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ICC免疫细胞化学染色原代培养海马细胞神经元的鉴定 将大鼠海马神经元细胞终浓度接种于铺有盖玻片并经多聚赖氨酸包被好的6孔板中,每孔2.5ml,培养条件同上,培养至第8天,用免疫组化法鉴定。 步骤如下: 1.吸弃培养液用PBS冲洗3遍,冷丙酮固定10min。 2.PBS冲洗3遍,3%H2O2封闭内源性过氧化物酶,室温下10min。 3.PBS冲洗3遍,0.3%Triton破膜15min,PBS洗3遍。 4.10%羊血清封闭,室温10min,吸弃上清。 一抗37反应1h,设空白对照,以PBS代替一抗 5.PBS洗3*5min,二抗室温下18min,PBS洗3*5min,SABC复合物37,18min。 6.PBS洗3*5min,DBA显色。镜下观察,自来水终止。 DBA稀释度,苏木素复染,95%乙醇脱水,二甲苯透明20min,中性树胶封固,风干,镜下观察。 注:PBS用0.01M的。