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1、微生物实验 实验五 微生物对生物大分子的分解利用实验五 微生物对生物大分子的分解利用 微生物在生长繁殖过程中，需从外界环境吸收营养物质。外界环境中的小分子有机物可被微生物直接吸收，而大分子有机物则不能被微生物直接吸收，它们须经微生物分泌的胞外酶将其分解为小分子有机物，才能被吸收利用。例如生物大分于中的淀粉、蛋白质、脂肪等须经微生物分泌的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶分别分解为糖、肤、氨基酸、脂肪酸等之后，才能被微生物吸收而进入细胞。 不同微生物分解利用生物大分子能力各有不同。只有那些能够产生并分泌胞外酶的微生物才能利用大分子有机物。 分别介绍淀粉水解、油脂水解、明胶液化和石蕊牛乳等试验的基本
2、原理。 1淀粉水解试验 某些细菌能够分泌淀粉酶(胞外酶)，将淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。淀粉被水解后遇碘不再变蓝色。 2、油脂水解试验 某些细菌能够分泌脂肪酶(胞外酶)，能将培养基中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。所产生的脂肪酸，可通过预先加入油脂培养基中的中性红加以指示指示范围pH 68(红)-pH 80(黄)。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，培养基中出现红色斑点。 3明胶液化试验 明胶是一种动物蛋白。明胶培养基本身在低于20时凝固，高于25则自行液化。某些细菌能够产生蛋白酶(胞外酶)，将明胶水解成小分子物质，因此培养后的培养基即使在低于20的温度下，明胶也不再凝固，而由原来的固体状态
3、变为液体状态。 4石蕊牛乳试验 牛乳中主要含有乳糖和酪蛋白。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解利用。牛乳中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部褪色变白。 细菌对牛乳的作用有以下几种情况： (1)产酸 细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。 (2)产碱 细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。 (3)胨化 细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛乳变成清亮透明的液体。 (4)酸凝固 细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固。 (5)凝乳酶凝固 细菌产生凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，此时石蕊呈蓝色或不变色。 (6
4、)还原 细菌生长旺盛时，使培养基氧化还原电位降低因而石蕊被还原而褪色。 实验操作 (一)淀粉水解试验 (1)将装有淀粉培养基的锥形瓶置于沸水浴中融化，然后取出冷却至50左右，即倾入培养皿中，待凝固后制成平板。 (2)翻转平板使底皿背面向上，用记号笔在其背面玻璃上划成两半，半用于接种枯草芽孢杆菌作为阳性对照菌，另一半用于接种试验菌大肠杆菌或产气肠杆菌。接种时用接种环取少量菌在平板两边各划“十”字、如图7-1-1。 (3)将接完种的平板倒置于37恒温箱中，培养24h。 (4)观察结果时，可打开皿盖，滴加少量碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。如菌体周围出现无色透明圈，则说明淀粉已被水解
5、。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的强弱。 淀粉水解实验接种示意图 1、枯草芽孢杆菌；2、试验菌 (二)油脂水解试验 (1)将装有油脂培养基的锥形瓶置于沸水浴中融化，取出并充分振荡(使油脂均匀分布)，再倾入培养皿中，待凝固后制成平板。 (2)翻转平板使底皿背面向上，用记号笔在其背面玻璃上划成两半。一半用于接种金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌，另一半用于接种实验菌大肠杆菌或产气肠杆菌。接种时用接种环取少量菌在平板两边各划线接种。 油脂水解试验接种示意图 1、金黄色葡萄球菌；2、试验菌 (3)将接种完的平板倒置于37恒温箱中，培养24h。 (4)观察结果时，注意观察平板上长菌的地方，如出现红色斑点，
6、即说明脂肪已被水解，此为阳性反应。 (三)明胶液化试验 (1)用穿刺接种法分别接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。 明胶穿刺接种液化后的各种形状 1、火山口状；2、芫箐状；3、漏斗状；4、囊状；5、层状 (2)接种后置于20恒温箱中，培养48h。 (3)观察结果时，注意培养基有无液化情况及液化后的形状。 注意：如细菌在20时不能生长，则必须培养在所需的最适温度下，观察结果时需将试管从温箱中取出后，置于冰浴中，才能观察液化程度。 (四)石蕊牛乳试验 (1)分别接种粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌于二支石蕊牛乳培养基中，置于37恒温箱中培养7天。另外保留一支不接种石蕊牛乳培养基作对照。 (2)观察结果时，注意牛乳有无产酸、产碱、凝固或胨化等反应。 注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化各现象是连续出现的，往往观察某种现象出现时，另一种现象已经消失了。
