《药学专业毕业论文.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药学专业毕业论文.doc（19页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、分类 药植与鉴定 年 级 2007级 泻下药番泻叶中番泻苷A和番泻苷B的含量测定指 导 教 师： 申请学位级别：学 士 专业名称： 药学论文提交时间： 2011 年5 月 论文答辩时间： 2011年 6 月学位授予单位： 答辩委员会主席： 评阅人： 2011年 5 月目 录中文目录3英文目录4前 言4一.泻下药4二.番泻叶5三.番泻苷A和番泻苷B7实验部分11一.实验仪器与试剂11二 实验方法与结果11三.结果与讨论16参考文献.17致 谢18番泻叶中番泻苷A与番泻苷B的含量测定考察中文摘要目的：建立HPLC测定番泻总苷提取物中番泻苷A和番泻苷B的含量的方法。方法：采用Hypersil ODS
2、 C18柱(250 mm4.6 mm，5m)，以乙腈01三氟乙酸的水溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长为340nm。结果：番泻苷A在02188g到10940g范围内呈良好的线性关系(r=1000 0)，番泻苷B在0262g到1310g范围内呈良好的线性关系(r=09999)。结论：采用HPLC直接测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B的含量，方法简单快捷，精密度高、稳定性好，加样回收率高，结果可靠，可作为番泻总苷提取物质控制的方法。关键词：HPLC 泻下药 番泻苷A 番泻苷BCONTENT DETERMINATION OF SENNOSIDE A AND SENNOSIDE B IN SENNA LE
3、AF BY HPLCYang KeABSTRACT Objective： Because determining total sennoside by UV is very Complex and noteasier to bedone for the operationTo establish a HPLC method for deteming sennoside A and sennoside B in folium sennae extractMETHODS：A Hypersil ODS C18 (250 mm4.6 mm，5m) was usedThe mobile phase wa
4、s CAN-0.1 trinuomacetic acid，detection wavelength of sennoside A and sennoside B were set up at A1=340nmRESULTS：The linear range of sennoside A concentration was from 02188g to 10940 g(r=1000 0)，then linear range of sennoside B concentration was from 0262g to 1310g(r=0999 9)CONCLUSION：The methed is
5、simple high accuracy, good stability, add kind high efficiency and convenient accurate with a good replloducibility and can be used for determination of sennoside A and sennoside B in leaf of Cassia anguscifolia Vahl.Conclusion：The method is dependable accurate and easyKey words: HPLC：Purging doped；
6、sennoside A & sennoside B前 言一. 泻下药凡是能够攻积、逐水，引起腹泻，或润肠通便的药物，便称为泻下药。主要用于里实的症候，它的主要功能与用途，大致可以分为以下三点：一为通利大便，以排除肠道内的宿食积滞或燥屎；一为清热泻火，使实热壅滞通过泻下从而解除；一为逐水退肿，使水邪随着大小便排出，从而达到驱除停饮、消退水肿的目的。泻下药根据其泻下作用的强度，可以分为润下药、攻下药和峻下逐水药三大类，其中后者作用最强，攻下药次之，润下药则比较缓和。凡属宿食停积，腹部胀满，大便燥结所致的里实证，应当选择攻下药主之，并配伍以行气类药，来帮助排便，如三承气汤。根据近代研究泻下药类药物主
7、要具有下列药理作用：1.泻下作用：此类药物虽然成分有别，但都有比较明显的泻下作用，都可以通过不同的作用机理来刺激胃肠道粘膜从而使肠蠕动增加而致泻。例如芒硝因含硫酸钠，在肠内不容易被吸收，从而致使肠内渗透压升高，大量的水分保留在肠腔，使肠容积变大，肠管扩张，机械性的刺激肠壁从而引起肠道蠕动增加而致泻；牵牛子固含牵牛子甙，在肠液里面分解出牵牛子素刺激肠壁，使肠液的分泌增多并使之蠕动增强而致泻；芫花中的芫花素刺激肠壁便能够引起剧烈的水泻；火麻仁则是因为含有脂肪油可以润滑肠道，加之脂肪油在碱性肠液里面可以产生脂肪酸刺激肠壁使蠕动增加，促进排便。 2.利尿作用：芫花、大戟和大黄都有一定利尿的作用。大鼠灌
8、喂芫花煎剂可以使大鼠的尿量增加；麻醉犬静脉滴注芫花煎剂，尿量亦可明显的增加，大戟对大鼠的实验性腹水模型也有明显的利尿作用。 3.利胆作用：大黄有着清化湿热，消退黄疽的功能。通过实验证明，大黄能够促进胆汁的分泌，其以复方作用最为突出，如茵陈蒿汤、胆道排石汤等。 4.抗感染作用：甘遂、芫花、大戟和大黄对革兰氏阴性、阳性菌里面的多种细菌都有效，并且对某些病毒、真菌以及有些致病性原虫也都有抑制作用。二. 番泻叶番泻叶是一种全世界都比较广泛应用的导泻剂，它在国外的应用历史已经有千余年的历史。近年来番泻的果实也被用作导泻剂的研究开发以及应用，例如德国Kattwiga制造的番泻缓泻片(Laxherba S)
9、，每片里面含有尖叶番泻叶Alex andrian senna果干浸膏47mg-67mg，约相当于10mg番泻苷B，把其作为缓泻药应用于临床。德国Madaus制药厂上市的一种肠溶性导肠粒（Agiolax）（口服，不应嚼碎），是由车前子和番泻果苷组成，它用来调整妇女产后肠道的功能以及治疗术后患者、老年人因肠肌力下降引起的便秘1。番泻叶中的番泻苷就是泻下药中的一种。番泻叶是豆科植物狭叶番泻Cassiaangustifolia Vahl或尖叶番泻Cassia acutifolia Delile的干燥叶，收载于中国药典2005年版一部，主要用于热结积滞、便秘腹痛、水肿胀满的治疗，是临床上最常用的泻下药之
10、一2。狭叶番泻主要含有番泻苷A、B、C、D等；尖叶番泻主要含有番泻苷A、B、C等。根据文献报道，这些成分具有抗菌、致泻、止血、松弛肌肉和解痉等很多种作用。本课题在前期实验研究的基础上采用比较方便，操作性强的高效液相色谱法（HPLC）测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B的含量，为泻下药的进一步研究、开发提供实验参考。1.番泻的分布：狭叶番泻主要分布在热带非洲,我国的台湾、广西、云南都有引种和栽培。尖叶番泻主要分布在埃及,我国的台湾、海南、云南都有引种和栽培。2.番泻叶的化学成分：狭叶番泻叶主要含有番泻甙（sennoside)A、B C、D，大黄酚（crysophanol)，大黄素（emodin)，大黄
11、素甲醚（physcion)，3-甲基-8-申氧基-2-乙酰基-1，6-萘二酚-6-O-D-葡萄糖甙（tinnevellin glucoside)，小叶中含山奈酚（kaempferol)。尖叶番泻叶主要含有番泻甙A、B、C、D，大黄素，大黄素甲醚，大黄酚。嫩叶中含有山奈酚4。3.国内外番泻叶及其制剂的研究和应用3.1 国外番泻叶及其制剂的研究和应用根据文献对德国1991年上市应用的98种导泻剂进行统计的分析表明，含有番泻叶和其有效成分番泻苷的制剂大约占40%。日本最近研制出一种专利产品，将番泻叶粉或番泻苷、双歧杆菌ABS41冻干粉与适宜的辅料混合进行压片，再用羟丙基甲基纤维素苯二甲酸盐包衣制成的
12、肠溶片，作为泻下剂，有高效作用。USP（第23版）中收载了番泻叶流浸膏（Senna Fluidextract）、番泻叶糖浆（Senna Syrup）、总番泻苷片（Sennosides Tablets）。BP（1993年版）也收载了番泻叶流浸膏、番泻苷颗粒以及总番泻苷片等制剂，主要用来清洁肠道和进行便秘的治疗。Martindale（第31版）明确了番泻叶和其制剂的用法与用量。例如清洁肠道：在英国，成人单剂量口服总番泻苷按照番泻苷B计算为1mg/kg，大约72mg；在美国，按照总番泻苷计算，大约大于158mg。治疗便秘：在英国，口服总番泻苷按照番泻苷B计算，成人单剂量大约为15mg-30mg；6岁
13、以上儿童，剂量减半。3.2 国内番泻叶及其制剂的临床和应用将6mg-20mg番泻叶用沸水浸泡然后饮用，临床上主要用于泌尿系X线造影、腹部X线摄平片、乙状结肠镜等检查前全肠排空，对比较小和多发病灶的观察尤为清晰，同时还可以避免因为清洁灌肠引起的肠粘膜水肿和肠痉挛；还可以用于腹部手术患者作清洁肠道准备，开腹后肠管完全空虚，无胀气，无存便。对老年性及顽固性便秘、药物性便秘等使用番泻叶和其制剂大约3g-10g便可以发挥比较好的疗效。20g-30g番泻叶，单次开水浸泡饮用，观察对妇产科大、中手术后肠功能恢复的效果，表明有促进肠功能恢复的作用。以上的文献资料表明，番泻叶和其制剂近年来在国内、国外主要用作腹
14、部和肠道的各种影像检查前或手术前肠道的清洁准备；主要治疗各种便秘特别是老年性及顽固性便秘；对腹部术后肠功能的恢复也有着促进的作用。服用有效剂量番泻叶和其制剂具有安全、有效和不良反应小等特性，但是大剂量和（或）长期滥用，却会引起低血钾、可能的肠粘膜损伤、可能的药物敏感性降低等3。因此，番泻叶和其制剂的用量以软便排泄为度，短期用药可以增强它的安全性以及有效性。三.番泻苷A和番泻苷B1.来源 番泻苷A来源于豆科植物狭叶番泻(Cassia angutifolia Vahl.)的荚。 番泻苷B来源于豆科植物狭叶番泻(Cassia angutifolia Vahl.)的荚，蓼科植物掌叶大黄(Rheum p
15、almatum L.)的根茎。2.名称、结构和分子式番泻苷A 英文名：Sennoside A 分子量：739分子式C42H38O2CAS号（化学物质登录号）:81-27-6番泻甘A结构式番泻苷B英文名：Sennoside B分子量: 862.739 分子式: C42H38O20CAS号（化学物质登录号）：128-7-4番泻苷B结构式3.理化性质番泻苷A：为淡黄色结晶，熔点200240，旋光度-164(c=0.1，60%丙酮)，旋光度-24(c=0.2，70%二氧六环)。不溶于水、苯、乙醚、氯仿，微溶于甲醇、二苷醇-乙醚、丙酮、二氧六环，溶于碳酸氢钠水溶液。应在2-8C，避光保存，长时间在暴露在
16、空气中，含量会有所降低。番泻苷B： 属二蒽酮苷类，亮黄色棱柱状结晶(稀丙酮)。良好的针状结晶(水)。分解点180186，旋光度-100(c=0.2，70%丙酮)，旋光度-67(c=0.4，70%二氧六环)。溶解度情况类似(但稍好于)番泻苷A。4.作用番泻叶甙具有清热行滞,通便利水,排毒养颜的功能以及具有促进肠胃蠕动致泻的作用。并且具一定得抗菌功能,临床上可以用来治疗急性胰腺炎、菌痢、流行性出血热、胆囊炎、产后回乳等。也适用于药品,保健品等领域。主要用于热结积滞、便秘腹痛、水肿胀满等的治疗，是临床上几种最常用的泻下药物之一。番泻甙在小肠里面可以有部分吸收，后来经血流或胆汁进入大肠，但是主要则由小
17、肠直接进入大肠，在肠内细菌作用下进行水解、还原等变化成为大黄酸蒽酮或大黄酸蒽酮-8-葡萄糖甙。由于直接注入，大黄酸蒽酮的泻下作用不受影响，并且可发现肠内大黄酸蒽酮的生成量明显减少，因此认为大黄酸蒽酮才是番泻甙引起泻下的真正成分。另一方面，翻转小肠和结肠囊番泻甙能够阻止葡萄糖和Na的跨肠壁转运，表明抑制肠道对葡萄糖、钠和水的吸收，增加肠腔内容积继而刺激肠壁反射性地使小肠和结肠蠕动增强，也可能是其致泻的机制之一，并且小肠也是其泻下成分的作用部位。5、测定方法测定番泻叶中番泻苷A(sennoside A)、番泻苷B(sennoside B)的方法主要有分光光度法、薄层扫描法、高效毛细管电泳法、毛细管
18、区带电泳法。2005年版中国药典采用紫外分光光度法测定总番泻苷，这种方法经过提取、分离、水解等操作步骤，从而测得总番泻苷的含量，这个方法整个过程需要避光操作，操作过程比较复杂繁琐，而且操作条件要求苛刻。其他几种测定方法操作流程也比较长，而且操作也比较繁琐，条件较苛刻。因此本试验采用HPLC直接测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B的含量，方法简单快捷，精密度高、稳定性好，加样回收率高，结果准确可靠，可以用作番泻总苷提取物质控制的方法4-5。实验部分一. 实验仪器与试剂1、 仪器：BECKMAN 125型高效液相色谱仪。本系统由SYSTEM GOLD 125溶剂输送泵、SYSTEM GOLD 166检测
19、器（190360 nm）、Rheodyne 7725i手动进样阀、HT-330 柱温箱、BECKMAN色谱工作站、打印机等组成。RE -52型旋转蒸发仪 ( 上海亚荣生化仪器厂)；电子分析天平BP121S（北京Sartorius 天平有限公司）；UV1100型分光光度仪；2、 试剂番泻叶于药材市场采购，经过鉴定为豆科植物狭叶番泻Cassiaangustifolia Vahl的干燥叶。乙腈为色谱纯（HPLC级(Fisher公司)磷酸为化学纯（郑州恒瑞化工有限公司）甲醇（天津四友公司）水为高纯水二 实验方法与结果1、对照品溶液和供试品溶液的制备1.1 对照品溶液的制备称取经过真空干燥12 h的番泻
20、苷A与番泻苷B对照品适量，进行精密的称定，放置于10mL棕色量瓶中，加入50的甲醇进行溶解，并且定容至刻度，配制成含有番泻苷A 1.50mg/ml和番泻苷B 1.20mg/ml的混合溶液，摇匀，即可得到对照品溶液。1.2 供试品溶液的制备称取干燥的药材粉末大约1.0g，精密进行称定，放置于具塞锥形瓶中，精密加入50的甲醇30 mL，称取质量，超声处理35min(控制温度在40以下)，放冷后称取质量，用50的甲醇补足减失的质量，然后滤过，精密量取续滤液10mL放于25 mL量瓶中，用50的甲醇进行定容，用045m微孔滤膜滤过，即可得到供试品溶液。测定法：分别精密吸取上述溶液各4L，注入液相色谱仪
21、，测定，即得。2、 色谱条件【5】色谱柱：Hypersil ODS C18柱(250 mm4.6 mm，5m)；流动相：0.1%磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B；检测波长：340nm；体积流量：1.0ml/min；柱温:25；进样量：4l；理论塔板数按番泻苷B峰计算应不低于4000，此条件下番泻苷A、B与其它组分的分离度应不低于2.0。见图2.图2.番泻苷A、B对照品(A)和番泻叶提取液(B)的HPLC图谱3、 线性关系考察 对照品储备溶液的制备：精密称取番泻苷A的对照品10.85 mg，以40的乙醇制成每lmL含有108.5g的对照品溶液；精密称取番泻苷B的对照品13.15mg，以30的
22、乙醇制成每lmL含131.5g的对照品溶液。 分别精密移取番泻苷A的对照品储备溶液2、4、6、8、10mL，放置于l0mL的量瓶中，分别加40的乙醇至刻度，摇匀，制成不同浓度的一系列番泻苷A的对照品溶液，分别进样5L，每个浓度进样两针。分别精密移取番泻苷B的对照品储备溶液2、4、6、8、10mL放置于10 mL的量瓶中，分别加30的乙醇至刻度，摇匀，制成不同浓度的一系列番泻苷B的对照品溶液，分别进样5L，每个浓度进样两针。 经回归分析，得到番泻苷A的回归方程、相关系数为：A=802.85x-1.3862，=1.0000，线性范围为：0.2165g1.0991g。经回归分析，得到番泻苷B的回归方
23、程、相关系数为：A=713.12x-15048，r=0.9999；线性范围为：0.362g1.510g。4、 精密度试验精密吸取对照品溶液5L，连续进样5次，测定峰面积，结果番泻苷A和番泻苷B的峰面积的RSD分别为125和116，结果表明所用仪器的精密度良好。见表2 表2 精密度实验结果次数番泻苷A峰面积值番泻苷A峰面积均值RSD（%）番泻苷B峰面积值番泻苷B峰面积均值RSD（%）1408.6411.51.25228.3224.41.162411.6228.43417.0225.24410.4220.15402.9226.05、 稳定性试验按“1”中“1.2”项下制备供试品溶液，每隔2h精密吸
24、取5L注入高效液相色谱仪，测定样品12h的稳定性。番泻苷A的峰面积RSD为040；番泻苷B峰面积的RSD为040，结果表明供试品溶液在12 h内稳定。6、 重现性试验称取同一批样品，共5份，每份约1g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下方法制备，然后进样进行峰面积的测定。测定结果：番泻苷A和番泻苷B质量分数的RSD分别为1.22和1.56，结果表明该条件重现性好。见表3表3. 重现性试验结果试验次数番泻苷A峰面积值番泻苷A峰面积均值RSD（%）番泻苷B峰面积值番泻苷B峰面积均值RSD（%）1272.4274.61.22152.2149.61.562274.4152.23278.0150.04
25、273.6146.65268.6150.27、 加样回收率试验精密称取已经知道含量的样品0.027g，平分为9份，精密称定，放置于100 mL的量瓶中，分别按照样品含量的80、100、120精密加入番泻苷A、B对照品各3份，按照含量测定的方法下供试品溶液制备方法进行制备并进行检测，计算番泻苷A、B的回收率，结果见表4.5。表4. 番泻苷A回收率试验结果编号样品含量（mg）番泻苷A加入量（mg）测定量(mg)回收率（%）平均回收率（%）RSD （%）13.322.745.9897.1698.621.0623.362.786.1299.5933.382.746.0497.3243.363.486.
26、8499.9553.283.426.6698.8363.223.526.7299.9273.264.167.3698.4883.304.227.4497.9893.264.187.3698.32表5. 番泻苷B回收率试验结果编号样品含量（mg）番泻苷B加入量（mg）测定量(mg)回收率（%）平均回收率（%）RSD （%）110.348.7419.10100.27100.641.86210.428.9019.60103.10310.528.9419.3698.95410.4611.1221.68100.96510.2211.0821.40100.88610.0011.2421.66103.977
27、10.1613.1823.58100.25810.2613.7423.8498.85910.1613.6223.5898.57结果表明：该含量测定方法的加样回收率较好。8、 样品测定取10批药材粉末各约1g，进行精密称定，按照上述“二”项下“2”的色谱条件进行测定。测定结果见表6。表6. 10批药材测定结果(n=2)药材编号番泻苷A(%)番泻苷B(%)总量（%）10.9324.2825.21421.0042.8264.83030.7984.2245.02241.0063.8264.93251.1963.7524.94860.9103.8324.76270.9944.0225.01680.820
28、4.3785.19890.9343.9264.860100.7963.8824.678均值9.37038.95049.520三.结果与讨论1. 提取溶剂的选择 本次试验采用了95CH3OH，70CH3OH，50CH3OH，50CH3CH2OH，1NaHCO。等作为提取溶剂进行超声提取。结果表明：50CH3CH2OH和1NaHCO。提取效果最佳，但考虑到选择的流动相为甲醇一磷酸系统，并且考虑到番泻苷A、B在碱性条件下容易水解，所以最终选择50CH3CH2OH作为提取溶剂。2. 检测波长的选择 精密称番泻苷A对照品9.98mg。用甲醇溶解制备成含番泻苷A 0.998mg/ml的溶液，取番泻苷B对照
29、品储备液0.73mg/ml。另取空白甲醇溶液，于UV1100型分光光度仪上，在200400nm波长范围扫描绘制紫外吸收,通过UV扫描，番泻苷A和番泻苷B在340 nm及279 nm有最大吸收，但由于在279 nm处容易产生干扰，所以选择了340 nm作为本次试验的检测波长。3. 流动相的选择实验中曾经试用乙腈一水，乙腈一1冰醋酸，乙腈一l磷酸，甲醇一水，甲醇一1冰醋酸，甲醇一05磷酸系统作为流动相，同时考察了不同的比例(10：90；20：80；30：70；40：60；50：50)，结果发现用甲醇一05磷酸(40：60)系统分离效果最佳。4. 气泡的排除方法将管路的吸滤器放入装有流动相的储液瓶中
30、，逆时针转动排液阀90-180度，打开排液阀；设流速为5ml/min，冲洗3min后设流速为0停泵，将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。有时管路里面仍然有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。参考文献.1许均黎.番泻叶治疗老年人顽固性便秘51 例疗效观察J. 河北中西医结合杂志，1988，7（8）：1232.2 王玲花，董高怀，李晋魁. 番泻叶治疗氯氮平所致便秘89例观察J. 山西中医，1988,14(5):103. 田莉，刘圣，陈礼明，等.番泻叶导泻作用的药理研究概况J 基层中药杂志，2000，14（1）：53.4中国药典2000年版一部国家药典委员会编北京：化学工业出版杜肖培根，5肖小河2l世
31、纪与中药现代化J中国中药杂志，2000，25(2)：67-696 郑志华，祝晨馥HPLC测定大黄提取工艺产物番泻苷A的含量J中药材，2004，27(12)：950-951致 谢在本文的撰写过程中，导师崔明全给予了悉心的指导和关心，使我克服了众多困难终于完成了论文的撰写工作。导师们渊博的知识、严谨求实的治学态度及敬业精神，给我留下了深刻的印象，并将在我今后的人生道路上产生深远的影响，彭师姐在实验及论文写作过程中也给予了我大量的指导和帮助。在此论文完成之际，谨向崔导师和彭师姐致以崇高的敬意和衷心的感谢！在我攻读学士学位期间，得到了很多大学老师的悉心指导和帮助，他们渊博的知识、严谨治学风范、兢兢业业的敬业精神让我受益匪浅！ 也要感谢我的父母，感谢他们的辛勤培育。再一次感谢所有关心我、帮助我的人。
