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1、布鲁氏菌病的检测方法检疫检验布鲁氏菌病的检测方法耿淑梅(黑龙江省海伦市畜牧局动物检疫站152300)1病原学检测方法布鲁氏菌及其种与生物型的检测鉴定,除直接进行病原分离和鉴定方法外,用过氧化物酶标记或荧光标记的特异性免疫染色检验方法也有报道.20世纪90年代以来,分子生物学检测鉴定方法已得到大力发展.其中,聚合酶链式反应(PCR)以其快速,准确,高效成为研究较多的检测方法.国外有人在1994年针对牛,羊,绵羊,猪种布鲁氏菌设计不同的引物,应用PCR方法扩增在不同种间存在重复差异的布鲁氏菌保守重复基因单元IS711,以区别布鲁氏菌的种.1999年又有人报道了用PCR一步法快速检测软质干酪和牛乳中
2、的布鲁氏菌.2000年国外有人报道用联合PCR对感染牛的乳汁,鼻分泌物检测布鲁氏菌和结核菌.据报道位于IS711序列下游的26个碱基对(bp)基因是海洋哺乳动物的特殊标记.S19和RB51疫苗菌株已可以用PCR技术鉴定,S19的赤鲜醇敏感基因缺失702bp,所有其他布鲁氏菌都有1063bp,S19只有361bp.RB51菌株的编码葡胺聚糖酶的wboA基因发生了变异,在此基础上建立了RB51特异性PCR鉴定方法.PCR在布鲁氏菌的检测,鉴定方面越来越受到重视,以菌体基因组和基因组外的某些特定序列为检测基因,不仅可以确定布鲁氏菌的种,还可以确定属.此外,DNA探针,基因芯片方法等有望成为病原诊断的
3、实用方法.一些PCR技术已日趋成熟,PCR已被OIE确定为比较成熟的可以鉴别主要流行种的病原检测鉴定方法.脉冲凝胶电泳方法等已用于临床布鲁氏菌病原鉴定.2免疫学检测方法目前,应用比较成熟的免疫学检测方法主要有虎红平板凝集试验(RBT),试管凝集试验(SAT),补体结合试验(c,全乳环状反应(MRT).除SAT外,这些试验技术与国际上采用的技术是一致的.传统方法的凝集试验(包括SAT和平板凝集试验)在发达国家已基本上停止使用,取代的方法是缓冲布鲁氏菌抗原试验(BBAT),RBT.这2种试验除保持了快速凝集试验的高敏感性外,还由于采用低pH值而减少了非特异性反应.在国际贸易中BBAT,RBT是牛,
4、羊,猪种布鲁氏菌病诊断的指定试验,作为筛选试验用.CFr至今仍是布鲁氏菌病的重要诊断方法,是牛,羊,绵羊副睾种布鲁氏菌病诊断的国际贸易指定试验,作为确诊试验用.也是公认的高特异性试验,但是,由于试验操作繁杂,又难以标准化,并且敏感性降低,所以在实际防控中使用并不多.MRT由于使用非常方便,并且具有良好的敏感性,是奶牛布鲁氏菌病监测的主要方法.酶联免疫吸附试验(ELISA)是20世纪90年代发展起来的高敏感性的试验方法,而且操作更方便.ELISA既可以作为确定试验,又可以作为筛选试验.进入21世纪以来,世界动物卫生组织(OIE)已将其列人国家贸易指定试验.ELISA方法不但用于血清学诊断,还可用
5、于乳汁检查.猪种布鲁氏菌和绵羊副睾种布鲁氏菌已有成熟的ELISA诊断方法.关于ELISA的研究报道相当多,表明这是大家认为比较有前途的诊断方法.ELISA效果的关键在于抗原的选用.在已经标准化的牛布鲁氏菌病ELISA诊断中,目前OIE推荐的是使用光滑型脂多糖(S-LPS)抗原.据报道,从牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌获得了能表达高度免疫原性蛋白的基因,其生产的蛋白可用于鉴别S19和Rev.1疫苗免疫与自然感染.用绵羊副睾种布鲁氏菌表面抗原及用重组蛋白和单克隆抗体作为ELISA抗原,认为可获得良好的诊断结果.对于ELISA技术来说,除所使用的抗原对方法的敏感性特异性有决定性影响外,还受到对敏感性特异
6、性选择,当提高敏感性时,就会降低一定的特异性.由于凝集试验不适合绵羊副睾种布鲁氏菌病的诊断,琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验就成为绵羊副睾种布鲁氏菌病的常用诊断方法.荧光偏振试验(FPA)是OIE认为敏感性,特异性与ELISA相当的试验,美国于2004年将FPA确定为官方确证试验.有人用FPA检测牛种布鲁氏菌,并与其他血清学检测方法进行了比较.认为FPA是稳定的血清学方法,其敏感性和特异性在初步评价中分别为92.1%和99.4%,在后续的封闭试验中分别是963%和97.6%.通过双盲实验证实,荧光偏振法还可以据报道分别可蠢染和疫苗株S19免疫.菌病的敏感性和特异性口97.2%98.4%.养殖技术顾问201.10
