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1、脑脊液常规检验规范,玉林市红十字会医院检验科临检组2016年7月20日,1,ppt课件,2,ppt课件,脑脊液标本的采集与处理,1.脑脊液主要由临床医师采集，一般行腰椎穿剌，必要时从小脑延髓池或侧脑室穿剌采集。将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，每管l2ml：第一管做化学或免疫学检査第二管做病原微生物学检査第三管做理学和显微镜检査。,3,ppt课件,2.标本采集后无特殊处理要求，应立即送检，不超过1小时。久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检査，葡萄糖分解使含量降低，以及病原菌破坏或溶解。病原微生物检验标本须室温条件下运送，以免冷藏致某些微生物死亡。,脑脊液标本的采集与处理,4,ppt课件,3.
2、细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝（血常规管）。,脑脊液标本的采集与处理,5,ppt课件,检验项目,一般形状检查,化学检查,有形成分及病原微生物检查,免疫学检查,6,ppt课件,一般形状检查,颜色,正常脑脊液颜色为无色透明，病理情况下可有不同的改变：1.红色：穿刺损伤出血，蛛网膜下腔出血，脑室出血。2.黄色：颅内陈旧性出血。3.米汤样：为白细胞增多，见于化脓性脑膜炎4.绿色：可见于铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌引起的脑膜炎。5.褐色或黑色 黑色可见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素瘤；褐色可见于脑出血的康复期。,7,ppt课件,透明度,welcome to use
3、 these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience,1.正常为清澈透明；病理情况下可有不同改变的混浊脑脊液中细胞数大于300106/L或含大量细菌、真菌时呈不同程度混浊。2.结核性脑膜炎时呈毛玻璃样浑浊；3.化脓性脑膜炎时呈脓性浑浊；4.正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而呈轻度浑浊。,8,ppt课件,化学检验,Pandya试验：脑脊液中球蛋白（glubin，Glb）与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀，即潘（Pandy)试验阳性,蛋白质定性试验,阴性：清澈透明，不显雾状。阳性：极弱阳性微呈白
4、雾状，在黑色背景下，才能看到。1+：为灰白色云雾状；2+：为白色浑浊；3+：为白色浓絮状沉淀；4+：为白色凝块,结果判定,9,ppt课件,Pandya试验临床意义,正常时多为阴性。有脑组织和脑膜感染性疾患（如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、中枢神经系统梅毒、脊髓灰白质炎和流行性脑炎等）、蛛网膜下腔出血及蛛网膜下腔梗阻等时常呈阳性反应。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应。,10,ppt课件,有形成分分析,一、红细胞计数：1、澄淸标本：可混匀脑脊液后用滴管直接滴入血细胞计数池，静置1分钟，在高倍镜下.计数5个大方格内红细胞数，乘以2即为每微升红细胞数。如用升表示，则再乘以
5、106。,11,ppt课件,一、红细胞计数：2、浑浊或血性标本：取混匀的脑脊液20l,加入红细胞稀释液0.38ml（稀释20倍），混匀后充池，静置下沉23分钟，计数中央大方格四角和正中中方格内红细胞数（5个中方格），乘以1000即为毎升脑脊液的细胞总数。对压线细胞按“数上不数下、数左不数右”的原则。,12,ppt课件,二、白细胞计数1、非血性标本：小试管内加入冰酸酸12滴，转动试管，使内壁沾有冰酸酸后倾去，然后滴加混匀脑脊液34滴，待数分钟红细胞溶解后，混匀充池，按白细胞计数法计数。,13,ppt课件,二、白细胞计数2、混浊或血性标本：将混匀脑脊液用1%冰醋酸溶液按全血白细胞计数法稀释后进行计
6、数。,14,ppt课件,二、白细胞计数 校正 因穿刺出血而来的白细胞数，用下式公式进行校正。脑脊液白细胞校正数=脑脊液白细胞计数值出血增加的白细胞数出血增加的白细胞数=外周血白细胞数脑脊液红细胞数/外周血红细胞数总式,15,ppt课件,三、细胞分类1、直接分类法白细胞计数后，将低倍镜换到高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细胞数少于100个，应直接写出单个核、多个核细胞的具体数字，用分数表示。如：白细胞50个中淋巴细胞有30个，报告：淋巴细胞30/50。,16,ppt课件,三、细胞分类2、染色分类
7、法如直接分类法不易区分细胞或临床需要分类结果时，可将脑脊液离心沉淀1500转5分钟，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成薄膜，置室温或37温箱内待干，行瑞氏染色（经验：染液3滴+缓冲液7滴，染3分钟。否则染黑不易辩认细胞类型）。用高倍镜或油镜分类。如见有不能分类的细胞，应请有经验技术人员复核，并另行描述报告，如脑膜白血病细胞或肿瘤细胞、内皮细胞等。如果用玻片离心沉淀仪，则取0.5ml脑脊液制片。如果白细胞总数在30个以下，可不做分类计数。,17,ppt课件,四、仪器法细胞计数、分类仪器：血细胞分析仪要求：标本无凝固物；清洗仪器管道，直至细胞本底为0。最好使用体液细胞模式（专用通道）检测标本。
8、,18,ppt课件,细胞计数参考区间,红细胞计数：0106/L。白细胞计数：成人（08）106/L;儿童（015）106/L；新生儿（030）106/L。,19,ppt课件,细胞分类参考区间,成人：淋巴细胞40%80%单核细胞15%45%，中性粒細胞6%。新生儿：淋巴细胞5%35%单核细胞50%90%中性粒細胞8%。,20,ppt课件,脑脊液常规检验注意事项,1.计数应在标本采集后1小时内完成。如放置过久，细胞会破坏、沉淀或纤维蛋白礙集，导致计数不准确。2.细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞区别。前者不溶于醋酸，加优质墨汁后可见荚膜。3.使用计数板后应立即淸洗，以免细胞或其他成分黏附在计数板
9、上，影响使用。,21,ppt课件,脑脊液常规检验临床意义,1、中枢神经系统病变时，脑脊液细胞数可增多，增多程度及细胞种类与病变性质有关。2、病毒性脑膜炎、结核性膜炎或真菌性脑膜炎 时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主，早 期伴有中性粒细胞及单核细胞。3、细菌感染时，如化脓性脑膜炎，细胞数显著增 加，早期以中性粒细胞为主。,22,ppt课件,脑脊液常规检验临床意义,4、脑寄生虫病时，可见较多嗜酸性粒细胞。5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数 红细胞、红细胞吞噬细胞及含铁血黄素细跑。6、脑膜白血病和脑膜癌时，可见白血病细胞或癌 细胞。,23,ppt课件,墨汁染色,墨汁染色原理：在菌细胞周
10、围存在黏多糖荚膜物，应用墨汁湿片法能证明荚膜的存在，新型隐球菌的荚膜取代了墨汁中的胶状碳粒，呈现清楚无色透明的晕圈环绕着菌体,24,ppt课件,25,ppt课件,新型隐球菌染色镜检,1、将标本3000转离心10分钟，取10l沉淀 物放于载玻片上。2、取10l墨汁加于沉淀物上，再覆盖上盖 玻片，注意先将盖玻片一边接触墨汁而后 缓缓斜放下，使其不产生气泡。3、在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞，找到 后，转换高倍镜确认。,26,ppt课件,新型隐球菌染色镜检,4、结果报告(1)如果涂片在墨汁的黑背景下呈现清楚的晕圈，并且在晕圈内可见菌细胞，报告“墨汁染色阳性”。(2)如果涂片在墨汁的黑背景下无清楚的晕圈
11、，报告“墨汁染色阴性”。,27,ppt课件,新型隐球菌染色镜检注意事项,1、加的墨汁不要太多，以免加盖玻片时外溢造成污染。2、脑脊液墨汁染色阳性则高度怀疑新型隐球菌。3、注意将隐球菌与白细胞进行仔细鉴别，隐球菌菌体中央有折光颗粒，而白细胞没有。,28,ppt课件,新型隐球菌染色镜检注意事项,4、因为墨汁染液不能高压灭菌，每次操作应进行阴性对照，以防墨汁污染造成假阳性。5、阳性标本要求送微生物室培养鉴定，同时请主管辨认复核。,29,ppt课件,脑脊液常规检验分析后质量控制：1、危急值报告。2、复查复核、审核签发。3、保留标本。4、特殊交班。,30,ppt课件,Thank you!,31,ppt课件,
