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1、实验四 槐米中芸香苷的提取分离与鉴定实验四 槐米中芸香苷的提取分离与鉴定 芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12% 16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 槐花米
2、中主要化学成分的结构及性质： 1. 芦丁(Rutin) 淡黄色细小针状结晶，mp.174178(含三分子结晶)，188(无水物)。 溶解度： 水：1:100(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:650(冷)，1:60(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 2. 槲皮素(Quercetin) 即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313314(含2分子结晶水)，316(无水物)。 溶解度： 乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热) 可溶于甲醇、
3、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3. 皂甙 粗品为白色粉末，mp.210220(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。 (1) 白桦脂醇(Betulin) 无色针晶，mp.251252。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。 (2) 槐二醇(Sophoradiol) 无色针晶，mp.219220或224。能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。 4. 槐属甙(Sophoricoside) mp.298。易溶于热乙醇、热醋酸、吡啶、稀
4、碱液；难溶于水；冷乙醇、冷醋酸；难溶于乙酸乙酯、丙酮中。 5. 槐属黄酮甙(Sophoraflavonoloside) mp.207208。可溶于热水及乙醇，难溶于冷水、乙酸乙酯、丙酮，不溶于乙醚等低极性有机溶剂。 6. 槐属双甙(Sophorabioside) 针状结晶，mp.156160(含结晶水)，无水物 mp.248。易溶于吡啶，能溶于热乙醇、丙酮，稍溶于热水，不溶于弱极性有机溶剂。 一、实验目的 1. 掌握酸碱法提取黄酮甙的一般原理及方法。 2. 掌握黄酮甙的鉴定方法。 3. 学会纸色谱的操作技术。 二、实验原理 1. 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸
5、性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐花米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。 2. 利用芦丁可被稀酸水解，生成甙元和糖，通过颜色反应，薄层层析及纸层析进行检识和确认芦丁和槲皮素。 三、实验内容 芦丁的提取 1. 于 1000m1烧杯中加 500m1蒸馏水加热煮沸后，称取 40g槐花米粗粉，投人沸水中，直火加热煮沸 5分钟，在搅拌下小心加入石灰乳至 pH 89，加热保持微沸 20-30分钟，趁热用棉花过滤，滤渣再用调pH 89的石灰水 200m1煮 10分钟，趁热过滤，合并两次滤液，稍冷 (60-70)用浓盐酸调至
6、pH23左右，放置过夜 2. 减压过滤，沉淀用水洗二次，然后用少量乙醇洗二次，抽干，称重_g，即得芦丁粗品。 芦丁的精制 1. 将芦丁粗品置烧杯中，按(1：200)加蒸馏水，加热煮沸数分钟，使其充分溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜； 2. 减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀 2-3次，抽干，即得芦丁精品，称重_g，计算提取率_ 芦丁的水解 1. 取精制芦丁2 g，尽量研细，置于 500ml圆底烧瓶中，加 2%硫酸 250ml，于直火加热微沸回流 1.5小时，放冷 2. 减压过滤，所得沉淀即为槲皮素，称重_g；滤液保留作糖部分的鉴定。 3. 取水解母液约20ml，小心地用 BaOH细粉中和至近中性，自然
7、过滤，滤液蒸干，加23ml乙醇溶解，作为糖的供试液。 检识 1. 理化鉴别 . 莫氏(Molish)反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加 2ml乙醇溶解，再加10% -萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。 (2). 盐酸-镁粉反应 取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。 (3). 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加 1%醋酸镁甲醇溶液两滴，黄酮类应呈黄色荧光。紫外灯下
8、观察荧光的变化，并记录现象。 (4). 三氯化铝纸片反应 取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%三氯化铝甲醇溶液两滴，黄酮类化合物应呈鲜黄色。紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。 2. 色谱鉴定 芦丁和槲皮素的纸色谱 支持剂：新华层析滤纸 点 样：1. 自制精制芦丁乙醇液 2. 自制精制槲皮素乙醇液 对照品：3. 芦丁标准品乙醇液 4. 槲皮素标准品乙醇液 展开剂： 正丁醇醋酸水(4:1:5) (上层)或15%醋酸水溶液 显 色：(1) 可见光下显黄色斑点，紫外光下观察荧光斑点。 (2) 用氨熏后再观察。 (3) 喷1%三氯化铝试液后再观察。 糖的纸色谱鉴定 支持剂：新华层析滤纸 点 样：自制糖的供试品溶液及葡萄糖、鼠李糖对照品 展开剂：正丁醇醋酸水(4:1:5) (上层) 显色剂：苯胺邻苯二甲酸试剂 画出图谱，计算Rf值。
