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1、油脂检测实验油脂中黄酮含量的测定,吸光光度法 是基于被测物质的分子 对光 具有选择吸收 的特性而建立的分析方法。,光的电磁波性质,一、物质对光的吸收与吸收光谱,光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的 性质及光的性质有关。,物质对光的吸收,物质对光的吸收满足Plank 条件,吸收光谱 Absorption Spectrum,纯电子能态间跃迁,分子内电子跃迁,带状光谱,锐线光谱,定性分析与定量分析的基础,定性分析基础,定量分析基础,物质对光的选择吸收,在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。,二、溶液的吸光定律,透光率 （透射比）,透光率定义：,T 取
2、值为0.0 % 100.0 %,全部吸收,T = 0.0 %,全部透射,T = 100.0 %,Lambert Beer Law:,K：吸光系数,入射光波长,物质的性质,温度,吸收定律与吸收光谱的关系,吸光定律,吸收光谱,吸光度的加合性,多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸光度具有加合性，即,对吸收定律偏离,主要原因,非单色光,吸光质点的相互作用,三、吸光分析仪的基本构造,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,I0,It,参比,样品,未考虑吸收池和溶剂对光子的作用,单波长单光束分光光度计,单波长双光束分光光度计,实验七 黄酮类物质含量的测定,一 黄酮的功效,1、它是一种很强的抗氧剂，可有
3、效清除体内的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的溢出 2、黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。3、黄酮可以增进伤口愈合和止痛，,二 原理提要,黄酮类化合物是具有苯并吡喃环结构的一类天然化合物的总称，一般都具有4位羰基，且呈现黄色。黄酮类化合物的3羟基、4羟基或5羟基、4羰基或邻二位酚羟基，与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成红色的络合物。 本方法对样品中黄酮类化合物进行提取纯化后，用分光光度法于510nm波长下测定其吸光度，与芦丁标准品比较，进行待测物中总黄酮的定量测定。,三、器材与试剂 仪器：分光光度计，恒温
4、水浴，50ml具塞试管，10ml试管，移液器，漏斗，滤纸、125ml分液漏斗等。 试剂： 氯仿， 20% Na2CO3， 5%亚硝酸钠， 10% 硝酸铝，4氢氧化钠， 30%乙醇等。,四操作步骤（1）样品处理 1）固体样品： 称取12g干燥的固体样品，用滤纸包紧，置于索氏提取器中，加入50100ml70乙醇溶液浸润后，在80水浴下回流3h，至提取液无色为止。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量25乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在50下减压蒸馏，除去其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶液，用30ml热水分3次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗中，以75ml 氯仿分3次萃取脱脂，待完全分
5、层后，收集各次下层水溶液并定容至50ml。2）液体样品： 准确吸取1.0ml样品，定容至50ml后，直接以75ml 氯仿分3次萃取脱脂，其余步骤同上。,（2）标准曲线的绘制： 准确吸取（0.1mg/ml）芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、00ml（相当于芦丁0、50、100、200、300、400ug），移入10ml刻度比色管中，加入30乙醇溶液至5ml，各加5亚硝酸钠溶液0.5ml，振摇后放置5min，加入10硝酸铝溶液0.5ml摇匀后放置6min，加1.0molL氢氧化钠溶液2ml，用30乙醇定容至刻度。摇匀，放置15min，于510nm波长处测定吸光度，以零管为空白
6、，以芦丁含量（ug）为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。,（3）样品测定： 根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度的测定（样液如有沉淀，应过滤后测定）。,五.结果计算,根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦丁含量。黄酮含量（g/g）= XV /mX为由吸光度按标准曲线查的结果；V为粗提液总体积(ml)；m为称样质量(g) 黄酮的标准曲线：y=0.8965x 0.0014 R2 =0.9997,六、黄酮含量的测定流程图,取3支10ml具塞试管（2支测定管，一支空白管）3支测定管加入粗提液 5ml，1支空白管加同量30乙醇 各管加0.5ml 5% NaNO2， 摇匀，静置5min加0.5ml 10% Al(NO3)3，摇匀，静置6 min 加2ml 4 NaOH用30%乙醇定容，混匀，放置15min 510nm下测定吸光度（以芦丁为标样制作标准曲线）,黄酮铝络合物易受CO2作用使颜色有所变化，要求短时间完成操作，中间盖塞,结果记录：记载表老师检查,用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去 值日生负责注意: 清理分光光度计、比色皿、台面。,下一个实验：油脂中黄曲霉的测定,
