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1、水中细菌总数的测定水中细菌总数的测定 一、目的要求 l学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。 2了解水源水的平板菌落计数的原则。 二、基本原理 本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。 三、器材 l培养基 肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。 2.仪器或其他用具 灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。 四、操作步骤 l水
2、样的采取 (1)自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 (2)池水、河水或湖水 应取距水面l015cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 2细菌总数测定 (1)自来水 用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。 分别倾注约15mL己溶化并冷却到45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。 另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空
3、自对照。 培养基凝固后，倒置于37 温箱中，培养24h，进行菌落计数。 两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数。 (2)池水、河水或湖水等 稀释水样 取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取lml水样注入第一管9ml灭菌水内、摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。 一般中等污秽水样，取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3 、10
4、-4三个连续稀释度。 自最后三个稀释度的试管中各取lmL稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。 各倾注15ml已溶化并冷却至45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。 凝固后倒置于37培养箱中培养24h。 3菌落计数方法 (1)先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 (2)首先选择平均菌落数在30300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合
5、此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数(见表26-1，例1)。 (3)若有两个稀释度的平均菌落数均在30300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数(见表26-l，例2及例3)。 (4)若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数(见表26-l，例4)。 (5)若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数(见表26-l，例5)。 (6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数(见表26-1，例6)。 五、实验报告 1结果 自来水 池水、河水或湖水等 2思考题 从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？ 你所测的水源水的污秽程度如何？ 国家对自来水的细菌总数有一标准，那么各地能否自行设计其测定条件来测定水样总数呢？为什么
