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1、湖 北 大 学发 酵 工 程 与 设 备 课 程 设 计题 目 醋酸的发酵生产 专业年级 0*生物工程 学生姓名 * 学 号 20*10*00* 指导老师 * 2008 年 6 月 23 日目录1前言.31.1醋酸简介.31.2全球醋酸的生产状况.31.3国外生产研究现状.31.4国内醋酸的生产状况如下.31.5国内生产研究现状.31.6主导生产方法.41.7食用醋酸生产研究现.41.8生产技术的革新与改造.41.8.1纯种固态食醋生产技术的建立.41.8.2纯种液态食醋生产技术的建立.41.8.3传统酿造食醋的技术改造.41.9我国目标.42发酵机制.42.1淀粉水解.42.2酒精发酵.42
2、.2.1精发酵微生物.42.2.2 酒精发酵中的物质变化42.3 醋酸发酵52.3.1 醋酸发酵微生物52.3.2 醋酸发酵中的物质变化.52.4 醋酸的提取53 发酵工艺及特点53.1 原料53.2 调浆63.3 液化和糖化63.4 酒精发酵63.4.1 前发酵期63.4.2 主发酵期73.4.3后发酵期.73.5 醋酸发酵73.5.1淋醋发酵工艺73.5.2 深层发酵工艺73.5.3固定化细胞发酵法83.5.5 醋酸提取8菌种的制备及种子的扩大培养94.1实验室种子制备：94.1.1选育酿酒酵母株的方法94.1.2 醋酸菌筛选流程94.2 扩大培养.104.2.1酒母的制备104.2.2醋
3、酸菌扩大培养105.培养基的组成及制备.105.1酒精发酵培养基组成105.2醋酸发酵培养基105.3发酵罐灭菌105.4灭菌流程.116无菌空气制备系统.116.1发酵生产中制备无菌空气过程.116.2特点.126.3设备选择127工艺计算.127.1.说明.127.2 计算. 128.三废处理.158.1废气.158.2废水.158.3废渣15发酵工程与设备课程设计正文1 前言1.1 醋酸简介：醋酸(Acetic Acid)是食用醋的主要化学成分，是无色透明液体（低于16.7C时为白色晶体）,有刺激性的酸味,它的蒸汽对粘膜,尤其是对眼睛的粘膜有刺激作用。浓醋酸能引起皮肤的灼伤。醋酸与水、醇
4、、苯、甘油、脂肪油等有机液体能互溶。醋酸是一种重要的有机化工产品, 主要用于醋酸乙烯、对苯二甲酸、醋酸纤维、醋酸酯等产品的生产, 是合成纤维、胶粘剂、医药、染料和农药的重要原料。醋酸还是优良的有机溶剂, 在塑料、橡胶、印刷等行业有着十分广泛的用途1 。食醋是人们生活中不可或缺的酸性调味品，其兼有防止腐败、增进食欲、保健防病、缓解疲劳等功能。近来醋在色拉调料、调味番茄酱以及其他调味酱领域里也扮演着非常重要的角色2。食用醋酸的生产技术主要是醋酸菌发酵产生。对于生产纯醋酸来说，目前化学合成法的成本较低，所以发酵法并不广泛在工业上生产纯醋酸。工业化的醋酸生产技术主要有： 甲醇羰基化法、乙醛氧化法、乙烯
5、直接氧化法和轻油(丁烷或石脑油)氧化法。1.2 全球醋酸的生产状况如下：2004 年, 全球醋酸生产能力约为987 万吨/年,其中各地区的生产能力分别为: 北美347 万吨、欧洲142 万吨、亚洲435 万吨; 分别占世界总生产能力的35%、14%和44%。近年来, 亚洲地区产能增加较快,年均增长率约为7.7%, 高于世界2.9%的年均增长率。1.3 国外生产研究现状：塞拉尼斯公司是世界两大醋酸生产商之一, 总产能为242.5 万吨/年。其装置主要在美国和新加坡,在美国甲醇羰基合成法装置的能力已达到120 万吨/年, 是世界上最大的生产装置, 在新加坡羰基法装置的能力为50 万吨/年, 而在其
6、他地区的乙醛氧化生产醋酸的装置相继关闭。现有装置主要采用甲醇羰基合成法和丁烷液相氧化法。目前, 该公司正在南京独资建设一套60 万吨/年的生产装置, 2007 年建成投产。BP 也是世界主要的醋酸生产商, 在全球4 个地区拥有醋酸生产装置, 总能力为177 万吨/年, 占全球总产能的17.9%。其在英国的羰基合成法装置能力为50 万吨/年; 在韩国是BP 和三星的合资公司,现装置能力已达42 万吨/年, BP 持股51%; 在马来西亚是和Petronas 公司的合资企业, 装置能力为40万吨/年; 与中石化四川维尼纶厂合资建设的醋酸装置产能现已扩大为35 万吨/年。世界两大醋酸生产商塞拉尼斯和
7、BP 控制了全球的醋酸生产,总产能已达到419.5 万吨/年, 占全球总产能的40%以上。1.4 国内醋酸的生产状况如下：目前, 我国共有20 多套醋酸生产装置( 一些乙醇法的生产企业多数处于停产, 只有几家还在生产,产量很低) , 至2005 年年底, 我国的总生产能力达到了176.5 万吨/年, 2005 年全年产量为140 万吨, 比去年增长21.5%。1.5 国内生产研究现状：我国现有甲醇羰基合成法醋酸生产企业4 家,生产能力为100 万吨/年, 占总产能的63%; 乙烯法生产企业有4 家, 生产能力为44.5 万吨/年, 占总产能的28.4%;其余为乙醇法。目前, 我国甲醇羰基合成法
8、醋酸生产已占据了主导地位, 并且产能和产量都有了较大幅度的增长, 装置开工率接近100%; 而随着国际油价的不断上升, 占主导地位的乙烯法产量有所下降, 开工率约为74%。我国甲醇羰基化法的最大生产企业是江苏索普(集团)公司, 有两套生产装置, 总产能约为40 万吨/年, 2005 年产量为40.3 万吨。四川扬子江乙酰化工有限公司是我国第二大甲醇羰基合成法醋酸生产企业, 1998 年一期工程完成, 当时产能为15 万吨/年;二期工程于2002 年完成, 产能扩大至23 万吨/年;三期工程于2005 年7 月投料试车, 产能已达到35万吨/年, 2005 年产量为25 万吨。上海吴泾化工公司醋
9、酸生产装置通过技术攻关, 现有的生产能力已从10 万吨/年扩大为现在的25 万吨/年, 2005 年产量为20 万吨。山东兖矿国泰化工公司是由兖矿集团和香港彩福按7030 合资成立的公司。经过2 年多的建设, 投资11 亿元的兖矿国泰化工公司的年产20 万吨醋酸, 已于2005 年11 月16 日竣工, 它是我国第一套完全自主研发和设计的甲醇羰基合成醋酸生产装置。1.6 主导生产方法：目前, 全球醋酸生产以甲醇羰基合成法占主导地位, 生产能力已达到617.5 万吨/年, 约占总产能的63%3。1.7 食用醋酸生产研究现：目前传统醋工艺、纯种固体制醋工艺和纯种液态制醋工艺已经形成3大工艺路线并存
10、。1.8 生产技术的革新与改造1.8.1 纯种固态食醋生产技术的建立从20 世纪50年底开始,我国就开始了纯种固态法生产食醋的尝试。20 世纪60 年代,上海创造了酶法液化自然通风回流的固体发酵工艺, 分别使用了纯种培养的曲霉菌、酵母菌、醋酸菌作为发酵剂进行液化、糖化、酒精发酵、醋酸发酵。20 世纪70 年代初,山西长治试验生料制醋获得成功,主辅料全部采用生料。这是一条全新的纯种固态制醋工艺,主要的技术难题是防止杂菌污染与提高原料利用率。1.8.2 纯种液态食醋生产技术的建立纯种液态发酵制醋是借鉴抗生素、氨基酸等其他发酵工业的经验,应用现代发酵工程、细胞工程和酶工程技术建立起来的一类先进的新型
11、制醋生产技术,包括自吸式发酵罐液态制醋、固定化细胞发酵制醋和酶制剂发酵制醋3种工艺。1.8.3 传统酿造食醋的技术改造我国传统酿醋技术在世界上独具一格,在长期的生产实践中已形成了固定的工艺模式和操作习惯。然而醋业界的有识之士和科研工作者追求传统酿醋技术进步的活动从来没有停止过,不断探索传统酿醋微生物的活动规律,优化工艺操作条件,改进生产设备与扩大生产规模,使传统食醋酿造技术向现代方向逐步迈进。1.9 我国目标：新中国成立以后, 特别是改革开发以后的20 多年来,我国制醋业的发展环境有了很大变化。在政府领导、科研人员和醋业工作者的共同努力下,开展了酿醋微生物、制醋生产工艺和生产设备的多学科研究。
12、选育了优良的微生物菌种, 建立了纯种固态食醋生产技术和纯种液态食醋生产技术,改进了质检方法, 优化了制醋设备,极大地提高了我国食醋的生产技术水平,使我国食醋产量和人均消费水平得到明显提高,制醋工业朝着科学化、机械化与大型化的方向发展的格局4。2 发酵机制醋酸的生产分为3个过程:淀粉水解成糖,糖发酵成酒精,酒精氧化成醋酸。这3个发酵过程都是依靠不同的微生物分泌的酶作用下进行的,所以发酵过程就是创造有关微生物发育与酶作用有利条件的过程。2.1 淀粉水解淀粉是碳水化合物中重要多糖之一,为植物通过光合作用合成的天然高分子化合物。但它不能被酵母利用,必须首先把淀粉转化为可发酵的糖类,然后才能被酵母将糖发
13、酵为酒精。淀粉转化为可发酵性糖类的过程,称之为淀粉水解。常规淀粉水解过程为: ( C6H1 0O5 ) n + nH2O X ( C6H1 0O5 ) 10 - 20 nC6H1 2O62.2 酒精发酵2.2.1 精发酵微生物酒精发酵所用微生物为酵母,其主要特点有.呈椭圆形,大小约45m; .生长的适宜温度2834, 35以上活力减退, 605分钟死亡,5可缓慢生长; .耐酸,适合pH值为46, pH值低于3. 5时生长受到抑制; .在通气条件下细胞繁殖,不通气条件下酒精发酵。2.2.2 酒精发酵中的物质变化酒精发酵中的物质变化具体过程为:葡萄糖在己糖激酶的催化下,由ATP供给磷酸基转化为6
14、- 磷酸葡萄糖; 6 - 磷酸葡萄糖在磷酸己糖异构酶的催化下转化为6 - 磷酸果糖; 6 - 磷酸果糖在磷酸果糖激酶的催化下,由ATP供给磷酸基,进一步磷酸化,生成1, 6 - 二磷酸果糖; 1, 6 - 二磷酸果糖在醛缩酶的催化下,分裂为磷酸二羟丙酮和3 - 磷酸甘油醛;磷酸二羟丙酮和3 - 磷酸甘油醛在磷酸丙糖异构酶的催化下相互转化; 3 - 磷酸甘油醛在3 - 磷酸甘油醛脱氢酶的催化下,并经磷化,生成1, 3 - 二磷酸甘油酸; 1, 3 - 二磷酸甘油酸在磷酸甘油酸激酶的催化下,变为3 - 磷酸甘油酸; 3 - 磷酸甘油酸在磷酸甘油酸变位酶的催化下,转变为2 - 磷酸甘油酸; 2 -
15、磷酸甘油酸在烯醇化酶的催化脱水,生成为2 - 磷酸烯醇式丙酮酸; 2 - 磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激酶的催化下,失去高能磷酸键,生成烯醇式丙酮酸;由于烯醇式丙酮酸极不稳定,变为丙酮酸;丙酮酸在脱羧酶的催化下脱羧,生成乙醛;乙醛在乙醇脱氢酶及辅酶(NADH2)的催化下,还原成乙醇。在酒精发酵中,其主要产物是乙醇和CO2 ,但同时也产生许多发酵副产品,主要有醇、醛、酸和酯四大类化学物质,这也是醋中风味物质的前体物质5。2.3 醋酸发酵2.3.1 醋酸发酵微生物醋酸发酵所用微生物为醋酸菌,其主要特点有呈短杆状,大小约0. 5 1. 5m; 为好气性菌; 繁殖适宜温度在30左右,最佳酒精氧化温度404
16、5; 在60时10 min死亡; 能氧化酒精为醋酸,适宜酒精度为3% 6%; 能被自己所生成的醋酸杀灭; 能氧化醋酸为CO2和H2O。2.3.2 醋酸发酵中的物质变化醋酸发酵中的物质变化具体过程为:乙醇在乙醇脱氢酶的催化下,氧化成乙醛,通过吸水形成水化乙醛,再由乙醛脱氢酶氧化成乙酸。反应步骤为:C2H5OHCH3CHOCH3COOH.由于醋酸菌含有乙酰辅酶A合成酶,它能氧化乙酸为CO2和H2O,所以在醋酸发酵后期,如发现乙酸不再上升时,酒度耗尽时，即为成熟期。2.4 醋酸的提取原理为水与醋酸的沸点相差较大。人们所研究过的醋酸提取方法很多，但可以用于工业上的只有少数几种。.分馏（精馏）。.恒沸脱
17、水蒸馏。 .溶剂（低沸点或高沸点）萃取。.上述方法联合使用。.萃取蒸馏和活性炭吸附等6。3 发酵工艺及特点7淋醋工艺是德国学者舒莱巴赫首先推举出来的，由于它比传统的固体制醋法（需40-60天）要快的多（只需5天），所以又称为速酿法。一般工艺流程为：成熟醋醅酵母酶制剂 大米调浆蒸煮液化与糖化酒精发酵醋酸发酵醋酸提取无菌空气 生产工艺3.1 原料主要原料有大米、高粱、玉米粉(麸皮、米糠、红薯干等粗粮均可),麸皮,谷壳(小米壳也可),食盐,淀粉酶、糖化酶,醋用发酵剂,水。3.2 调浆主要机器：磨浆机、调浆桶、调浆罐先将碎米浸泡，使米粒充分吸水膨胀。按米：水=1：1.5的比例送入磨浆机，磨成70目以上
18、细度的粉浆（浓度为1820Be）。粉浆泵送至调浆桶后，加入Na2CO3调至pH6.26.4,再加入碎米重量0.2%的CaCl2，然后按每克碎米130单位加入细菌-淀粉酶。在充分搅拌情况下，将粉浆缓缓连续放入液化桶中。3.3 液化和糖化主要设备：液化锅、糖化罐先在液化锅内放定量的水，一般要求淹没加热管。将水升温至90，开动搅拌，流入粉浆，掌握品温在8590。粉浆全部进入锅内后，维持1015min，用碘液检查不显蓝色表示液化已经完成。升温至100，泵入糖化锅。冷却至65以下时加入麸曲或真菌糖化酶，维持在60左右糖化3小时。糖化罐如图1所示3.4 酒精发酵主要设备：密闭式酒精发酵罐淀粉经过糖化后可得
19、到葡萄糖,将糖化30min后的醪液打入发酵罐,再把酵母罐内培养好的酵母接入。酵母菌将葡萄糖经过细胞内一系列酶的作用,生成酒精和CO2。在发酵罐里酒精发酵分3个时期:前发酵期,主发酵期,后发酵期。3.4.1 前发酵期在酒母与糖化醪打入发酵罐后,这时醪液中的酵母细胞数还不多,由于醪液营养丰富,并有少量的溶解氧,所以酵母细胞能够得以迅速繁殖,但此时发酵作用还不明显,酒精产量不高,因此发酵醪表面比较平静,糖份消耗少。前发酵期一般10h左右,应及时通气。3.4.2 主发酵期810 h后,酵母已大量形成,并达到一定浓度,酵母菌基本停止繁殖,主要进行酒精发酵,醪液中酒精成分逐渐增加, CO2 随之逸出,有较
20、强的CO2 泡沫响声,温度也随之很快上升,这时最好将发酵醪的温度控制在3234之间,主发酵期一般为12 h左右。3.4.3后发酵期后发酵期醪液中的糖份大部分已被酵母菌消耗掉,发酵作用也十分缓慢,这一阶段发酵,发酵醪中酒精和二氧化碳产生得少,所以产生的热量也不多,发酵醪的温度逐渐下降,温度应控制在3032,如果醪液温度太低,发酵时间就会延长,这样会影响出酒率,这一时期约需40 h左右完成。酒精发酵罐如图2所示3.5 醋酸发酵3.5.1淋醋发酵工艺主要设备：速酿塔 国内用作淋醋发酵的设备称为速酿塔，速酿塔高25米，直径11.3米，圆桶形，塔顶封盖，有排气孔，内有假底，塔内置一层处理过的填充料一桦木
21、刨花、芦苇秤或玉米芯（已经洗净）等上铺厚约15厘米的粗谷糠)，塔顶部装有回转喷淋管，聚液槽接有不锈钢离心泵使醋酸循环淋浇。塔顶封闭，只留排气管，管口包扎纱布以调节空气的进入量。塔的上、中、下部皆插有温度计。将酒液一次加入醋塔内，再接入醋酸菌液10%，然后定时回浇和以定温循环回淋结合，约每隔90分钟回淋一次。品温控制3542之间。如果发现品温过高或过低，应灵活决定回浇次数和控制空气进入。回浇时要随时注意喷淋管是否运转正常，防止局部位置上填充物温度过高，造成发酵异常。经50多小时，测定淋出液酸度不再上升，酒精耗尽时，即为成熟期。醋塔法制醋酸特点： .塔内填充料能连续使用，可以节约麸皮等原料，并不需
22、要出渣，减轻了劳动强度；.原料出品率较高； .填充料来源广泛； .口味比较单调。国外淋醋工艺采用的典型设备是弗林斯发生器（Flings generator）在弗林斯发生器中，载体层的温度自控问题已在可能的程度上得到了解决。其操作过程如下：酒醪有泵从发酵罐的聚液槽连续通过换热器泵送到进料罐中，它可以由此通过分布盘和榉木刨花层间接回到聚液槽，或者通过溢流管直接回到聚液槽，刨花层中具有3只接触式温度计，它能控制进料罐的阀门进行循环液的调节。酒醪中的1只接触式温度计通过电磁阀可以控制进入换热器的冷却水流量。以这种方式，在很高的发酵速率下，酒醪品温也可以控制在2628，而刨花层中温度计触点处的温度可以控
23、制在2833之间。空气通过载体层的底部吹入，通过排气管放出。当残余乙醇降到0.3%（v/v）时，将聚液槽中的醋液大部分放出，然后在几天之内分23次补足。在每一循环的开始，发酵速率可能明显降低，这是由于乙醇和醋酸浓度的巨大变化导致载体层上部细菌大量死亡造成的。一旦新添加的酒醪与吸附在刨花上的醋液混合之后，就形成了发酵的适宜条件，即8%醋酸和4%乙醇。乙醇向醋酸转化率取决于刨花层的使用时间，一般在8590%之间。高峰发酵期的氧利用率约为50%。发酵的长短与刨花层与聚液槽的体积比有关，一般为410天。用榉木刨花做载体时，这种设备的生产能力约为每m3载体每天产醋5L。如果产醋质量下降，则可能应为刨花层
24、上细菌性质已发生变化，例如形成粘性结块物等。3.5.2 深层发酵工艺主要设备：自吸式发酵罐、通气装置、消泡器、酒精仪、发酵规程： 国内食用醋酸深层发酵的规程为：酒醪放入发酵罐中之后，接入培养1214h的醋酸种子培养物20%，维持温度3537，通风量前期为0.13vvm，中期为0.17vvm，后期也为0.13vvm，罐压维持在30kPa，在搅拌下发酵。发酵过程中，温度每小时测定一次；酸度前期4h测一次，中期2h测一次，后期4h测一次，若酒精降到测不出，表明发酵已经结束。整个过程约需4050h。深层发酵可以是间歇进行的，也可以是半连续或连续进行的。因为连续和半连续发酵可以免去培养种子的操作，所以多
25、被采用。连续发酵的操作规程是，将酒精仪置定在乙醇浓度2%（v/v），即维持罐内乙醇浓度2%。这由酒精仪控制进料阀，从而控制流加速率来实现。进料的乙醇浓度约为12%，罐内温度维持在3133，开动通气溢流管连续流出。3.5.3固定化细胞发酵法淋醋发酵是固定化细胞发酵的典型之例，淋醋发酵具有传质，传热不均匀性，而这主要是由于载体不均匀性造成的。现代细胞固定化技术研究主要是载体的研究。根据固定后的细胞在发酵中是否随发酵液流动可以把固定细胞发酵法分成两大类:固膜式发酵和流化式发酵。相应的固定方法成为固膜固定法和流化固定法。前者是细胞在载体上形成了生物膜，不随发酵液流动，如纤维、陶瓷、和前述的刨花用作载体
26、的固定方法；而流化固定只是将细胞固定在载体内或（和）表面上，或不用载体的自聚集固定，在发酵中载体带着菌体在发酵液内流动，如卡拉胶、海藻酸钠等固定剂制成的凝胶珠则属于这种类型。3.5.4热醋酸梭菌发酵法热醋酸梭菌发酵具有转化率高，耐高温，发酵有糖到醋酸一步完成，不需通氧，可以利用戊糖等优点，但这种方法发酵时需要加中和剂，因此只适用与生产醋酸盐。3.5.5 醋酸提取首先将发酵液过滤：可采用板框式压滤机或自动板框式压滤机多块滤板和滤框交替排列而组成，板框之间隔有滤布，一端为固定端、一端为活动端，用压紧装置自活动端向固定端将板框压紧，进出口装在固定端上。 如图：原理为水与醋酸的沸点相差较大。人们所研究
27、过的醋酸提取方法很多，但可以用于工业上的只有少数几种。.分馏（精馏）。.恒沸脱水蒸馏。.溶剂（低沸点或高沸点）萃取。.上述方法联合使用。.萃取蒸馏和活性炭吸附等。蒸馏塔如图8：发酵过程中参数的检测： pH； 进出气体中的氧；二氧化碳；溶解氧； 还原糖； 细胞浓度等。4菌种的制备及种子的扩大培养4.1实验室种子制备：从未灭菌的酒精中分离酵母菌；从未灭菌的食醋中分离得到醋酸菌4.1.1选育酿酒酵母株的方法9：.自然选育：从自然界直接分离筛选高产酒精酵母是育种工作中最经济实用的方法.诱变育种：是用物理或化学的诱变剂使诱变对象内的遗传物质（DNA）的分子结构发生改变，引起性状变异并通过筛选获得符合要求
28、的变异菌株的一种育种方法。其中物理方法有：射线（紫外线、X光线、Y射线，中子线），激光微束，离子束，微波，超声波，热力等。化学诱变常用方法有：浸渍法、涂抹法、滴液法、注射法、施入法和熏蒸法。 .杂交育种：是指在不同种群、不同基因型个体间进行杂交，并在其杂种后代中通过选择而育成纯品种的方法。制备酒母的参考配方： 红苕干粉或玉米料若干，加水比14.55，硫酸铵0.10.16(使用玉米可不添加)，用H2SO4调整pH值至4.04.5。8.行筛选分离纯化。4.1.2 醋酸菌筛选流程10:液醋增殖培养稀释分离选取单菌落试管斜面培养液体试管培养液体三角瓶培养测酸确定菌株纯化。试管斜面菌种保藏培养基：酵母膏
29、1% 、葡萄糖1% 、CaCO3 0.5% 、酒精3。(vv)、琼脂2%；CaCO3平板分离培养基：酵母膏1%、葡萄糖1% 、CaCO3，2% 、酒精3。(vv)、琼脂2% ，pH 6.5。液体三角瓶培养基：酵母膏1%、葡萄糖1%、酒精4。(vv)，pH5.5。.分离筛选初筛(透明圈法) :取不同发酵时间液态醋20mL ,加入50mL 增殖培养基,30 增殖培养34 d。稀释至47倍,各取0.2 mL ,涂到平板分离培养基,30 培养3 d ,待长出菌落后,挑菌落较小、透明圈较大、边缘整齐的单菌落移植试管培养。复筛:取经初筛培养成的斜面菌落,接入液体试管(装液量10mL 、酒精体积分数3 %)
30、 , 30 培养24 h 后,接入500mL液体三角瓶(装液量40mL) ,接种量为1 支试管接1 只三角瓶。最后酒精体积分数为6% ,30静止培养,每日测定酸度,选出产酸快、酒精转化率高的菌株并做醋酸定性试验。.纯化:确定产酸快、酒精转化率高的较优菌株,反复纯化获得纯种。纯化方法同分离方法。 .种保藏生产菌种可传代保藏在4。如果需保藏较长时间，可用冻结保藏法。加入10%蜂蜜作保护剂，冻结温度-28，可保藏5年。4.2 扩大培养11:4.2.1酒母的制备：4.2.2醋酸菌扩大培养:.一级种子醋酸菌培养基：酵母膏1%、葡萄糖1%、CaCO3、酒精2。(vv)，pH5.5先将葡萄糖、酵母膏和CaC
31、O3溶在水中，每只1000 ml三角瓶分装150ml,在100kPa表压下灭菌30min，冷至室温，按无菌操作法加入酒精。每一支斜面菌种接一支三角瓶，在3234往复摇床上培养24h。镜检菌体生长正常，无杂菌污染可继续扩大培养。.二级种子每只1000ml三角瓶装入前述同样的培养基250ml，接种一级种子10%，于同样条件下培养16h。镜检正常接入种子罐。.三级种子将糖化好的糖液泵入50种子罐内，定容至35L,升温至100，维持10min灭菌，然后开冷水降温至32，接种酵母培养物10%，于30静置培养30h,酒精度达到46即可。接入二级种子10%。开动搅拌，通气0.3vvm，维持3234，罐压30
32、kPa，培养1214h，要求酸度在20g/l左右，否则应延长或缩短时间。镜检正常即可继续培养。.四级种子 用500L罐装液350L，接入一罐（即35）三级种子，改用通气量0.25vvm，其余条件同上。质量指标也与三级种子相同。质量合格可用于接种生产罐。5 培养基的组成及制备5.1酒精发酵培养基组成：主要原料有高粱玉米粉(麸皮、米糠、红薯干等粗粮均可)15%,麸皮7%,谷壳(小米壳也可)30%,食盐10%,淀粉酶、糖化酶各0.04%，,水20%。5.2醋酸发酵培养基：酒精发酵后得到的酒液5.3发酵罐灭菌：空罐灭菌（空消）即发酵罐罐体的灭菌。空消时一般维持罐压0.150.2Mpa，罐温125130
33、，保持3045min；要求总蒸汽压力不低于0.30.35Mpa，使用汽压不低于0.250.3MPa。在培养基灭菌之前，通常应先将与罐相连的分空气过滤器用蒸汽灭菌并用空气吹干。实罐灭菌时，先将输料管路内的污水放掉冲净，然后将配制好的培养基泵送至发酵罐（种子罐或料罐）内，同时开动搅拌器进行灭菌。灭菌前先将各排气阀打开，将蒸汽引入夹套或蛇管进行预热，待罐温升至8090，将排气阀逐渐关小。接着将蒸汽从进气口、排料口、取样口直接通入罐中（如有冲视罐也同时进汽），使罐温上升到118120，罐压维持在0.090.1Mpa（表压），并保持30min左右。各路进气要畅通，防止短路逆流，罐内液体翻动要激烈；各路排
34、汽也要畅通，但排汽量不宜过大，以节约用气量。在保温阶段，凡进口在培养基液面以下的各管道及冲视镜管都应进汽；凡开口在液面之上者均应排汽。无论与罐连通的管路如何配制，在实消时均应遵循“不进则出”的原则。这样才能保证灭菌彻底，不留死角。保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷却水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。在引入无菌空气前，应注意罐压必须低于过滤器压力，否则物料将倒流入过滤器内，后果严重！灭菌时，总蒸汽管道压力要求不低于0.35Mpa，使用压力不低于0.2Mpa。 5.4灭菌流程: 配料后由料液罐1放出，可
35、加入为0.01%消泡剂，用连消泵2送入气液混合器或连消塔3底端，料液被直接蒸汽立即加热到灭菌温度383-403K，由顶部流出。料液进入维持罐4，维持8-25min，由维持罐上部侧面流出，维持罐内最后的培养液由底部排尽，经喷淋冷却器5冷却到发酵温度，送去发酵罐。 如下图所示： 6无菌空气制备系统126.1发酵生产中制备无菌空气的大致过程如下:空气高空取气管除尘器 空气压缩机贮气罐一级冷却器 油水分离器二级冷却器除雾气加热器总过滤器分过滤器 无菌空气无菌空气制备流程图 6.2特点：两级分离、两次冷却、一次加热的空气除菌流程是一个比较完善的空气除菌流程，它，能充分的分离空气中含有的水分，使空气在低的
36、相对湿度下进入过滤器，提高过滤效率。6.3设备选择:. 经第一次冷却后，大部分的水、油都已结成较大的雾粒，且雾粒浓度比较大，故适宜用旋风分离器分离。. 第二冷却器使空气进一步冷却后析出一部分较小的雾粒，宜采用丝网分离器分离，发挥丝网能够分离较小直径的雾粒和分离效果高的作用。. 经二次分离的空气带的雾沫就较少，两级冷却可以减少油膜污染对传热的影响。. 若采用低温的地下水，可采用串联来减少冷却水用量。在没有低温地下水时，第二级可采用冰水冷却，通常第一级冷却到3035，第二级冷都到2025。除水后，空气的相对湿度还是l00，可用加热的办法把空气的相对湿度降到5060。7部分工艺计算7.1说明：此部分
37、是在假定年产量为500或1000吨产品条件下，计算发酵罐、种子罐台数、公称体积等，部分参数根据资料进行假定发酵过程物料计算和发酵罐容积的确定7.2由年产量决定每天放罐发酵液体积发酵工段，每天所需要的放罐发酵液体积Vd可按下式计算：式中 M所设计的年产量，t/a; Uq成品的纯度，mg/mg; m年工作日，d/a; 提炼总收率，% 在本工艺中年产量M为1000t/a，成品的纯度Uq为0.8mg/mg，年工作日为250d/a，酶活力Uf为250t/m3,提炼总收率为40%Vd酒精=1000*1000*0.8/（250*250*100%）=12.8 m3/dVd醋酸 =1000*1000*0.7/（
38、250*250*40%）=28 m3/d发酵罐公称容积V0可按下式计算： 式中 Vd每天所需发酵液体积，m3/d; nd每天放罐罐数，1/d; L发酵罐装料系数每天放罐罐数nd为4/d，发酵罐装料系数L为40%，已计算得Vd为32m3/d，则发 酵罐公称容积 V0酒精=12.8/（4*100%）=3.2m3 V0醋酸=28/（4*40%）=17.5m3种子罐公称容积和台数的确定 : 本工艺中酒精发酵罐为8台，种子罐周期为0.5天，发酵罐周期为3天，则本工艺中酒醋酸发酵罐为8台，种子罐周期为2天，发酵罐周期为5天，则 酒精种子罐台数为：8*0.5/3=1.3台 即2台 醋酸种子罐台数为：8*2/
39、5=3.2台 即4台种子罐的公称容积应根据接种比，培养过程中液体损失率和种子罐的装料系数来计算 本工艺中发酵罐计量体积为150m3，接种比为0.07，液体损失率为15%，种子罐装料系数为65%, 则种子罐公称容积=150*（0.07）*（1+15%）/65%=18.6m3设备的公称容积V0，一般是指圆筒部分容积Vc加上底封头的容积Vb： 式中 D容器内径，m; H容器的筒身高度，m底封头容积Vb可近似按下式计算：若筒身高径比H/D=a,则： 容器内径D为2m，筒身高径比H/D=a为6，则设备的公称容积： V0=（0.785*6+0.15）*23=38.9m38 三废处理13工业发酵过程中,经常
40、排放大量废水、废气和废渣,对环境造成污染和危害,因而开展工业“三废”处理和综合利用也是发酵生产中不可忽视的一环。8.1废气: 对于排入大气的污染物，应控制其排放浓度及排放总量，使其不超过所在地区污染物的允许浓度和环境容量，主要的处理方法有以下几种： 利用防尘装置去除排放废气中的烟尘及各种粉尘，如原料风选过程中的洗尘塔、袋滤器、离心或除尘器等；采取气体吸收法处理有害气体，如用氨水、氢氧化钠吸收废气中的二氧化碳、二氧化硫等；应用冷凝、催化转化、活性炭吸附等物理、化学和物理化学方法处理排放废气中的主要污染物，酒精生产过程中蒸馏工段的各级冷凝器。醋酸发酵中酒精发酵产生的二氧化碳可以经压缩制液态二氧化碳和干冰8.2废水:发酵工业产生的废水量大、成分复杂，排放之前必须进行处理。主要的处理方法有以下几种：1 .节约用水，提高水的循环利用率，杜绝跑、冒、滴、漏，提高原料利用率和化工材料的回收率；.改进生产工艺，尽量减少生产过程中废液的排放量；.对所产生的废水
