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1、实验一 蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定实验一 蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定 一、实验目的与要求 1. 掌握蛋白质的两性解离性质； 2. 熟练掌握测定蛋白质等电点的基本方法。 二、实验原理 蛋白质是由氨基酸组成的高分子化合物。虽然大多数的-氨基和-羧基成肽键结合，但仍有N末端的氨基和C末端的羧基存在，同时侧链上还有一些可解离基团。因此，蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。调节蛋白质溶液的pH，可使蛋白质带上正电荷或负电荷；在某一pH时，其分子中所带的正电荷和负电荷相等，此时溶液中蛋白质以兼性离子形式存在。在外加电场中蛋白质分子既不向正极移动也不向负极移动，此时溶液的pH称为该蛋白质的等
2、电点，蛋白质的溶解度最小。不同的蛋白质，因氨基酸的组成不同有不同的等电点。 三、实验材料、试剂与仪器 1. 材料与试剂 NaOH、HCl、乙酸、溴甲酚绿、酪蛋白、精密pH试纸等。 0.5 %酪蛋白溶液：0.5 g酪蛋白，先加入几滴1 mol/L的NaOH使其湿润，用玻璃棒搅拌研磨使成浆糊状，逐滴加入0.01 mol/L的NaOH使其完全溶解后定容到100 mL. 酪蛋白乙酸钠溶液：将0.25 g酪蛋白加5 mL 1 mol/L的NaOH溶解，加20 mL 水温热使其完全溶解后，再加入5 mL 1 mol/L 的乙酸，混合后转入50 mL的容量瓶内，加水到刻度，混匀备用； 0.01 %的溴甲酚绿
3、溶液：将0.01 g溴甲酚绿溶解于100 mL 含有0.57 mL 0.1 mol/L NaOH的水中。该指示剂的变色范围是：酸性为黄色，pH 5.4为蓝色； 0.02 mol/L 的HCl溶液：将0.8 mL 浓盐酸用蒸馏水稀释到480 mL即可； 0.02 mol/L 的NaOH溶液：将0.8 g NaOH溶解于100 mL 水中，最终加入到1000 mL； 0.1 mol/L 的乙酸溶液：将1 mL 冰醋酸用水稀释到170 mL； 0.01 mol/L 的乙酸溶液：将0.1 mL 冰醋酸用水稀释到170 mL； 1 mol/L 的乙酸溶液：1 mL冰醋酸加水到17 mL 即可。 2. 仪
4、器 试管、滴管、移液管、pH试纸等。 四、实验方法与步骤 1. 蛋白质的两性反应 1）取一支干净的试管，加入20滴0.5 %的酪蛋白溶液，逐滴加入0.01 %的溴甲酚绿溶液，充分混合，观察溶液的颜色并解释。 2）逐滴加入0.02 mol/L 的HCl，随加随摇动试管，直到出现明显的沉淀为止，用精密pH 试纸测溶液的pH，观察溶液的颜色变化。 3）继续加入0.02 mol/L 的HCl，观察沉淀的变化和溶液颜色的变化。 4）逐滴加入0.02 mol/L 的NaOH到上面的溶液中，使溶液的pH接近中性，观察沉淀是否形成。 5）继续滴加0.02 mol/L 的NaOH，观察沉淀的变化。 2. 酪蛋白
5、等电点的测定 1）取9只试管分别编号19. 2）按下表向每管中加入试剂。注意，每种试剂加完后，要振荡试管。 3）试剂全部加完后，静置20 min。 4）观察每管内溶液的混浊度，用“+”、“-”表示沉淀的多少。 5）判断酪蛋白的pI是多少？ 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 水/mL 2.4 3.2 2.0 3.0 3.5 1.5 2.75 3.38 1 mol/L HAc/mL 1.6 0.8 0.1mol/L HAc/mL 4.0 2.0 1.0 0.5 0.01 mol/L 酪蛋白醋酸HAc/mL 2.5 1.25 0.62 钠溶液/mL 1 1 1 1 1 1 1 1 1 溶液最终的pH 3.5 3.8 4.1 4.4 4.7 5.0 5.3 5.6 5.9 沉淀多少 五、思考题 1. 何谓蛋白质的等电点？在等电点时蛋白质的溶解度最低，为什么？ 2. 本实验中，根据蛋白质的何种性质测定其等电点？ 3. 测定蛋白质等电点为什么应在缓冲液中进行？
