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1、1,吸光光度法的灵敏度与准确度,一.灵敏度的表示方法:摩尔吸光系数(),A=b c=A/bc(Lmol-1cm-1),越大,灵敏度越高:1045104 为中等灵敏度;105为高灵敏度;104为低灵敏度.,2,例1 邻二氮菲光度法测铁(Fe)=1.0mg/L,b=2cm,A=0.38 计算 和,解：c(Fe)=1.0 mg/L=1.010-3/55.85=1.810-5mol/L,3,c=1.0mg/L=1.010-3 g/1000mL=1.010-4g/100mL,4,二.准确度仪器测量误差,光度计的读数误差一般为0.22(T),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的T引起的误差不同。,5
2、,浓度测量的相对误差与T(或A)的关系,实际工作中，应控制T在1070,A在0.151.0之间(调c,b,),6,8.4 显色反应与分析条件的选择,8.4.1 显色剂与显色反应,无机显色剂:SCN-Fe(SCN)2+H2O2 TiOH2O22+,有机显色剂:,7,有机显色剂,OO型：,ON型：,PAR,S型：,双硫腙,NN型：,丁二酮肟,邻二氮菲,磺基水杨酸,8,显色反应的选择,*灵敏度高，一般104*选择性好*显色剂在测定波长处无明显吸收。对照性好,max60 nm.*反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。*显色条件易于控制，重现性好。,9,8.4.2 显色条件的确定,c(R),c(R),c(
3、R),1.显色剂用量（c(M)、pH一定）,Mo(SCN)32+浅红Mo(SCN)5 橙红Mo(SCN)6-浅红,Fe(SCN)n3-n,10,2.显色反应酸度（c(M)、c(R)一定）,pH1pHpH2,pH,11,邻二氮菲亚铁反应完全度与pH的关系,Fe2+3R,c(R)R=10-4molL-1,31021.3,12,pH38为适宜的酸度范围,13,3.显色温度及显色时间,另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等,T1(),T2(),t(min),A,14,8.4.3 干扰及消除,测Co2(含Fe3+):(掩蔽法),1.化学法,15,测Co2:(生成络合物性质不同),如不能通过控制酸度和
4、掩蔽的办法消除干扰，则需采取分离法。,测Fe3:(控制pH),16,2.物理法,选择适当的测定波长,17,1.仅络合物有吸收，溶剂作参比。如 phenFe2+标准曲线2.待测液也有吸收，被测液作参比。如 测汽水中的 Fe3.显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液作参比 例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的 Fe，参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。4.干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时：1）掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比.2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比.,-选择适当的参比溶液,18,8.5 吸光光度法的应用,1.单一组分测定,1)金属离子:Fe-phen,Ni-丁二酮肟,
5、Co-钴试剂,2)磷的测定:DNA中含P9.2%,RNA中含P9.5%,可得核酸量.,H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O,磷钼黄(小),磷钼(V)蓝(大),19,3)蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等4)氨基酸测定茚三酮(紫色化合物)5)水质检测:NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+-6)药物含量测定比吸光系数定量；荷移光谱法测定.7)紫外吸收(UV):NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。,20,2.多组分的测定,xl1,eyl1
6、,exl2,eyl2由x,y标液 在1,2处分别测得,在1处测组分x,在2处测组分y,b)在1处测组分x;在2处测总吸收,扣除x吸收,可求y,c)x,y组分不能直接测定A1=exl1bcx+eyl1bcy(在1处测得A1)A2=exl2bcx+eyl2bcy(在2处测得A2),21,3.光度滴定,22,典型的光度滴定曲线,依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。,23,4.络合物组成的测定,(1)摩尔比法:固定cM,改变cR,24,(2)等摩尔连续变化法:,25,表观形成常数的测定(设M、R均无吸收),c(M)=c(R)=c,MmRn型?,26,5.一元弱酸离解常数的测定 p33
7、0,HL HL,KaH+L/HL,高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得AHLHLc(HL)；低酸度下，几乎全部以L存在，可测得AL Lc(HL).代入整理：,或,配制一系列c相同,pH不同的溶液,测A.,27,MO吸收曲线,由每份溶液的一对pH、A，可求得一个Ka,取平均值即可.,28,MO离解常数的测定作图法,29,6.双波长分光光度法消除干扰(不要求),在2，A2=Ax2+Ay2在1，A1=Ax1+Ay1,A=A2-A1=Ax2+Ay2(Ax1+Ay1)=Ax2 Ax1=Ax,Ay2 Ay1,Ax=(x2 x1)bcx消除了y的干扰,30,双波长分光光度法消除浑浊背景干扰,1 2,A 1-
8、A 2=A Ac,例 牛奶中微量Fe的测定,31,7.导数分光光度法(不要求),A图,混合物导数光谱,0,1,2,3,4,32,常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定,1.氢氯噻嗪.2.硫酸双肼肽嗪3.盐酸可乐定4.常药降压片,33,肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取,方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用6的HClO4稀释，然后用GDX100大孔树脂萃取，用二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，40挥干，剩余物用0.1molL-1NaOH4mL溶解后，紫外导数光谱测定。,a.空白肝普通光谱b.2.5 mg/L敌鼠溶液的普通光谱c.空白肝二阶导数光谱d.2.5 mg/L敌鼠溶液的二阶导数光谱,34,8.1 了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系.吸收曲线定性分析的基础。定量分析的基础朗伯-比尔定律：A=bc=-lgT 式中各参数的物理意义，定量计算。8.2 了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基本部件。8.3 灵敏度的表示摩尔吸光系数的意义和计算；准确度适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。8.4 显色反应及条件的确定:显色剂用量、酸度、时间、温度、干扰及消除。8.5 应用:单一组分测定示例、多组分测定、光度滴定、络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。,第八章 小 结,35,新年快乐！,
