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1、第一节 定量分析方法的分类与特点 定量分析方法的计算药典对药物的含量限度的表示方法原料药：多以%表示，有二种情况按原料药本身形式计算其含量例 ：阿司匹林（P.11）按干燥品计不得少于99.5%对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0%凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过101.0%。,由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量例 ：氢氧化铝 Al(OH)3以含三氧化二铝（Al2O3）计，不得少于48 .0%制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况按标示量计算标示量即规格量，生产厂家的处方量。它是以标示量为100%，将测得含量与之相比较，求出相对于标示量的百分含量。例：维生素B1注
2、射液含维生素B1应为标示量的95.0%105.0%干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%,直接用%含量规定范围（主药含量微）例：复方碘溶液 含 I 应为4 .5% 5 .5% 含 KI 应为9 .5% 10 .5% 复方氯化钠注射液 含总Cl-量 0.52%0.58% 含KCl量 0.028%0.032% 含CaCl22H2O 0.031%0.035%,以重量规定含量范围（多为复方制剂）例：复方炔诺酮片 炔诺酮 0.540.66mg /片 炔雌醇 31.538.5g /片 复方磺胺甲噁唑片 SMZ 0.3600.440 g /片 TMP 72.088.0mg /片,2022/12/13,5
3、,一、容量分析法滴定法aA+bB cC+dD（ A被测药物； B滴定液）（一）、滴定度的概念T-与1ml规定浓度的标准溶液所相当的被测物的mg数。（二）、滴定度的计算T=MA mB a/b （mg/ml ）,（三）含量计算 1、直接滴定法 原料药以%表示的制剂样品% = VFT/W100% F = N实 / N理2、间接滴定法（1）、剩余滴定法中须做空白样品% =（V空白 V测 )样 FT/W100% （2）、生成物滴定法aA+bB=cC（生成物）+dD ，cC+eE=fF+gG 找到A与E的关系，计算滴定度（p.146）（自学）,相当于标示量%的计算公式片剂：VFT/W平均片重/标示量100
4、%针剂： VFT/W/标示量（g/ml） 100%以重量/片计的计算公式VFT/W平均片重=重量/片,司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加盐酸5 mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10 mL，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）17.05 mL，空白试验消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05m
5、ol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g，20粒胶囊内容物重2.7506 g）？ (p.90生成物滴定法),2022/12/13,9,司可巴比妥钠的滴定度计算,1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当T=MAmBa/b260.20.051/113.01mg/ml,(25.22 17.05) 13.010.992 2.7506,0.1385 0.1 1000 20,100%,精密量取维生素C注射液4mL（相当于维生素C 0.2g），加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝
6、色，并持续30秒钟不退。已知：注射液规格2mL:0.1g，消耗0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，维生素C的分子量为176.12，问：（1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？（2）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相当于多少mg的维生素C？（3）求本品相当于标示量的百分含量？,2022/12/13,12,维生素C,1摩尔维生素C与1摩尔碘相当T0.05176.121/18.806mg/ml T V F维生素C标示量 4 0.05 100 8.806 22.45 1.005 4 0.05 1000 10099.34,二、光谱分析（一）、UV法1、标准对照法（一点法）A样/A
7、标 = C样/C标，样品%= A样/A标 C标F/W100%F=稀释倍数 W=取样量2、百分吸收系数法（A= E1%cmCL） C% = A / E1%cm 样品% = A / E1%cm F/WF = 稀释倍数和浓度换算因子W = 取样量,3、标准曲线法（y=bxa）由标准曲线或回归方程求出C样，再根据F，W求出样品%。4、计算分光光度法双波长法，差示法均可应用比尔定律的公式，以A代替吸收度A。,差示分光光度法原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（A值），根据A与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。方法：
8、 一定量+酸 一定体积 （测定） A测 同样量+碱 同样体积 （参比） A参 A测A参=A样干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即A杂=0， A样只与样品浓度C呈线性关系。,供试品,220 240 260 280nm,A,H10溶液， 240nm pH13溶液，255nm酸性溶液，无max,A样=A pH13- A pH10,A标=A pH13- A pH10,C样=A样/A标C标,特点：具备一般分光光度法简易、快速、直接读数的优点;无需事先分离，又能消除干扰;提供一个近似理想的参比溶液。,A,2022/12/13,17,（二）、FLU法以荧光强度R代替吸收度A1、对照品溶液与空白溶液的荧光强度
9、之差（R对）2、供试品溶液与空白溶液的荧光强度之差（R样） R样C样 C对 R对,称取己酸孕酮0.0105g,加无水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,置1cm吸收池内进行测定, 根据下列数据,求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390, E1%1cm=393,0.390 10,393 0.0105, 100% = 含量%,复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（SMZ）的含量测定： 精密称取本品（每片含SMZ为0.4g）10片，总重量为5.5028g。精密称取SMZ对照品0.0501g、片粉0.0756g，按双波长分光
10、光度法测定SMZ含量。在257nm波长处测得：对照品溶液的吸收度A对为0.330，供试溶液的吸收度A样为0.372。在304nm波长处测得：对照品溶液的吸收度A对为0.009，供试溶液的吸收度A样为0.021。计算SMZ的含量相当于标示量的百分含量。,257nm,304nm,对照品,供试品,0.330,0.372,0.009,0.021,0.372- 0.021 0.0501 5.5028 0.330- 0.009 0.0756 10 0.4,100%,=99.69%,对乙酰氨基酚片剂溶出度测定：取标示量为0.3g的本品6片，依法在1000mL溶剂中测定溶出度。经30分钟时，取溶液5mL滤过，
11、精密吸取续滤液1mL，加0.04%氢氧化钠溶液稀释至50mL，摇匀，在257nm波长处测得每片的吸收度分别为0.345，0.348，0.351，0.359，0.356和0.333，按其百分吸收系数为715计算出各片的溶出量。限度为标示量的80%。并判断其溶出度是否符合规定。,0.345 50 1000,715 0.3,= 80.4%,片1：,片2,复方苯巴比妥散中苯巴比妥的测定主要成分：苯巴比妥，阿司匹林原理：在pH 5.91和pH 8.04条件下，阿司匹林及水解产物水杨酸等的紫外吸收光谱重合 ， A=0，而苯巴比妥在此两pH条件下的差示光谱在240nm 处A值最大，因此可测定此波长处的A值，
12、采用标准曲线法定量。方法：取样品0.12g，加无水乙醇20ml，振摇，加水至200ml，取5ml两份，分别用pH 5.91和pH 8.04的缓冲液稀释至50ml，以试剂为空白，在240nm处测定吸收度，代入回归方程计算含量。,三、色谱分析（HPLC和GC）内标法：F = A 内/ A 标C标/C内样品% = A样/A内FC内稀释倍数/W100%或C样= R样/内/ R标/内 C标（R代表峰面积比值）外标法（同光谱法）:标准曲线法标准对照法(一点法),系统适用性试验柱效（理论板数） n=5.54(tR/Wh/2)2分离度 R= 拖尾因子 T= 重复性 取对照品或样品溶液，连续进样5次，测得峰面积
13、相对标准差RSD应小于2.0%,2(tR2-tR1),W1+W2,W0.05h,2d1,(R 1.5),(T=0.951.05),T=W0.05h/2d1,d1,h,W0.05h,0.05h,HPLC测定复方SMZ片中SMZ含量，以SG为内标，测得标准液中：SMZ峰高14.90cm，浓度8.0mg/mL，SG峰高13.80cm，浓度4.0mg/mL。样品液中：SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm，浓度4.0mg/mL。求样品液中SMZ的浓度为多少？（进样量均为5l）,13.8 8.0,14.9 4.0,F=,样品（mg/mL） =,11.92 4.0,16.2,=1.852, F
14、=5.45,用HPLC法测得某药保留时间为12.54min，半高峰宽3.0mm（纸速5mm/min），计算柱效？N=5.54（12.54/3.0）2 ？N=5.5412.54/（3.0/5）2 ？,N=2420,丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（1.6mg/mL苯丙酸诺龙甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10L注入液相色谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，内标法计算含量。已知对照品溶液为1.052mg/mL，样品溶液为1.032mg/mL，测得对照液中丙酸睾酮和内
15、标准的峰面积分别为54678和61258，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为52213和61228，计算丙酸睾酮的含量？52213 / 6122854678 / 61258,1.052/1.032=？,97.4%,第二节 样品分析的前处理方法一、概述含金属药物有：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。含卤素药物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。根据所含金属或卤素在分子中结合的牢固程度，分析前采用不同方法进行预处理。,不经有机破坏处理的分析方法直接测定法金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中电离，可选用适当方法直接测定。例：
16、富马酸亚铁在热的稀矿酸中溶解，释放出亚铁离子，用硫酸铈滴定液直接滴定。,葡萄糖酸锑钠为组成不定的五价锑化合物，采用间接碘量法测定锑的含量，在酸性条件下，葡萄糖酸锑钠与碘化钾试液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌EDTA滴定法测定含量。,经水解后测定法本法适合于卤素与脂肪碳链相连者，经加热回流使其水解，有机结合的卤素转变成无机的卤素离子，然后用适当方法进行测定。例：三氯叔丁醇的含量测定CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH3NaCl然后用银量法测定氯化钠含量。,回流,注意沉淀转化（加有机溶剂）Fe3+的水解（酸性中滴定）,硬脂酸镁与定量硫酸
17、标准溶液共沸，水解生成硬脂酸和硫酸镁，剩余的硫酸标准溶液用氢氧化钠标准溶液回滴。经氧化还原后测定法碱性还原后测定当卤素结合于芳环上时，因结合较牢固，需在碱性条件下加还原剂回流，使X-C键断裂，形成无机卤化物后测定。例泛影酸的含量测定,NaI AgNO3 AgI 曙红钠指示剂,酸性还原后测定例碘番酸，JP采用冰醋酸酸性条件下用锌粉还原，硝酸银滴定液滴定，以四溴酚酞乙酯为指示剂，终点时沉淀由黄色变为绿色。USP，BP，ChP均采用氢氧化钠碱性条件下用锌粉还原，然后用硝酸银滴定液滴定，但指示终点方法不同， ChP采用吸附指示剂曙红钠， USP采用吸附指示剂四溴酚酞乙酯，BP采用电位法指示终点。,经有
18、机破坏的分析方法湿法破坏HNO3-HClO4破坏力强，反应激烈，注意勿将内容物蒸干，以免爆炸。适用于生物样品的破坏，所得无机金属离子为高价态。对含氮杂环药物不适宜。HNO3- H2SO4 适用于大多数有机药物的破坏，所得无机金属离子为高价态。对碱土金属药物不适用，可改用HNO3-HClO4 法。,H2SO4-SO42-本法所得金属离子为低价态，常用于含砷或锑有机药物的破坏。若用本法破坏低碳药物时，宜添加适量淀粉等多碳化合物，以保证破坏过程中将金属离子转变为低价态。其他湿法破坏HNO3- H2SO4 -HClO4H2SO4 H2O2H2SO4 KMnO4湿法破坏的仪器一般为凯氏烧瓶。,干法破坏将
19、有机物置坩埚中，加Ca(OH)2或无水 Na2CO3或轻质氧化镁，灼烧灰化，先小火加热，然后高温灰化。注意：温度应控制在420 以下。本法所得灰分往往不易溶解，但不能丢弃。本法适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环），以及不能用硫酸破坏的有机药物，不适用含挥发性金属的有机药物。,氧瓶燃烧法（Oxygen flask combustion method）仪器装置,称样燃烧分解操作（通O2 1-2 min，燃烧）吸收液水-NaOH（含碘、氯药物）例盐酸胺碘酮、碘苯酯、甲状腺粉水- NaOH -H2O2（含溴、含硫药物）例磺溴酞钠水（含氟药物）硝酸溶液（含硒药物）,注意：防爆，燃烧瓶应洗涤干净；
20、氧气要充足，燃烧应完全；测定含氟药物应用石英燃烧瓶。燃烧分解后的测定方法滴定法银量法含氯、溴药物（例磺溴酞钠）,碘量法含碘药物（例盐酸胺碘酮）,分光光度法含氟药物例氟尿嘧啶含氟量测定：取15mg样品，经氧瓶燃烧破坏后加水稀释至100ml。要求含氟量应为13.1% -14.6%。,氟尿嘧啶M=130.08氟的原子量为18.9984理论含氟量为：18.9984/ 130.08*100%=14.61%测定含量时以标准氟化钠（20ugF/ml）为对照，置2cm比色皿中，以试剂为空白，于610nm波长处测定对照和样品的吸收度。计算含氟量。,2022/12/13,48,第三节 药品质量标准分析方法验证,准
21、确度表示测定结果与真值的符合程度，用回收率表示。绝对回收率（提取回收率、萃取回收率）方法回收率 测量值回收率 加入量 100,2022/12/13,49,回收率测定要求： 添加的药物量必须与实际测定量相近。 添加物质必须与实际存在的状态相似。 同时做空白试验。 考察高、中、低三个浓度。 绝对回收率95%，每次测得值应保持恒定。,2022/12/13,50,精密度一组数据之间彼此接近的程度 考察高、中、低三个浓度的精密度一般要求n5 日内（批内）、日间（批间）精密度RSD一般2%,2022/12/13,51,特异性（专属性）是复杂样品分析时相互干扰程度的量度,是指样品中有其他组分共存时该方法对供
22、试物质准确而专属的测定能力。杂质、降解产物、辅料可取空白样品试验（化学药与中药的空白样品）,2022/12/13,52,灵敏度表示一种方法可以检测出有关化合物的最小量。常用表示方法有：检测限（LOD）表示药物的最低可测度，不必定量，通常以S/N=23倍时被测药物的绝对量表示；,2022/12/13,53,定量限（LOQ）指准确度、精密度达到要求的前提下，分析方法能定量测出样品中药物的最低值，通常以S/N=10倍时被测药物的绝对量表示；,2022/12/13,54,标准曲线与线性范围指物质浓度与测定响应值的相关性，用回归方程来评价，相关系数r0.99。标准曲线的高低浓度范围即为线性范围，在该范围内浓度测定结果必须符合精密度和准确度要求。标准曲线的制备：1个空白样品58个系列浓度标样,2022/12/13,55,要求： y =bxa （r0.99 ）系列浓度应覆盖实际样品浓度范围。（测试浓度的80120）标准曲线应平行测定5次，取各点的平均值计算回归方程。,2022/12/13,56,耐用性测定条件有较小的变动时，测定结果不受影响的承受程度样品的稳定性、样品提取次数和时间、色谱柱、不同厂家的试剂所配制的流动相的差异、流动相的pH值、不同的操作者、天气、气温等,
