主思考；不单纯关注“直译”原则，同时培养学生的“意译”能力，引导学生关注文言文的美感，在一定程度上有助于培养学生的核心素养。不足之处文章难度相对较高，基础能力低的学生难以适应该教学。,会员免费下载,
