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1、实验二抑制剂对酶促反应速度的影响 实验二 抑制剂对酶促反应速度的影响 Effects of Inhibitors on the Velocity of Enzymatic Reactions 一、实验原理 凡能降低酶活性甚至使酶丧失活性的物质，称为酶的抑制剂。酶的特异性抑制剂可分为可逆性和不可逆性两类。可逆性抑制剂又可分为竞争性和非竞争性两类。竞争性抑制剂的作用特点是该酶的Km值增大，但最大的反应速率不变，而非竞争性抑制剂的作用特点是不影响底物与酶结合，故其Km值不变，而能降低其最大反应速度。 本实验中观察无机磷酸盐对碱性磷酸酶的抑制作用，用磷酸苯二钠法测酶活性，使各管底物浓度不同，其他条件相
2、同，除各管都加有同样量Na2HPO4外，实验操作完全同前一实验。计算结果，画出曲线，判定Na2HPO4对碱性磷酸酶的影响。 二、实验操作 管号 0.04mol/L基质液 水 0.04mol/L Na2HPO4 (mL) 碳酸盐缓冲液含(mL) 酶液 酚标准应用液 0.5%铁氰化钾 1 0.10 1.30 0.10 1.50 0.10 2.00 2 0.20 1.20 0.10 1.50 0.10 2.00 3 0.30 1.10 0.10 1.50 0.10 2.00 4 0.40 1.00 0.10 1.50 0.10 2.00 5 0.80 0.60 0.10 1.50 0.10 2.00
3、 6 1.00 0.40 0.10 1.50 0.10 2.00 S 1.50 1.50 0.10 2.00 B 1.40 0.10 1.50 0.10 2.00 摇匀，37保温5min 充分摇匀，37准确保温15min 充分摇匀，室温放置10min 在510nm，以B管调零时读取各管光密度值。 计算并作图要领同实验一，求出Km值，判定结果，Na2HPO4属于哪种抑制剂。 三、思考题 联系实验结果，讨论抑制剂对酶活性的影响。 四、英语关键词 最大反应速度：Maximum velocity 米曼式方程：MichaelisMenten Equation 特性常数：Characteristic constant 绘图：Plot 直线：Straight Line 截距：Intercept 斜率：Slope 磷酸苯二钠：Disodium Phenylphosphate 4-氨基安替比林：4-Aminoantipyrine
