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1、宫颈液基细胞学制片技术与镜下观察,彭振武 广州安必平医药科技股份有限公司,主要内容,液基细胞学常见制片技术,液基细胞学染色方法,常见质量问题与镜下形态,宫颈液基细胞学质量控制,4,1,2,3,（一）液基细胞学常见制片技术,1.膜式技术2.沉降式技术3.离心甩片技术4.手工制片技术5.其他,膜式技术,最早出现的液基细胞学制片技术原理膜式负压过滤代表产品：TCT,膜式技术制片原理,宫颈脱落细胞中常见的成分：黏液，血液，炎性细胞，上皮细胞，肿瘤细胞过滤膜孔径8um,黏液，红细胞及部分直径较小的炎性细胞能穿透，而上皮细胞及肿瘤细胞则被“卡”在过滤膜上，从而达到去除杂质，收集有效诊断细胞成分的目的。,膜
2、孔阻塞会造成细胞成团细胞通透力度大小不一，中间视野细胞偏少，周边视野细胞量聚集细胞团被外力压扁，腺细胞团特有的三维立体结构消失,膜式技术对制片的影响,自动化程度最高的制片技术原理分离提取；自然沉降代表产品：LCT,LBP,沉降式制片技术,原理一：密度分层去除杂质宫颈脱落细胞中常见的成分：黏液，血液，炎性细胞，上皮细胞，肿瘤细胞分离提取液（密度液）比重较保存液大，细胞沉降到达两者交界处，只有自身比重大，能克服下层分离液阻力的细胞才能继续下降，从而被收集。样本中的粘液，红细胞比重轻，无法透过分离提取液，被分层在上部，继而被去除；上皮细胞，肿瘤细胞及部分炎性细胞则被收集用来制片。,沉降式技术制片原理
3、,LCT,LBP,原理二：重力自然沉降，优先富集有效诊断细胞,细胞自然沉降，与玻片相吸附，没有外力施压，某些成团的细胞保持三维立体结构，一方面对判读来源有帮助，另一方面，镜下细胞不在同一层面上，需要调节微调才能观察清楚,沉降式技术对制片的影响,（二）液基细胞学染色方法,细胞病理学技术制作规范及质量控制：宫颈细胞学制片需采用巴氏染色非宫颈细胞学制片可以采用巴氏，HE染色,宫颈细胞学质控要求采用巴氏染色的原因。1：巴氏染色是国际通行的染色方法。2.HE染色不能显示鳞状细胞的分化层次，不利于直观的感受激素水平，不利于判断细胞的组织学层次来源。3.HE染色不能显示胞浆不同的色彩，对于感染性病变，放疗引
4、起的改变等失去了提示意义。4.HE染色核染色质容易凝集造成深染，失去核的细微结构，容易造成过诊断。,通过巴氏染色，表层角化细胞胞浆呈现红色，中层呈蓝色，底层呈蓝绿色；这一特点可以用来判断雌激素水平的高低，同时也能对我们的诊断带来帮助。,小的细胞本应该呈现蓝绿色，但是当胞浆呈红色，核有异型时，提示鳞状上皮病变可能性大。,http:/ 年龄：40岁判读结果：HSIL,巴氏染色能更加清楚的表达核的信息。细胞学的诊断关键还是在于核的异型性改变，核膜，核染色质，核仁等信息的表达清楚与否事关重要。,http:/,巴氏染色能好的显示胞浆的色彩变化，常见的有：角化不全嗜橘黄改变，病原微生物感染嗜双色改变，放疗
5、反应呈多彩性改变,http:/,http:/ 判读意见：滴虫 （HE染色）,http:/,巴氏染色能使细胞，特别是肿瘤细胞有更鲜明的核浆对比效果。HE染色的肿瘤细胞往往染色较深，很难观察清楚。,http:/ 年龄：35岁活检结果：宫颈管腺癌,个人体会：巴氏染色对于肿瘤细胞的着色，相比于HE染色，显得“温和很多”，一般不会出现细胞核完全染成看不清楚结构的现象。腺细胞，或成团细胞，着色能力更加强，巴氏染色对这些细胞的观察更加清楚。,（三）液基细胞学制片常见问题与镜下形态,常见问题1.细胞量2.细胞分布3.细胞染色4.细胞清晰度5.污染,1.标本满意度评估，是否属于不满意标准？2.出现的问题是属于个
6、别现象还是整体现象？3.整体现象从哪几方面检查？,细胞量过少解决思路：,液基制片：至少应有5000个形态清晰完整的鳞状上皮细胞。大致判断标准：400倍镜下，每个视野大于4个（膜式），大于8个（沉降式）。强调说明：1.计数的为鳞状细胞，鳞化细胞也可以算。2.计数的为一张制片，而不是几张制片的总和。3.最低计数标准适用于宫颈细胞学样本，对于子宫全切术后，阴道取样标本不适合。4.任何存在异常细胞的样本均属于合格样本。,标本满意度的评估,细胞量少，整体出现时考虑以下因素1.取样环节：取样刷过软，取样医生用力过小2.制片操作环节：抽吸力度过大，转移样本量过少，玻片吸附力差,1.细胞量过多的表现有哪些？2
7、.出现的是个别现象还是整体现象？3.出现的为整体现象时要考虑哪些因素？,细胞量过多解决思路：,细胞量整体过多时要考虑以下因素：1.吸附力影响2.转移标本量过多3.振荡不充分,1.个别现象还是整体现象？2.个别现象考虑什么原因？整体现象考虑什么原因？,细胞分布不均匀解决思路,个别制片细胞分布不均1.标本自身原因：粘液，血液过多2.玻片吸附力不稳定,整体制片细胞分布不均匀1.玻片吸附力低2.技术自身缺陷,1.个别现象还是整体现象？2.染色深了还是染色浅了？3.细胞核还是细胞浆的染色问题?4.影响染色的因素有哪些？,染色问题解决思路,巴氏染色的几点基本常识：1.染色原理：物理作用，化学作用。2.染料
8、分类：碱性染料，酸性染料。,巴氏染色相关的影响因素1.时间2.温度3.PH值4.固定是否及时5. 脱水是否干净,PH值当染色效果通过调节时间长短，考虑了温度变化后，仍然不能获得满意效果。需要考虑染液自身或者次缓冲液的PH值。在碱性环境下苏木素容易着色，伊红，亮绿，橘黄不容易着色；反之亦然。,固定不及时核染色质信息表达不清晰，胞浆透明效果差。,脱水不干净酒精不纯或湿度大：影响胞浆上色，片子整体呈现绿色或者灰色。二甲苯进水：整片细胞颜色单一，不鲜艳，常可见背景中有小水珠。,（50）,（51）,干燥现象表现：鳞状上皮细胞胞浆里出现深褐色斑点原因：片子染色完成后，封片以前在空气中暴露时间过久所致,（5
9、4）,干封（不过二甲苯）：对于成熟的鳞状上皮影响较小，但是对于底层的鳞状上皮及腺细胞，间皮细胞影响很大；对于单个散在的细胞影响较小，对于成团的细胞影响很大。,（56）,（58）,胸水,（59）,胸水,封片胶：多种环保胶都会影响液基制片的最终效果，比如褪色，模糊，轻微干燥现象等。,（60）,（61）,（62）,1.制片过程中的交叉污染2.外源性污染,污染,如何鉴别制片污染,如果不注意制片环境及操作流程，制片中经常会见到污染成分。特别是一些形态与念珠菌类似的污染菌，往往会影响到我们的判读结果，可以从以下几个方面加以鉴别：1.，看整体：污染菌常漂浮在片子中，或者是单独出现背景中，多的时候彼此缠绕如杂
10、草一般。念珠菌感染则常常串起在鳞状上皮团之间。2，看反应性改变：污染菌不引起细胞的增生，也不引起细胞的虫蛀样改变及嗜双色改变。念珠菌感染可以引起鳞状上皮的普遍性增生，有较明显的反应性改变。3，看具体形态：污染菌染色常较浅，多为灰红色或蓝绿色，念珠菌为红色；污染菌无竹节状典型特征，多为面条状或串珠状；污染菌的芽孢不如念珠菌典型，或没有。4，看出现概率（很简单也很重要）：一批制片中如果出现菌丝的比例过高（个人觉得超过30%），首先要考虑污染。,如何解决制片污染,1，彻底清洗机器管道2，检查载玻片，盖玻片是否清洁3，更换自配的试剂，特别要注意清洗试剂瓶，污染菌往往长在瓶壁与瓶底4，实验室环境差的话，
11、建议安装紫外线灯,交流，讨论,在宫颈液基细胞学制片中，有些少见的东西，见过一次就不会再忘记，问题是当它初次出现的时候，我们认识它吗？,http:/,http:/,http:/,http:/,http:/,http:/,http:/,（四）液基细胞学制片质量控制,好的液基细胞学制片取决于质量优异的液基细胞学制片产品，取决于责任心强的液基细胞学制片技术员，取决于懂得制片技术的细胞病理诊断医生对质量的控制。,网络上很多争论激烈的帖子，其实是由于制片效果不好，细胞形态观察不清楚所造成的。实际工作中很多误诊，漏诊的病例，也是由于制片效果不好，细胞形态观察不清楚所造成。,只有成团细胞观察清楚的片子才是合格
12、的液基制片。只有细胞核信息表达清晰的细胞才是有诊断价值的细胞。,个人体会细胞病理诊断医生，掌握以下两个问题，能解决绝大部分制片质量问题。1.成团的东西是什么？2.成团的东西怎么才能看清楚?,这样的片子您有把握诊断吗？,病例讨论,制片存在哪些质量问题？1.细胞量过多2.染色过深3.杂质（粘液）去除不干净4.成团细胞观察不清楚,解决制片问题以后,病例讨论结果第一次制片判读意见：HSIL第二次制片判读意见：HSV病理诊断中最大的陷阱是人为造成的。病理诊断医生重视制片质量问题，是对自己的保护。,成团的细胞（高核浆比的细胞）如何才能看清楚？更换次缓冲液（注意是否失效，注意PH值）避免干封,总结,一张好的液基制片，取决于优良的液基细胞学产品，取决于制片过程中各个环节的控制，取决于技术员和细胞病理诊断医生的责任心。冒着风险去做诊断，就有可能昧着良心去发报告。技术是诊断的前提，技术需要更多病理诊断医生的参与和质量控制。,（104）,谢谢！,
