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1、高效液相色谱仪器维护和保养,1,t课件,溶剂过滤头的清洗,1.取下过滤头放在(1:4,V/V)的硝酸溶液烧杯中超声清洗15分钟;2.取出后用蒸馏水超声清洗10分钟;3.用吸球吹出过滤头中的液体;4.再用蒸馏水超声清洗10分钟;5.用吸球吹净过滤头中的水份;6.将过滤头重新插入溶剂瓶中(正相系统注意将过滤头烘干),流程,2,t课件,何时需要使用在线脱气机,3,t课件,脱气机的操作,标准脱气机 标准脱气机每个通道体积为12ml，建议排液操作：5ml/min 排液6min以上。微脱气机微脱每个通道体积为1ml，建议排液操作：2ml/min 排液5min。切勿用5ml/min 流速去排液。,4,t课件
2、,使用在线脱气机须知,溶剂棕色玻璃瓶会避免藻类的生长。经常过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。避免使用下述可腐蚀钢铁的 溶剂：碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)。高浓度无机酸，如硝酸、硫酸.可能含有过氧化物的色谱纯醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)。这些在 使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物。含强络合剂的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液。,5,t课件,防止堵塞溶剂过滤器污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命，并且影 响泵的运行。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液 (pH4 至 7) 中尤其如此。下 列建议将会延长溶剂过滤器的
3、使用寿命并维持泵的运行。 使用灭过菌的溶剂瓶来减缓藻类生长。使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或盐缓冲液 建议不超过两天。如果应用许可，在溶剂中加人0.00010.001M的叠氮化钠。避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。用氩气置换流动相上层的空气。,在线脱气机日常维护,故障诊断,6,t课件,在线脱气机日常维护,故障诊断,检查溶剂过滤器拧开脱气机出口或比例阀入口管线，并使液面高于出口30cm此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。查看过滤器是否变色临时取下过滤器，检查柱前压力是否正常清洁溶剂过滤器将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下。先用水冲洗残留之溶剂然后将过滤器放在装
4、有浓硝酸 （35）的烧杯里浸一小时。用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器。建议不使用超声波清洗机清洗。将过滤器重新装好。建议定期清洗溶剂过滤器及溶剂瓶，每三个月至少清洗一次。注意：不要使用没有安装溶剂过滤器的系统可能会严重堵塞系统,7,t课件,在线脱气机日常维护,Question?1.如何简单判断脱气机脱气是否正常？2.如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？,8,t课件,在线脱气机日常维护,Question?1.如何简单判断脱气机脱气是否正常？ 打开Purge阀，设定泵的流速2ml/min，提起当前所使用溶剂瓶内的溶剂过滤头，使之脱离液面一小段时间，此时溶剂传送管内会产生一小段气泡，放下过滤头，让
5、此段气泡通过脱气机，如果脱气机正常，气泡应消失或缩小。2.如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？ 关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线,此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。,9,t课件,Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图,10,t课件,带有Seal Wash的泵头结构图,11,t课件,如何更换溶剂出口过滤芯,Agilent 四元二元/单元泵日常维护,12,t课件,严重污染的溶剂出口过滤芯,Agilent 四元二元/单元泵日常维护,13,t课件,如何更换活塞杆密封圈,Agilent 四元二元/单元泵日常维护,14,t课件,多通
6、道梯度阀（MCGV）操作要点 当盐溶液和有机溶剂混合时，盐溶液可能与有机溶剂完全混溶，而不会出现 沉淀。但是在梯度阀的混合点，但是在梯度阀的混合点，重力作用使盐颗粒 沉淀下来。通常，阀的A通道用于水相/盐溶液，而泵的B通道用于有机溶 剂。如果使用的是这样的配置，盐将落回到盐溶液中，并被溶解。当泵使用 的不同配置（例如，D-盐溶液，A-有机溶剂）时，盐可能会落到有机溶剂 中，从而出现问题。 Agilent 1100四元泵中使用盐溶液和有机溶剂时，建议将盐溶液接到下面的 口上，有机溶剂接到上面的梯度阀口上。有机溶剂通道最好直接在盐溶液通 道的上面。建议定期用水冲洗所有MCGV通道，以去除在阀口上可
7、能出现的盐 沉淀。,四元二元/单元泵日常维护,15,t课件,更好地使用四元泵将装有溶剂瓶的溶剂箱放在泵上面(或较高处)。当在四元泵上使用盐溶液或有机溶剂时，建议将盐溶液接 在底部得梯度阀口上，将有机溶剂接在上面得梯度阀口上。有机通道最好 在盐溶液通道得上面。建议用水定期冲洗所有MCGV通道除去可能在 阀口析出得盐结晶。操作泵之前，用至少两个体积（标准脱气机30ml，对微脱气机10ml）冲洗 真空脱气机,特别是当 泵关闭了一段时间后（例如，过夜），以及在通道中使用挥发性混合溶剂 时。防止溶剂过滤器堵塞及长菌 ，当虑器表面有黑色或黄色污染层说明虑器发生了堵塞，请立即清洗或更换之。定期检查排液阀的虑
8、芯。检查方法：拧开排液阀，以水作流动相，流速5ml/min，若压力大于10bar,则须立即更换。,四元二元/单元泵日常维护,16,t课件,泵的使用须知,更好地使用泵当使用低流速时（不高于0.2ml/min）检查所有1/16英寸接头有无渗漏（用压力测试或漏液测试）。每当更换泵密封垫时 排液阀虑芯也应更换。更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。有划痕的活塞将导致轻度渗漏，并 降低密封垫的使用寿命。应尽早更换有划痕的活塞。使用缓冲溶液时，关泵前先用水冲洗系统。当需要长时间使 用0.1摩尔或更高浓度得缓冲液时，最好选用密封垫清洗附件，以减少对密封垫及活塞杆的磨损。更换活塞密封垫后应按照密封垫安装步骤
9、对其进行磨合，但磨合不适用于 正相密封垫。,17,t课件,泵的使用须知,当泵头安装有冲洗附件时，由于该附件中也有密封垫，这样就会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要用10异丙醇，并将其流速调至约20滴/分钟使这溶液流过冲洗装置。 10异丙醇有助于降低水的表面张力，并有抑菌作用。不要用其它溶剂代替。 当泵头安装有冲洗附件而不开启10异丙醇，会使密封垫及活塞杆的寿命减短。,18,t课件,泵的使用须知,密封垫磨合操作：1.以异丙醇作为溶剂并将其管道直接连接到主动阀。2.连接阻尼管于排液阀的出口，阻尼管的另一端置于废液瓶中。3.打开排液阀，并用异丙醇以2ml/min的流速冲洗系统10分钟。4.关闭
10、排液阀，设置流速使压力达到350bar，并使系统在此压力下保持15分钟。5.关闭泵，缓慢打开排液阀释放压力，重新连接管路，然后冲洗系统中的异丙醇。注意，只有反相密封垫才需此操作，而正相密封垫因其最高只耐受200bar,所以此操作会损害它。,19,t课件,5重新连接色谱柱，设定适当流速，当流动相流出约30倍于色谱柱体积，并且检测器基线平衡后，流动相更换完毕,流动相的更换更换互溶流动相,1将新流动相置于储液瓶中,2打开放空阀，启动泵使新的流动相从入空阀出口流出20ml左右,3关闭放空阀，然后将进样阀与色谱柱相连接端卸开，用小容器放置于进样阀的出口处,4启动恒流泵，让流动相从进样阀出口流出10ml左
11、右,20,t课件,流动相的更换换缓冲液流动相,1用水更换色谱系统中缓冲液2用水含量在10%60%范围的溶剂冲洗色谱柱中的盐3用新流动相更换水或冲洗色谱柱溶剂,流程,21,t课件,检测器使用注意事项及日常维护,可变波长紫外检测器使用注意事项. 如果流动池被污染可先用以下方法处理:在不连接色谱柱的情况下先用高纯水冲洗20分钟，然后用5硝酸冲洗2小时，最后再用高纯水冲洗至流出液中性即可。如上述方法不果，就需更换流动池的检测窗。上述处理方法也适用于DAD的流动池。,22,t课件,检测器使用注意事项及日常维护,荧光检测器使用注意事项及日常维护. 由于水性流动相长时间留在流动池会有藻类生长，而藻类会产生荧
12、光，所以可添加有机溶剂如5的乙腈或甲醇。如怀疑流动池被污染可用以下步骤清洗之：1 用双蒸水冲洗30分钟以上.2 用注射器注射65硝酸入流动池并使其留在流动池约1小时。（注意，为了防止过压，请缓慢注射).3 用双蒸水冲洗干净。,23,t课件,HPLC日常维护总结,定期清洗溶剂过滤头（35浓硝酸浸泡1小时，不要使用超声波清洗）流动相应经过0.45um或更小孔径的滤器过滤，如果使用滤膜，注意有机膜与水膜的区别(聚四氟乙烯能适用于所有溶剂)根据情况更换Purge阀内的在线过滤头（Purge阀打开，纯水5ml/min，压力超过10bar时需更换）注意清洗在线脱气机及比例阀，尤其是长期使用水相或缓冲盐的通
13、路，使用纯水冲洗后，再使用甲醇冲洗，可以打开Purge阀，使用5ml/min的流速。污染比较严重时，可以使用IPA清洗。一般的流程，例如A：Buffer B: MeOH C: Water D: CH3CN分析：A:B:D=20:30:50清洗：C 100% 30min，B 100% 30min,24,t课件,安装有seal wash组件的，无论是否使用缓冲盐，开泵之前都应该使之充满流动的液体（10%IPA水溶液）并调流速为20滴/分钟。正相色谱、反相色谱切换时应使用IPA过渡，长期使用正相，应更换正相柱塞密封垫样品进样之前最好过滤，如果样品量太少，可以适当抬高进样针的位置流动相pH大于9.5或
14、小于2.3时，进样阀应更换tefzel 转子密封圈注意不同检测器流通池耐压问题，尽量避免使用pH9.5的流动相，以防腐蚀流通池石英窗，避免使用可能析晶的流动相，防止流通池堵塞VWD 40bar DAD 120bar MWD 120bar FLD 20bar RID 5barRID、FLD永远是最后一个检测器注意不同厂家接头问题，防止渗漏或毁坏色谱柱和接头,HPLC日常维护,25,t课件,HPLC常用的色谱柱接头,0.090 in.,0.130 in.,0.090 in.,0.170 in.,Swagelok,Waters,Parker,Rheodyne,Valco,Uptight,0.090
15、in.,0.080 in.,Troubleshooting LC Fittings, Part II.,J. W. Dolan and P. Upchurch.,LC/GC Magazine 6:788 (1988),HPLC日常维护总结,26,t课件,HPLC故障诊断,系统压力过高。1 首先拧开排液阀，以纯水作流动相并设流速为5ml/min若压力超过10bar，应先更换排液阀的虑芯。2 若排液阀的虑芯没有堵塞，卸下色谱柱，然后用一两通代替色谱柱，以水作流动相设流速为1ml/min。通常压力不会超过20bar,否则系统可能有堵塞。3 若上述的压力超过20bar,我们可按照从后到前的原则，也就是
16、说先卸下进流动池的连接管接头，开泵后，若压力正常则流动池堵塞若仍不正常可将这段管另一端也卸下，开泵后再观察压力情况。 同样道理，我们就可以找到堵塞的地方。容易堵塞的地方：流动池入口管；自动进样器的针及针座；柱温箱,27,t课件,HPLC故障诊断,系统压力过低，不稳定或没液流。首先拧开排液阀，设流速12ml/min后开泵，观察有无液流，若有再仔细观察液流是否有倒吸现象如不能确定可用量筒测量流速的准确性。如上述无液流，或流速不准多数为主动阀阀芯或主动阀故障， 或泵有严重漏液。怎样是大致判断主动阀抑或其阀芯故障？可用以下方法：当泵运转时用手指轻捏主动主体，正常的主动阀能感到有节奏的脉动，如果没有，
17、主动阀有问题。如果有则可以将主动阀阀芯取出进行超声波清洗，如仍有问题，可更换阀芯。注意，千万不要把整个主动阀放入超声波清洗这样会损坏主动阀。若上述流速准确但拧紧排液阀后压力不稳定，请仔细检查有无漏液。(通常漏液地方：各接口包括色谱柱，泵，进样阀等)。,28,t课件,HPLC故障诊断,保留时间不稳定。 首先观察保留时间是否有规律的变化，并同时观察压力是否稳定 若压力稳定而保留时间呈有规律变化，多数是色谱柱未平衡好，特别是含有盐的流动相，需较长的时间去平衡。 若压力稳定而保留时间无规律变化，请检查溶剂过滤头及真空腔是否有堵塞。再平衡色谱柱足够时间，如仍然不佳，可更换一色谱柱。 若压力不稳定，请检查
18、造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。,29,t课件,HPLC故障诊断,峰面积重现性不好。 首先观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是否有规律。 若压力不稳定，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。 若压力稳定但峰面积呈无规律变化，请检查样品是否足够，确认样品的稳定性，必要时重新配制。检查进样阀是否漏液。等。 若压力稳定且峰面积呈规律变化，多数为色谱柱未平衡好。,30,t课件,HPLC故障诊断,基线不稳定。基线漂移：色谱柱未平衡好，柱温未稳定，流动相变化，等。基线噪音： 可能原因是：流动池有气泡，流动 池被污染，对紫外检 测器可将流动池移走即可确认。 色谱柱和或系统受污染。 灯能量不足。 外界因素影响，如电源，温度和湿度，震动，等。,31,t课件,THE END,THANK YOU,32,t课件,
