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1、2015高考导航,细胞工程,动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体核移植,_是其他动物细胞工程技术的基础。,动物细胞培养技术,动物细胞培养,动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.2.原理：细胞增殖,1.概念,3.过程：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,10代细胞,传代培养,无限传代,遗传物质未改变,遗传物质改变,剪碎,细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到4050代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改
2、变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。,解答概念,动物细胞生长特性：,1.细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。2.接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,原代培养：将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。,传代培养：用胰蛋白酶将出现接触抑制的贴壁细胞从培养瓶壁上脱离下来，制成细胞悬液，分装到多个培养瓶中继续培养，这个过程叫传代培养。,上述过程中，
3、在第一培养瓶中培养到接触抑制就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养,1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等、维生素。）3、温度和PH 36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）,补充合成培养基中缺乏的物质,4.动物细胞培养的条件,（1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。还可作为基因工程中的受体细胞。（3）用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，
4、为治疗和预防疾病提供理论依据,5.动物细胞培养技术的应用,获得细胞,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,或细胞分泌蛋白,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物组织培养和动物细胞培养的比较,二、动物体细胞核移植技术:,将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物,1.核移植,胚胎细胞核移植,体细胞核移植（难度高）,胚胎移植,2.
5、体细胞核移植过程（体细胞克隆动物）,3.体细胞核移植技术的应用前景畜牧业、医药卫生以及其他领域有着广泛应用前景,1加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2保护濒危物种，增加动物 的存活数量3可作为生物反应器，生产医用蛋白，克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体，了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等,4.体细胞核移植技术存在的问题,1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。,5.克隆动物的研究意义,1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物,物理法,化学
6、法,生物法：,灭活的病毒,三、动物细胞融合,1.方法,是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞的过程。,2.动物细胞融合的原理：,细胞膜的流动性,四、单克隆抗体,什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。效应B淋巴细胞产生抗体。,1、单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,诱导其融合的方法有哪些？,1细胞两两融合后，有哪些类型？,B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤,2如何筛选出杂交瘤细胞？,单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。,单克隆
7、抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。,2、单抗隆抗体的应用,作为诊断试剂,定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病,用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。,用于治疗疾病和运载药物,利用同位素标记单抗，在特定组织成像,制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。,1.以下四种细胞工程技术中培育出的新个体，只有一个亲本遗传性状的方法是()A植物组织培养B细胞融合C动物胚胎移植 D细胞核移植,A,（课标卷）40.生物选修3：现代生物科技专题（15分）某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），
8、每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。,若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检 测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠，理由是,Y小鼠的抗体效价最高,四,Y,2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。（3）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体数目最多是 条。（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 。,不能无限增殖,B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞,细胞融合是随机的，且融合率达不到100%,1,200,
